常规手段例如离子交换色谱、反相高效液体色谱、亲和色谱等进行纯化。送样 的肤固相合成方法W及其后的肤纯化都是本技术领域公知的。
[0024] 此外，在通过酶反应生产本发明的多肤的情况下，可W采用例如国际公开小册子 W02004/011653号所述的方法。目P，可W送样来生产；将一方的氨基酸或二肤的駿基末端被 醋化或醜胺化而得到的氨基酸或二肤、与氨基酸处于游离状态的氨基酸（例如駿基保护的 氨基酸）在肤合成酶的存在下进行反应，生成的二肤或Η肤。作为肤合成酶，可W列举出： 具有生成肤的能力的微生物的培养物、由该培养物分离的微生物菌体、或该微生物的菌体 处理物、或该微生物来源的肤合成酶。
[00巧]特别是多肤的化学合成已经实现了商业化，可W容易地委巧专业的多肤合成公司 来合成所述多肤。
[0026] 试剂念 本发明提供一种试剂盒(本发明的试剂盒)，其包括 一个或多个固体载体，W及独立地连接于所述一个或多个固体载体上的上述多肤集合 1〇
[0027] 令人惊奇的是，虽然SEQ ID NO ;广8的多肤全部来源于恶性追原虫，但本发明的试 剂盒可用于诊断追疾。本说明书中，"诊断"可W是确诊，也可W是为确诊提供参考信息。特 别是，在所述多肤集合1为上述多肤组广10的全部的情况下，本发明的试剂盒可用于诊断 间日追、恶性追或混合追，或者用于区分间日追、恶性追与混合追。
[002引因此，所述多肤集合1可W用于制备用于诊断追疾的试剂盒。在所述多肤集合1 为上述多肤组广10的全部的情况下，所述多肤集合1可W用于制备用于诊断间日追、恶性 追或混合追，或者用于区分间日追、恶性追与混合追试剂盒。
[0029] 该试剂盒中的固体载体可W是一个，也可W是多个，但优选为一个，即全部多肤独 立地连接于同一固体载体上。
[0030] 在本发明中，对固体载体没有特殊限制，只要是作为固体或不溶性材料（例如是 可W通过过滤、沉淀、磁性分离等从反应混合物中分离的材料）的载体即可。
[0031] 构成固体载体的材料包括但不限于：硅胶(聚二甲基娃氧焼，PDMS)、纤维素、特氣 隆?、硝基纤维素、琼脂糖、葡聚糖、壳聚糖、聚苯己帰、聚丙帰醜胺、聚醋、聚碳酸醋、聚醜胺、 聚丙帰、尼龙、聚偏二氣己帰、胶乳、二氧化娃、玻璃、玻璃纤维、金、笛、银、铜、铁、不镑钢、铁 氧体、娃晶片、聚己帰、聚己帰亚胺、聚乳酸、树脂、多糖类、蛋白（白蛋白等）、碳或它们的组 合等。
[0032] 固体载体的形状包括但不要限于；珠子、磁珠、薄膜、微细管、滤膜、板、微量板、碳 纳米管、传感器芯片等。正如本技术领域公知的郝样，薄膜或板等平坦的固体载体上可W设 置凹坑、沟槽、滤膜底部等。
[0033] 磁珠可W具有约25ηπΓ约1mm范围的球体直径。在优选的实施方式中，磁珠具有 约50ηπΓ约10 μ m范围的直径。磁珠的尺寸可W根据特定的用途来进行选择。
[0034] 由Se地arose等高交联球形琼脂糖制成的珠子具有约24 μ πΓ约165 μ m范围的直 径。优选地，高交联球形琼脂糖珠具有约24 μ πΓ约44 μ m范围的直径。高交联球形琼脂糖 珠的尺寸可W根据特定的用途来进行选择。
[00巧]具有疏水性表面的固体载体的例子包括可从化lysciences, Warrington, PA或 Spherotech，Liberville，IL购买的制品等聚苯己帰胶乳珠。
[003引二氧化娃（Si02)-处理或二氧化娃（Si02)基的固体载体的例子包括可从 Polysciences，Wa;r;rington，PA购买的超常磁性二氧化娃珠等，其可W用于捕捉核酸（例如 DNA)。或者，还可W使用可从Dynal Biotech购买的M-280等。
[0037] 具有亲水性表面的磁珠可用于捕捉增殖期的细菌细胞、核酸W及其它成分。作为 该磁珠的例子，可W列举出Polysciences，Warrington, PA销售的珠子（名称；Biomag(注 册商标）駿基）、或者Bangs L油oratory, Inc.，Fishers, IN的名称为MC02N/2928的珠 子。或者，可W使用Dynal Biotech销售的M-270等。
[0038] 在一个优选实施方式中，所述固体载体是SJ改性硅胶，其是苏州假聚生物材 料有限公司开发的一种娃橡胶材质的微阵列固体支撑材料（iPDMS薄膜，参见中国专利 CN101265329A)。送种材料是W生物学研究常用的PDMS为基础，在其中加入特定的引发剂 成分(使该材料可通过表面引发聚合反应（SIP)实现表面功能化修饰)，再经过聚己二醇甲 基丙帰酸醋（P〇ly(〇lig〇(ethylene glycol) methac巧late) ,p0EGMA)表面修饰获得的。 SJ改性硅胶具有优秀的抗蛋白质非特异性吸附（Nonspecific protein adso巧tion,NPA)能 力，可W将复杂蛋白免疫检测中的非特异性蛋白质吸附控制到接近"绝对0"水平(接近或低 于仪器的检测极限)，不仅可W免除封闭和多次清洗的麻烦，还可W通过使用更强的信号扩 增手段来提高蛋白质微阵列的灵敏性。而且其娃橡胶的本质赋予了该材料较强的机械性能 和良好的可操作性。苏州假聚公司已经成功地将SJ改性硅胶应用于11个肿瘤标志物组成 的多指标联检微阵列ELISA试剂盒，实现了高通量和高灵敏的检测，证明了送种材料是一 种优秀的蛋白质微阵列固体支撑材料。同时，送种材料还具有表面性质可调的特性，可W通 过控制修饰反应时间在一定范围内调整其表面形貌。
[0039] 多肤与固体载体的连接可W采用本领域技术人员公知的多肤与固体载体的连 接方法来进行。例如，对于蛋白质/多肤与改性硅胶表面的连接而言，可W通过1-己 基-3-(3-二甲基氨丙基）-碳化二亚胺[l-eth5d-3-(3-dimeth}d ami-nopropyl) carbodiimide,邸口和N-居基玻巧醜亚胺（N-hy化oxysuccinimide, N服）的反应将改性娃 胶表面高分子链上的駿基（-C00H)基团改为活化基团，该活化基团可与蛋白/多肤上所带 的氨基（-NH2)反应从而实现将蛋白/多肤固定于固体载体表面。
[0040] 对于点样时使用的点样液中多肤的浓度没有特殊限制，本领域技术人员可W依常 规选择，优选为1 μ g~1000 μ g/mU更优选10 μ g~500 μ g/mL。此外，对于多肤在固体载体上 分布的密度没有特殊限制，本领域技术人员可W依常规选择，优选为广100点/10mm2,更优 选 5~50 点 /l〇mm2。
[0041] 该试剂盒还可W包括： 1. 配好的血清稀释液或血清稀释液组分溶液：血清稀释液，例如有北京赛驰生物科技 有限公司的样本稀释液(产品编号070021-S2)、郑州博威嘉生物科技有限公司的加样变色 样本稀释液(产品编号bwj010103)等。该血清稀释液用来稀释血清，试剂盒检测的血清要 稀释适当倍数，例如2^200倍，优选10-100倍。
[0042] 该试剂盒还可W包括： 2. 浓缩洗液：固体载体表面赔育血清及酶标二抗后，需用洗液清洗掉固体载体表面未 结合的抗体和酶标二抗。浓缩洗液例如是1%的吐温20水溶液，使用时需稀释2^40倍、优 选5~20倍。
[0043] 该试剂盒还可W包括： 3. 酶标二抗溶液：追原虫感染(例如追疾)病人血清中的追原虫特异性抗体可与固体载 体(例如SJ改性硅胶）上的本发明的多肤结合，酶标二抗可与抗体结合，而酶标二抗上的标 记物可与发光底物反应，从而发出可检测的光。酶标二抗可W是例如辣根过氧化物酶标记 的羊抗人IgG。作为酶标二抗溶液，可W列举出北京中杉金桥生物技术有限公司生产的辣根 过氧化物酶标记的山羊抗人IgG化+L)，产品编号ZB-2304。对酶标二抗在酶标二抗溶液中 的浓度没有特殊限制，可W是例如lng"1000ng/mL。
[0044] 该试剂盒还可W包括： 4. 发光液组分溶液：发光液可与酶标二抗上标记的辣根过氧化物酶反应，使得反应发 出仪器可检测到的化学光。发光液由两种溶液混合而成，分别是A液一过氧化氨溶液，及B 液一发光氨溶液。发光氨(鲁米诺）只有用氧化剂处理过才会发光。通常使用双氧水和一 种氨氧化物碱的混合水溶液作为激发剂。在辣根过氧化物酶催化下，双氧水分解为氧气和 水： 2 &〇2 - 〇2 + 2 &0 鲁米诺与氨氧化物反应时生成了一个双负离子，它可被过氧化氨分解出的氧气氧化， 产物为一个有机过氧化物。该过氧化物很不稳定，立即分解出氮气，生成激发态的3-氨