各杂质各约5yg的溶液，作为系统适用性溶液，要求替格 瑞洛峰与转位产物峰的分离度应大于4.0。
[0121 ]步骤二，供试品溶液取替格瑞洛原料药样品约25mg，精密称定，置25mL容量瓶中， 加溶剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(约lmg/mL)。
[0122] 步骤三，对照溶液精密量取适量替格瑞洛对照品，用35%乙腈溶液稀释制成每lml 中约含5yg的溶液作为对照溶液（1 )，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用35 %乙腈溶液稀释至 刻度，摇匀，作为对照溶液(2)，对照溶液(2)作灵敏度检查，要求主成分峰信噪比应大于10。
[0123] 步骤四，精密量取系统适用性溶液10μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图，替格瑞洛 峰与转位产物峰的分离度应大于4.0;精密量取对照溶液(2) 10μ1，注入液相色谱仪，调节检 测灵敏度，主成分峰信噪比应大于10;精密量取供试品溶液与对照溶液（1)各1〇μ1，注入液 相色谱仪，记录色谱图。
[0124] 步骤五，根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图，经过计算得到供 试品溶液中有关物质的含量；
[0125] 其中，液相色谱条件如下：
[0126] 色谱柱 Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(150X4.6mm, 5μπι，Ρ/Ν:993967-902)；
[0127] 流动相流动相A: lOmmol/L磷酸盐缓冲液(取二水合磷酸二氢钠约1.56g，加水 900ml使溶解，用磷酸调节pH值至3.0 ± 0.2，加水稀释成1000ml)
[0128] 流动相B:乙腈 [0129]梯度洗脱程序：
[0132] 计算公式：
[0133] 杂质含量（％)=AXRRF/(ArXN)X100
[0134] 式中:A为供试品溶液中杂质峰面积；
[0135] Ar为对照溶液中主成分峰面积；
[0136 ] N为对照溶液稀释倍数；
[0137] RRF为杂质相对响应因子。
[0138] 应用此方法对六个批次的替格瑞洛原料药进行了检测，结果如下表所示：
[0139] 表6:不同批次的替格瑞洛产品的有关物质测定情况
[0142] 实施例2、检测方法
[0143] 步骤一，系统适用性溶液:称取替格瑞洛、羟基物、氨基物、亚砜1和亚砜2、砜、光降 解物、五元环羟基物、转位产物、乙酯化物、过程中间体3，同置于25ml量瓶中，加水适量使溶 解，制成每lml中含替格瑞洛0.2mg、各杂质各约5yg的溶液，作为系统适用性溶液，要求替格 瑞洛峰与转位产物峰的分离度应大于4.0。
[0144] 步骤二，供试品溶液取替格瑞洛原料药样品约25mg，精密称定，置25mL容量瓶中， 加溶剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(约lmg/mL)。
[0145] 步骤三，对照溶液精密量取适量，用35%乙腈溶液稀释制成每lml中约含5yg的溶 液作为对照溶液（1 )，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用35%乙腈溶液稀释至刻度，摇匀，作为 对照溶液(2)。对照溶液(2)作灵敏度检查，要求主成分峰信噪比应大于10。
[0146] 步骤四，精密量取系统适用性溶液10μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图，替格瑞洛 峰与转位产物峰的分离度应大于4.0;精密量取对照溶液(2) 10μ1，注入液相色谱仪，调节检 测灵敏度，主成分峰信噪比应大于10;精密量取供试品溶液与对照溶液（1)各1〇μ1，注入液 相色谱仪，记录色谱图。
[0147]步骤五，根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图，经过计算得到供 试品溶液中有关物质的含量；
[0148]其中，液相色谱条件如下：
[0149] 色谱柱 Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(150X4.6mm, 5μπι，Ρ/Ν:993967-902)；
[0150] 流动相流动相A: lOmmol/L磷酸盐缓冲液(取二水合磷酸二氢钾约1.56g，加水 900ml使溶解，用磷酸调节pH值至4.0 ± 0.2，加水稀释成1000ml)
[0151] 流动相B:甲醇
[0152] 梯度洗脱程序：
[0155] 有关物质含量的计算公式：
[0156] 杂质含量（％)=AXRRF/(ArXN)X100
[0157] 式中:A为供试品溶液中杂质峰面积；
[0158] Ar为对照溶液中主成分峰面积；
[0159] N为对照溶液稀释倍数；
[0160] RRF为杂质相对响应因子。
[0161] 实施例3、含量检测方法
[0162] 步骤一，系统适用性溶液:称取替格瑞洛、羟基物、氨基物、亚砜1和亚砜2、砜、光降 解物、五元环羟基物、转位产物、乙酯化物、过程中间体3，同置于25ml量瓶中，加水适量使溶 解，制成每lml中含替格瑞洛0.2mg、各杂质各约5yg的溶液，作为系统适用性溶液，要求替格 瑞洛峰与转位产物峰的分离度应大于4.0。
[0163] 步骤二，供试品溶液取本品约25mg，精密称定，置25mL容量瓶中，加溶剂超声溶解 并稀释至刻度，摇匀，即得(约lmg/mL)。
[0164] 步骤三，对照溶液精密量取适量，用35 %乙腈溶液稀释制成每lml中约含5yg的溶 液作为对照溶液（1 )，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用35%乙腈溶液稀释至刻度，摇匀，作为 对照溶液(2)。对照溶液(2)作灵敏度检查，要求主成分峰信噪比应大于10。
[0165] 步骤四，精密量取系统适用性溶液10μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图，替格瑞洛 峰与转位产物峰的分离度应大于4.0;精密量取对照溶液(2) 10μ1，注入液相色谱仪，调节检 测灵敏度，主成分峰信噪比应大于10;精密量取供试品溶液与对照溶液（1)各1〇μ1，注入液 相色谱仪，记录色谱图。
[0166] 步骤五，根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图，经过计算得到供 试品溶液中有关物质的含量；
[0167] 其中，液相色谱条件如下：
[0168] 色谱柱 Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(150X4.6mm, 5μπι，Ρ/Ν:993967-902)；
[0169] 流动相流动相A: lOmmol/L磷酸盐缓冲液（取二水合磷酸二氢铵约1.62g，加水 900ml使溶解，用磷酸调节pH值至3.5 ± 0.2，加水稀释成1000ml)
[0170] 流动相B:甲醇 [0171]梯度洗脱程序：
[0175] 有关物质含量的计算公式：
[0176] 杂质含量（％)=AXRRF/(ArXN)X100
[0177] 式中:A为供试品溶液中杂质峰面积；
[0178] Ar为对照溶液中主成分峰面积；
[0179] N为对照溶液稀释倍数；
[0180] RRF为杂质相对响应因子。
【主权项】
1. 一种替格瑞洛的有关物质的含量检测方法，包括以下步骤： (1) 系统适用性溶液制备:取羟基物、氨基物、亚砜1和亚砜2、砜、光降解物、五元环羟基 物、转位产物、乙酯化物、过程中间体3及替格瑞洛配制成系统适用性溶液； (2) 供试品溶液制备:取替格瑞洛原料药配制成供试品溶液； (3) 对照溶液的制备:取供试品溶液配制成对照溶液； (4) 分别将系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，得到色谱图； (5) 根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图