一种ngal时间分辨荧光纳米免疫层析定量检测试纸条的制作方法
【技术领域】
[0001] 本实用新型属于免疫层析检测技术领域，具体设及一种NGAL时间分辨巧光纳米免 疫层析定量检测试纸条。
【背景技术】
[0002] 急性肾损伤(Acute kidney injury，AKI)是由多种原因引起的肾功能在短时间内 下降而出现的临床综合征。迄今为止，AKI依然是十分常见而严重的临床问题。如果在AKI的 早期阶段进行治疗，可W很大程度上降低肾衰竭的发生。因此尽早诊断AKI已成为肾病治疗 的一个关键因素。但缺乏特异性的早期临床诊断指标，是治疗该病的主要障碍，导致AKI的 发生率、病死率居高不下。人类中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（NGAL，载脂蛋白-2)是由中 性粒细胞和某些上皮细胞如肾小管所表达的微量蛋白。缺血性或肾毒性肾损伤时，NGAL由 肾脏大量表达，并被释放到尿液和血浆。NGAL含量在损伤发生后2小时内升高，是一种早期 且敏感的肾损伤标志，成为一种高效的新型AKI早期肾损伤临床诊断标志物。截止目前还未 有一种NGAL时间分辨巧光纳米免疫层析定量检测试纸条。 【实用新型内容】
[0003] 本实用新型的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了一种NGAL时间分辨巧光 纳米免疫层析定量检测试纸条。
[0004] 本实用新型解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0005] -种NGAL时间分辨巧光纳米免疫层析定量检测试纸条，包括背衬底板，该背衬底 板上设置有硝酸纤维素膜、样品结合垫和吸水膜，该样品结合垫和吸水膜分别叠压在硝酸 纤维素膜的两端上;该样品结合垫上包被有时间分辨巧光物质标记的NGAL单克隆抗体;该 硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，该检测线包被有另一个表位的NGAL单克隆抗体，该 质控线包被有羊抗鼠 IgG。
[0006] -实施例中：所述时间分辨巧光物质为铜系元素、铜系元素与乳胶的结合物、铜系 元素的馨合物中的一种。
[0007] -实施例中:所述铜系元素为館，铺，衫或铺中的一种。
[000引一实施例中:所述样品结合垫为玻璃纤维素膜或聚醋膜。
[0009] 一实施例中：所述样品结合垫为玻璃纤维素膜或聚醋膜经含有表面活性剂的缓冲 液预封闭后干燥而得。
[0010] -实施例中:所述试纸条外还包衷有一壳体。
[0011] 本技术方案与【背景技术】相比，它具有如下优点：
[0012] 1.传统的定量检测试纸条分别设有样品垫和结合垫，血清/血浆等样品首先与样 品垫接触，样品垫对样品进行预处理，去除样品中杂质颗粒，调节样品液抑值或粘度等，减 缓样品渗透速度，有利于样品的均匀分布;经样品垫预处理过后的均匀的样品再流动至结 合垫上与标记抗体发生结合，才能够保证定量反应的准确性，如果不经预处理，样品在结合 垫上的结合量无法把握，且结合稳定性也差，更加难w实现定量效果;而本实用新型采用一 个样品结合垫代替传统的样品垫和结合垫，该样品结合垫上准确而均匀地分布有标记抗 体，既能保证样品得到预处理，又能保证样品结合一定量的标记抗体，保证了定量反应的准 确性，经检测，准确度和精密度良好;同时，也使得试纸条结构和制备过程得到简化。
[0013] 2.本实用新型的NGAL时间分辨巧光纳米免疫层析定量检测试纸条，利用时间分辨 巧光免疫分析（1山日寸日3〇1￥日(1；1^11101'〇-；[1]11]111]10日3 3日7，了1?。14)运种新型非放射性标记免疫 分析技术。与传统的巧光素标记不同，采用具有独特巧光特性的铜系元素及其馨合物作为 时间分辨巧光物质，铜系元素激发光与发射光之间的Stokes位移较大，避免了激发及发射 光谱存在的重叠问题，排除激发光的干扰，通过波长分辨方式使其明显的区别于背景巧光； 且铜系元素激发光光谱较宽，可采用只允许发射巧光通过的滤光片，从而进一步将抢特异 性巧光和背景巧光区分开，消除干扰;铜系离子馨合物的巧光衰变时间长，为传统巧光的 103~106倍，通过测定时间差可W实现高信噪比；同时其可W反复接受激发，从而大大提高 仪器探测到的信号值，有效排除样品自然巧光的干扰，具有灵敏度高，特异性强、稳定性好 和无放射性污染等特点，可广泛应用于NGAL的临床免疫检验和科学研究中。
[0014] 3.本实用新型的NGAL时间分辨巧光纳米免疫层析定量检测试纸条制作方便，可批 量生产;体积小，便于携带。
【附图说明】
[0015] 下面结合附图和实施例对本实用新型作进一步说明。
[0016] 图1为本实用新型的NGAL时间分辨巧光纳米免疫层析定量检测试纸条结构示意 图。
[0017] 附图标记:样品结合垫1;时间分辨巧光物质标记的NGAL单克隆抗体2;硝酸纤维素 膜3;检测线4;质控线5;吸水膜6;背衬底板7。
【具体实施方式】
[0018] 下面通过实施例具体说明本实用新型的内容：
[0019] 请查阅图1，一种NGAL时间分辨巧光纳米免疫层析定量检测试纸条，包括背衬底板 7,该背衬底板7上设置有硝酸纤维素膜3、样品结合垫1和吸水膜6,该样品结合垫1和吸水膜 6分别叠压在硝酸纤维素膜3的两端上;该样品结合垫1上包被有时间分辨巧光物质标记的 NGAL单克隆抗体2;该硝酸纤维素膜3上设有检测线4(Τ线)和质控线5(C线），检测线4(Τ线） 包被有另一个表位的NGAL单克隆抗体，质控线5(C线)包被有羊抗鼠 IgG。
[0020] 上述试纸条可W通过W下制备方法制备：
[0021] 1)硝酸纤维素膜(NC膜)处理
[0022] 将NC膜贴至背衬底板的制定位置，取lOmM的抑7.4憐酸盐缓冲液将另一个表位的 NGAL单克隆抗体稀释至Img/ml，用于制备T线；用0.05M的MES缓冲液将羊抗鼠 IgG抗体稀释 至Img/ml，用于制备C线；按化1/cm划液量，通过biodot划膜仪将上述两种稀释后的抗体均 匀的划至NC膜上制备T线和C线;将划好的NC膜放置于37Γ干燥箱中，干燥过夜。
[0023] 2)样品结合垫的处理
[0024] 取玻璃纤维素膜用含有表面活性剂的缓冲液(配方:100mMPB(pH7.4)，其中含有 1.5%NaCl，5%BSA、0.5%吐溫-20和5%薦糖)浸泡lOmin进行预封闭后，取出，渐干