可用于诊断间日疟和/或恶性疟的试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明主要涉及试剂盒。具体而言，本发明涉及可用于检测间日追原虫感染和/ 或恶性追原虫感染的试剂盒，属于医疗器械领域。
【背景技术】
[0002] 追疾仍然是全球公共卫生的紧要问题，每年死亡率达0. 7 - 2. 7百万，其中75% W 上为非洲儿童。在过去的35年，追疾的发病率增长了 2-3倍。在1955年，世界卫生组织 (WHO)开始了一项通过应用氯哇进行临床治疗和应用DDT (二氯二苯Η氯己焼)控制蚊群而 根除追疾的宏大计划。在20世纪60年代后期逐步停止，送项计划虽然在全世界许多国家 引起重要且持续的疾病负担减轻。然而，在许多国家追疾仍有复发，其主要是由于耐药寄生 虫的出现和传播导致的。耐杀虫剂蚊子的出现，人口密度的增加（自1963年，世界人口已经 翻了一番)，全球变暖(送种带菌者扩散至W前没有到达的范围)，持续贫穷，政治动荡，W及 由于传染性疾病导致的生产力的损失，所有的送些因素破坏了治疗和控制追疾的稳定的公 共卫生基础的维持。
[0003] 追疾寄生虫属于追原虫属，能后感染许多脊椎动物宿主，包括多种非人类灵长类 物种。四种追原虫属寄生于人类：恶性追原虫（Plasmodium, fal? ciparum)、 Η 日 追原虫（Ρ. malariae)、 卵形 追原虫（Ρ. ovale) 和间日 追原虫 (P. vivax)。其中，恶性追原虫和间日追原虫分别与大部分追疾的发病率和死亡率相关。
[0004] 由于追疾治疗药物的特殊性，精确快速的诊断不仅能及时发现并治疗追疾患者， 大大降低病死率，也能通过早期排除追疾，及时挽救感染了其它传染性疾病患者的生命。W 此同时，精确快速的早期诊断也是对追疾实时流行病监测和控制的必要手段。到目前为止， 对可疑病人采血制作厚薄血片经染色后显微镜检查法(简称镜检法）一直被认为是追疾诊 断的"金标准"，其优点是费用低，能鉴定追原虫虫种，但是也存在着缺陷，即需要非常专业 的检验人员，当原虫密度较低时，可出现假阴性，引起误诊或漏诊，同时还需要显微镜、染色 液等一些辅助设备。随着临床机构，特别是一些现代化程度高的医院，由于检验人员更依赖 仪器设备，对镜检能力的掌握明显下降；而在一些欠发达地区，由于种种原因，未能配备镜 检相关的设备和试剂。送些因素限制了临床对追疾快速有效的诊断。因此，研究新的追疾 快速诊断方法成为目前研究的热点。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供新的用于诊断追疾，特别是可用于诊断间日追、恶性追或 混合追，或者用于区分间日追、恶性追与混合追的试剂盒。
[0006] 本发明人提供了 8条多肤。令人惊奇的是，本发明人发现，虽然所述8条多肤单独 诊断追疾时的灵敏度均在33%~84. 7%之间，远远未达到作为检测工具的要求，但在W受试 者来源的生物样本是否对所述8条多肤中的至少两组或两组W上有响应作为判定受试者 是否已被追原虫感染的指标的情况下，却可高达98%的灵敏度（且假阳性率低至0. 8%) 诊断追疾。
[0007] 此外，本发明人还发现，通过将上述8条多肤与其他2条多肤的组合作为检测分 子，不仅能够诊断追疾，还能进一步诊断间日追、恶性追或混合追，或者用于区分间日追、 恶性追与混合追。
[000引因此，本发明包括： 1. 一种试剂盒，其包括一个或多个固体载体，W及独立地连接于所述一个或多个固体 载体上的下述多肤集合1 : 沈Q ID NO ;1所示的多肤； 沈Q ID NO ;2所示的多肤； 沈Q ID NO ;3所示的多肤； 沈Q ID NO ;4所示的多肤； 沈Q ID NO ;5所示的多肤； 沈Q ID NO ;6所示的多肤； SEQ ID NO ;7所示的多肤；和 沈Q ID NO ;8所示的多肤。
[000引 2.根据项1所述的试剂盒，其用于诊断追疾。
[0010] 3.根据项1或2所述的试剂盒，其中，所述多肤集合1还包括下述多肤集合2 : SEQ ID NO ;9所示的多肤；和 SEQ ID NO ; 10所示的多肤。
[0011] 4.根据项3所述的试剂盒，其用于诊断间日追、恶性追或混合追，或者用于区分 间日追、恶性追与混合追。
[001引 5.根据项1~4中任一项所述的试剂盒，其中，全部多肤独立地连接于同一固体载 体上。
[001引 6.下述多肤集合1在巧[J备用于诊断追疾的试剂盒中的用途： 多肤集合1 沈Q ID NO ;1所示的多肤； 沈Q ID NO ;2所示的多肤； 沈Q ID NO ;3所示的多肤； 沈Q ID NO ;4所示的多肤； 沈Q ID NO ;5所示的多肤； 沈Q ID NO ;6所示的多肤； SEQ ID NO ;7所示的多肤；和 沈Q ID NO ;8所示的多肤。
[0014] 7.根据项6所述的用途，其中，所述诊断追疾还包括诊断间日追、恶性追或混合 追，或者用于区分间日追、恶性追与混合追，且所述多肤集合1还包括下述多肤集合2 : SEQ ID NO ;9所示的多肤；和 SEQ ID NO ; 10所示的多肤。
[0015] 发明的县体连施方式 《化集合巧《化纽 本说明书中，多肤集合1是下述多肤组广8的全部： 多肤组1 ;SEQ ID N0;1所示的多化其中，SEQ ID N0;1所示的多肤相当于恶性追原虫 的谷氨酸富含蛋白的871位、00位； 多肤组2 ;SEQ ID NO ;2所示的多肤，其中，SEQ ID NO ;2所示的多肤相当于恶性追原虫 的谷氨酸富含蛋白的931位、60位； 多肤组3 ;SEQ ID NO ;3所示的多肤，其中，SEQ ID NO ;3所示的多肤相当于恶性追原虫 的裂殖子表面蛋白9的421位^450位； 多肤组4 ;SEQ ID NO ;4所示的多肤，其中，SEQ ID NO ;4所示的多肤相当于恶性追原虫 的红细胞结合蛋白-140的391位"420位； 多肤组5 ;SEQ ID NO ;5所示的多肤，其中，SEQ ID NO ;5所示的多肤相当于恶性追原虫 的成熟带虫红细胞表面蛋白的601位^630位； 多肤组6 ;SEQ ID NO ;6所示的多肤，其中，SEQ ID NO ;6所示的多肤相当于恶性追原虫 的细胞粘附相关无性蛋白8的1321位^1350位； 多肤组7 ;SEQ ID NO ;7所示的多肤，其中，SEQ ID NO ;7所示的多肤相当于顶尖膜抗 原-1的451位~480位； 多肤组8 ;SEQ ID NO ;8所示的多肤；其中，SEQ ID NO ;8所示的多肤相当于恶性追原 虫的成熟带虫红细胞表面蛋白的1076位~1105位。
[0016] 多肤组9;SEQ ID N0;9所示的多肤；其中，SEQ ID N0;9所示的多肤相当于恶性 追原虫的追原虫红细胞膜蛋白1的391位^410位。
[0017] 多肤组10 ;SEQ ID NO ;10所示的多肤；其中，SEQ ID NO ;10所示的多肤相当于间 日追原虫的环子抱子蛋白的82位^101位。
[001引本说明书中，灵敏度是指：用"金标准"方法确认的阳性样本中，被其他方法测定为 阳性样本的比例。假阳性率是指；用"金标准"方法确认的阴性样本中，被其他方法测定为 阳性样本的比例。本技术领域检测间日追原虫感染或恶性追原虫感染的"金标准"方法是 镜检法。
[0019] 本说明书中，"追疾"是指恶性追和/或间日追。恶性追是指因恶性追原虫感染而 引起的追疾，间日追是指因间日追原虫感染而引起的追疾，混合追是指因恶性追原虫和间 日追原虫感染(也称混合感染）而引起的追疾。
[0020] 优选地，多肤集合1是在所述多肤组广8的全部的基础上再加上下述多肤组 9 ~10 : 多肤组9 ;SEQ ID NO ;9所示的多肤；W及 多肤组10 ;SEQ ID NO ; 10所示的多肤。
[0021] 如实施例所示，所述多肤集合1对追原虫感染者的血清呈阳性反应，而对健康正 常人或非间日追原虫感染者的血清呈阴性反应，因此，所述多肤集合1作为追原虫感染的 检测工具是有用的。
[0022] 本说明书中，阳性反应是指：满足下述"诊断方法"部分中所列的判据；否则为阴 性反应。
[0023] 所述多肤可W适宜采用（1)化学合成方法、或（2)酶反应合成方法等公知方法来 获得，其中化学合成更为简便。在化学合成本发明的多肤情况下，通过使用肤合成仪合成或 者半合成该多肤来进行。作为化学合成方法，可w列举出例如肤固相合成法等。送样合成 的肤可W采用