化学结合，改性 硅胶表面的ploy(OEGMA)高分子的末端-C00H与多肤分子的-一畑2形成稳定共价键，进而 将有化学活性的多肤分子固定在SJ改性硅胶表面。
[007引 4)装配 固定化的多肤微阵列必须在两天内装配好。首先通过背胶将SJ改性硅胶薄片贴在反 应柱上，盖上反应腔体。一个反应器由两个反应柱和一个反应腔体组成。
[007引 5)保存 装配好的多肤微阵列，需要抽真空密封，保存在4Γ的冰箱中，备用。
[0074] 3.巧试剂念讲行檢郷I 检验步骤 (1)、开始检测前，将浓缩清洗液按1:10的比例加入纯化水或蒸傭水进行稀释，稀释完 成后直接使用。使用移液枪将2mL清洗液加到芯片表面，浸泡芯片3分钟，保证芯片表面被 完全浸润。
[00巧](2)、将待测血清样本用样本稀释液按照1:200稀释混匀。
[0076] (3)、弃去浸泡芯片的清洗液，在芯片表面完全湿润的状态下，每个血清样本吸取 200 μ L稀释后的血清加入到芯片反应器内。
[0077] (4)、将芯片反应器放入芯片固定座，放到摇床上，开启摇床，频率150转/分钟，室 温赔育30分钟。
[007引 巧）、弃去芯片反应器内的血清样本，用15mL洗液清洗反应腔体和芯片表面3次。
[0079] 化）、清洗完成后，每个芯片反应器分别加入200 μ L酶标抗体溶液，将芯片反应器 放入芯片固定座，放到摇床上，开启摇床，频率150转/分钟，室温赔育30分钟。
[0080] (7)、弃去芯片反应器内的酶标抗体溶液，用15mL洗液清洗反应腔体和芯片表面3 次。
[0081] 做、清洗完成后，取下反应腔体，每个芯片表面分别加入15 μ L发光底物液，使发 光液能均匀的铺于芯片表面。
[0082] 巧）、将加入了发光液的芯片置于凝胶成像仪中化学发光成像并判定结果，作为凝 胶成像仪，没有特殊限制，使用例如天能5500型微阵列成像仪、假捷牌ΤΝ5500型或假捷牌 CLEAR4000型等均可。
[0083] (10)、结果判定：对于每一份血清，分别统计试剂盒1和2中的每一条多肤是否有 响应（即，信噪比（SNR)大于等于2)，并根据上述"诊断方法"部分中所描述的判据1~4进行 判定。即， 判据1 ;当检测到分别来自多肤组广8中的至少两个或两个W上多肤组中的至少任意 两个或两个W上的多肤对所述受试者来源的血液样本有响应时，判定受试者是追疾患者； 否则，判定受试者不是追疾患者。
[0084] 判据2 ;当检测到分别来自多肤组广8中的至少两个或两个W上多肤组中的至少 任意两个或两个w上的多肤对所述受试者来源的血液样本有响应、且未检测到来自多肤组 ?Τιο中的任何多肤对所述受试者来源的血液样本有响应时，判定受试者是恶性追患者；否 贝IJ，判定受试者不是恶性追患者。
[00财判据3 ;当检测到分别来自多肤组广8中的至少两个或两个W上多肤组中的至少 任意两个或两个W上的多肤对所述受试者来源的血液样本有响应、且检测到分别来自多肤 组?Τ?Ο中的至少任意两个或两个W上的多肤对所述受试者来源的血液样本有响应时，判 定受试者是间日追患者；否则，判定受试者不是间日追患者。
[0086] 判据4 ;当检测到分别来自多肤组广8中的至少两个或两个W上多肤组中的至少 任意两个或两个W上的多肤对所述受试者来源的血液样本有响应、且检测到来自多肤组 ?Τιο中的仅一个多肤组中的至少任意一个或两个W上的多肤对所述受试者来源的血液样 本有响应时，判定受试者是混合追患者；否则，判定受试者不是混合追患者。
[0087] 其中，信噪比=(多肤点信号值-阴性对照点信号值）/阴性对照点信号值。多肤 点信号值是指成像仪配套软件读取的多肤点的化学发光强度值，阴性对照点信号值是指成 像仪配套软件读取的阴性对照点的化学发光强度值。
[0088] 对于514份血清样本，分别采用上述步骤2中制备的试剂盒1 (按上述3的步骤） W及传统的镜检法进行检测，检测结果如表1所示。
[0089] 表 1
准确率=(269巧38) /514=98. 6〇/〇 灵敏度=269/274 X 100% = 98. 2〇/〇 特异性=238/240 X 100%=99. 2% 假阳性率=2/240Χ 100% =0. 8〇/〇 对于514血清样本，分别采用上述2中制备的试剂盒2娘上述3的步骤）W及传统的 镜检法进行检测，检测结果如表2所示。
[0090] 表 2
恶性追疾准确率=(11〇巧9)/191 XlOO% = 99. 0〇/〇 恶性追疾灵敏度=110 / 112 X100% = 98. 2〇/〇 恶性追疾特异性=79 / 79 X 100% = 100% 恶性追疾假阳性率=0/79X100% = 0% 间日追疾准确率=(118+80) / 200 X 100% =99〇/〇 间日追疾灵敏度=118 / 120 X 100% = 98. 3% 间日追疾特异性=80 / 80X100% = 100. 0% 间日追疾假阳性率=0/ 80X100% = 0.0% 混合感染准确率=(40+80) /123=97. 6% 混合感染灵敏度=40/ 42X 100%=95. 2% 混合感染特异性=80/81 X 100%=98. 8〇/〇 混合感染假阳性率=1/81 X 100%=1. 2% 由此可知，上述试剂盒的检测数据与临床镜检数据基本一致，其完全 符合作为检测试剂盒的要求。
[0091] 作为对比，对于上述10条多肤中的任一条，按照国际专利公开W02014/044184 实施例部分标题2的描述制备了试剂盒，使用上述514份血清样本，按照国际专利公开 W02014/044184实施例部分标题3的描述进行了检测，结果显示上述13条多肤单独检测间 日追时的灵敏度均在33%~84. 7%之间，不能满足作为检测试剂盒的要求。
[0092] 注：Pf表示恶性追灵敏度，Pv表示间日追灵敏度，化假阳性率。
[0093] W下，通过实施例对本发明进行更具体的说明，但并不是对本发明技术范围的限 定。通过本说明书的记载，本领域技术人员可W容易的对本发明进行修饰/改变，送些包含 在本发明的技术范围内。
【主权项】
1. 一种试剂盒，其包括一个或多个固体载体，以及独立地连接于所述一个或多个固体 载体上的下述多肽集合1 : SEQ ID NO :1所示的多肽； SEQ ID NO :2所示的多肽； SEQ ID NO :3所示的多肽； SEQ ID NO :4所示的多肽； SEQ ID NO :5所示的多肽； SEQ ID NO :6所示的多肽； SEQ ID NO : 7所示的多肽；和 SEQ ID NO :8所示的多肽。2. 根据权利要求1所述的试剂盒，其用于诊断疟疾。3. 根据权利要求1或2所述的试剂盒，其中，所述多肽集合1还包括下述多肽集合2 : SEQ ID NO :9所示的多肽；和 SEQ ID NO: 10所示的多肽。4. 根据权利要求3所述的试剂盒，其用于诊断间日疟、恶性疟或混合痕，或者用于区分 间日疟、恶性疟与混合疟。5. 根据权利要求1~4中任一项所述的试剂盒，其中，全部多肽独立地连接于同一固体 载体上。6. 下述多肽集合1在制备用于诊断疟疾的试剂盒中的用途： 多肽集合1 SEQ ID NO :1所示的多肽； SEQ ID NO :2所示的多肽； SEQ ID NO :3所示的多肽； SEQ ID NO :4所示的多肽； SEQ ID NO :5所示的多肽； SEQ ID NO :6所示的多肽； SEQ ID NO :7所示的多肽；和 SEQ ID NO :8所示的多肽。7. 根据权利要求6所述的用途，其中，所述诊断疟疾还包括诊断间日疟、恶性疟或混合 疟，或者用于区分间日疟、恶性疟与混合疟，且所述多肽集合1还包括下述多肽集合2 : SEQ ID NO :9所示的多肽；和 SEQ ID NO : 10所示的多肽。
【专利摘要】本发明涉及可用于诊断间日疟和/或恶性疟的试剂盒。本发明的试剂盒包括一个或多个固体载体，以及独立地连接于所述一个或多个固体载体上的特定多肽集合。
【IPC分类】G01N33/68
【公开号】CN105628925
【申请号】CN201410616041
【发明人】马雄明, 滕焕, 郑丽玲
【申请人】苏州偲聚生物材料有限公司
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2014年11月5日