一种测定大黄中总蒽醌的方法
【专利摘要】本发明公开了一种测定大黄中总蒽醌的方法，包括以下步骤：步骤1：将大黄切片后加入到粉碎机中，同时加入纳米石英砂，纳米石英砂和大黄的重量比为0.1?0.2:1，得到大黄粉；步骤2：将大黄粉和硅藻土混合后加入到铺设有石英砂的萃取池中采用ASE快速萃取仪萃取；萃取参数如下：萃取溶剂为重量比为0.3?0.4：0.6?0.7的乙醇和甲醇的混合溶液；萃取温度80?90℃；静态萃取时间5min；冲洗体积100％；静态循环次数1次；静态萃取的压力为1500psi；所述的静态萃取的吹扫时间为100s；步骤2：将萃取液离心分离后，得到上清液；步骤3：将上清液采用液相色谱法进行分析。本发明提供了一种测定大黄中总蒽醌的方法，该方法提取较为彻底、测量精度高。
【专利说明】
-种测定大黄中总蔥酿的方法
技术领域
[0001] 本发明设及实验室检测领域，特别是一种测定大黄中总蔥酿的方法。
【背景技术】
[0002] 2010年药典记录了提取大黄中总蔥酿的方法:取本品粉末(过四号筛)约0.15g，精 密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重 量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5ml，置烧瓶中，挥去溶剂，加8%盐 酸溶液IOml，超声处理2分钟，再加 S氯甲烧IOml，加热回流1小时，放冷，置分液漏斗中，用 少量=氯甲烧洗涂容器，并入分液漏斗中，分取=氯甲烧层，酸液再用=氯甲烧提取3次，每 次IOml,合并立氯甲烧液，减压回收溶剂至于，残渣加甲醇使溶解，转移至IOml量瓶中，加甲 醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 yl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含总蔥酿W芦苔大黄素(Cl出10化）、大 黄酸(〔15陆〇6 )、大黄素(CisHioOs )、大黄酪(〔15出〇〇4)和大黄素甲酸(〔16出2〇5)的总量计，不得 少于1.5%。
[0003] 为了改善药典中检测过程中测试较为繁琐，对操作人员的操作技能要求高的问 题，我们试图采用ASE快速萃取法进行萃取，萃取溶剂为1 %乙酸和甲醇水溶液;萃取效率较 局。
[0004] 因此，ASE快速萃取法是对中药材快速准确的检测方法的发展趋势，对ASE快速萃 取法进一步优化可W提高检测精度和检测速度。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种测定大黄中总蔥酿的方法，该方法提取较为彻底、测量 精度高。
[0006] 本发明提供的技术方案为:一种测定大黄中总蔥酿的方法，包括W下步骤：
[0007] 步骤1:将大黄切片后加入到粉碎机中，同时加入纳米石英砂，纳米石英砂和大黄 的重量比为0.1 -0.2:1，得到大黄粉；
[000引步骤2:将大黄粉和娃藻±混合后加入到铺设有石英砂的萃取池中采用ASE快速萃 取仪萃取;萃取参数如下：萃取溶剂为重量比为0.3-0.4:0.6-0.7的乙醇和甲醇的混合溶 液;萃取溫度80-90°C;静态萃取时间5min;冲洗体积100%;静态循环次数1次;静态萃取的 压力为ISOOpsi;所述的静态萃取的吹扫时间为IOOs;
[0009] 步骤3:将萃取液离屯、分离后，得到上清液；
[0010] 步骤4:将上清液采用液相色谱法进行分析；
[0011] 其中，液相色谱法的分析条件为：
[001^ a)仪器：agilentl260超高效液相色谱仪
[0013] b)色谱柱规格:C181.祉 m4.6X100mm
[0014] 。）柱溫：40。[
[0015] d)流速:0.5mL/min
[0016] e)流动相:0-6min: 0.1 %憐酸-甲醇，0.1 %憐酸溶液-甲醇体积比为40:60;
[0017] 6min: 0.1 %憐酸-甲醇，0.1 %憐酸溶液-甲醇体积比为10:90;
[001引 f)检测波长:254nm。
[0019] 在上述的测定大黄中总蔥酿的方法中，步骤3具体为:将萃取液在150(K)r/min的条 件下离屯、3min，取上清液。
[0020] 在上述的测定大黄中总蔥酿的方法中，所述的仪器为agilentl260超高效液相色 谱仪。
[0021 ] 在上述的测定大黄中总蔥酿的方法中，所述的色谱柱为AgilentZORBAXExtend- C181.8皿4.6X100mm。
[0022] 在上述的测定大黄中总蔥酿的方法中，所述的ASE萃取法所采用的仪器为ASE350 快速溶剂萃取仪。
[0023] 本发明在采用上述技术方案后，其具有的有益效果为：
[0024] 本发明在检测过程中，首先通过粉粹然后经过ASE快速萃取法进行萃取，能够提高 分离精度，特别是在粉碎过程中，采用纳米石英砂可W提高细胞破碎的效果，因为纳米石英 砂会粘附在细胞的表面，在告诉粉碎过程中，粘附在细胞表面的纳米石英砂会和相互碰撞 的细胞摩擦W及和粉碎刀片摩擦，提高细胞粉碎效果。
[0025] 同时，萃取液采用乙醇甲醇混合液，通过一次静态循环即可W实现非常彻底的提 取效果。
[0026] 采用液相色谱分析方法，可W有效的准确的测定大黄中的总蔥酿的含量。
【具体实施方式】
[0027] 下面结合【具体实施方式】，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对 本发明的任何限制。
[002引实施例1:
[0029] 将Ig大黄切片后加入到粉碎机中，同时加入纳米石英砂，纳米石英砂和大黄的重 量比为0.15:1，得到大黄粉;将0.1725g大黄粉与适量娃藻±混合均匀，待用，先在萃取池加 入少量石英砂，再把样品移入到预先放好过滤膜的ASEK IOml萃取池中再加入适量娃藻 ±，轻轻振摇使之与池口在同一水平线上，梓紧萃取池上盖。萃取结束后，把萃取液转移于 50ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，在1500化/min下离屯、3min，取上清液，进入LC测定。
[0030] 萃取条件(见表1)为：
[0031] 表1
[0032]
[0033] 分析方法为LC液相色谱法，液相色谱分析条件：
[0034] a)仪器:agilentl260超高效液相色谱仪
[0035] b)色谱柱规格:AgilentZORBAXExtend-ClSl. 8皿4.6 X 100mm，即碳 18色谱柱，直径 4.6mm，长度100mm，粒径1.8微米；
[0036] (3)柱溫：40。[
[0037] d)流速:0.5mL/min
[003引 e)流动相:0-6min: 0.1 %憐酸-甲醇(体积比40:60，本实施例中的体积比为20°C条 件下的体积比）
[0039] 6min: 0.1 %憐酸-甲醇（体积比10 :90)，即第6分钟前流动相为体积比为40 :60的 0.1 %憐酸-甲醇的混合物，在第6分钟时，流动相为体积比为10 :90的0.1 %憐酸-甲醇的混 合物。
[0040] f)检测波长:254nm。
[0041 ] 对比例1
[0042] 将Ig大黄切片后加入到粉碎机中，得到大黄粉;精密称定粉末0.15g，与适量娃藻 ±混合均匀，待用，先在萃取池加入少量石英砂，再把样品移入到预先放好过滤膜的ASEa IOml萃取池中再加入适量娃藻±，轻轻振摇使之与池口在同一水平线上，梓紧萃取池上盖。 萃取结束后，把萃取液转移于50ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，在1500化/min下离屯、 3min，取上清液，进入LC测定。
[0043] 萃取条件(见表2)为：
[0044] 表 2
[0045]
LUUWJ C-昭 GJ ,WMtrti-昭刀'仍巧1干：
[0047] a)仪器:agilentl260超高效液相色谱仪
[004引 b)色谱柱规格:Agi IentZORBAXExtend-ClS 1.8皿4.6 X 100mm，即碳18色谱柱，直径 4.6mm，长度100mm，粒径1.8微米；
[0049] C)柱溫:40°C [(K)加]d)流速:0.5mL/min
[0化1 ] e)流动相:0-6min: 0.1 %憐酸-甲醇(体积比40:60)
[0化2] 6min: 0.1 %憐酸-甲醇（体积比10 :90)，即第6分钟前流动相为体积比为40 :60的 0.1 %憐酸-甲醇的混合物，在第6分钟时，流动相为体积比为10:90的0.1%憐酸-甲醇的混 合物。
[0化3] f)检测波长：254nm。
[0054] 实施例1的萃取方法的精确度测试
[0055] 采用实施例1的测定方法、对比例1的测定方法和药典方法对大黄进行萃取，大黄 为 3批，批号分别为 150912,1511012,20150701;
[0056] 具体测试结果见下表3;
[0化7] 表3
[0化引
[0059] W上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任 何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种测定大黄中总蒽醌的方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤1:将大黄切片后加入到粉碎机中，同时加入纳米石英砂，纳米石英砂和大黄的重 量比为0.1-0.2:1，得到大黄粉； 步骤2:将大黄粉和硅藻土混合后加入到铺设有石英砂的萃取池中采用ASE快速萃取仪 萃取;萃取参数如下：萃取溶剂为重量比为0.3-0.4:0.6-0.7的乙醇和甲醇的混合溶液;萃 取温度80-90°C;静态萃取时间5min;冲洗体积100%;静态循环次数1次;静态萃取的压力为 1500psi;所述的静态萃取的吹扫时间为100s; 步骤3:将萃取液离心分离后，得到上清液； 步骤4:将上清液采用液相色谱法进行分析； 其中，液相色谱法的分析条件为： a) 仪器:agi lent 1260超高效液相色谱仪Y002 b) 色谱柱规格:C181.8ym4.6X100mm (：)柱温:40°〇 d) 流速:0 · 5mL/min e) 流动相:0_6min: 0.1 %磷酸-甲醇，0.1 %磷酸溶液-甲醇体积比为40:60; 6min: 0.1 %磷酸-甲醇，0.1 %磷酸溶液-甲醇体积比为10:90; f) 检测波长:254nm〇2. 根据权利要求1所述的测定大黄中总蒽醌的方法，其特征在于，步骤3具体为:将萃取 液在15000r/min的条件下离心3min，取上清液。3. 根据权利要求1所述的测定大黄中总蒽醌的方法，其特征在于，所述的仪器为 agilentl260超高效液相色谱仪。4. 根据权利要求3所述的测定大黄中总蒽醌的方法，其特征在于，所述的色谱柱为 Agi IentZORBAXExtend-Cl81.8μπι4.6 X IOOmmD5. 根据权利要求1所述的测定大黄中总蒽醌的方法，其特征在于，所述的ASE萃取法所 采用的仪器为ASE350快速溶剂萃取仪。
【文档编号】G01N30/02GK105954378SQ201610254539
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年4月22日
【发明人】陈学松, 廖强, 韦日伟, 陈佳丽, 王 华, 姚泳成
【申请人】广西壮族自治区梧州食品药品检验所