专利名称：：鱼肉中石油烃含量的测定方法鱼肉中石油烃含量的测定方法
技术领域：
：本发明涉及食品
技术领域：
，更具体地，本发明涉及红外光谱法用于鱼肉中石油烃含量的测定方法。
背景技术：
：鱼体内含有丰富的动物油脂和蛋白质，石油烃富集在动物油脂中，油脂又分布在鱼肉组织中与蛋白质紧密结合。人们知道，石油烃类物质中一般含有甲基和亚甲基基团，石油中烷烃、环烷烃是总烃量的70-80%，这两种烃类中的CH3CH2、CH是红外分光光度法测定的基础。通过测定在CH2基团0^键的伸缩振动2930cm-1、CH3基团C-H键的伸缩振动2960cm-1和芳香环C-H键的伸缩振动3030cm-1的吸光度值，可以测定与计算出石油烃在生物体内的含量。而紫外法分光光度法和荧光分光光度法只能测定含有芳烃的油，而芳烃仅占石油总量的20-30%,甚至更低，另外，人们知道，一些芳烃化合物也含有CH3、CH2、CH基团，因此它们在2970cm-1、2930cm-1、2900cm-1有吸收。这样，红外分光光度法测定的结果将更能体现样品中总石油烃的含量。一般而言，由于天然有机物含有大量的甲基、亚甲基，它们会干扰这种测定，造成红外测定结果大大高于实际值。例如《农业环境保护》，1997年，第16卷，第6期，第257-258,278页描述了以白姑鱼和宝石石斑鱼作试验，用荧光分光光度法研究芳族烃污染物在鱼体各组织中的分布，结果显示，芳族烃污染最严重的部位是鱼脂。但是，釆用红外分光光度法测定鱼肉中石油烃含量的方法还没有见到报道，因此，本发明人为此进行大量试验研究作出了本发明。
发明内容[要解决的技术问题本发明的目的是提供一种鱼肉中石油烃含量的测定方法，釆用该方法获得数据的重复性好，测定精密度高，方法操作简捷。[技术方案]为提高红外分光光度法测定的准确性，鱼肉需要进行消解、皂化和萃取预处理，使脂肪和蛋白质彻底水解，从中分离出石油烃，将非烃物质转化成水溶性物质，从四氯化碳萃取液中分离出去。本发明是通过下述技术方案实现的本发明的鱼肉中石油烃含量的测定方法，其特征该方法的步骤如下一、鱼肉处理步骤在鱼去鳞、去皮后取其肉，再用高速生物组织捣碎机捣碎、混勻，得到的鱼肉糊放置在密封玻璃瓶中，在温度-20'C下保存备用。所述的高速生物组织捣碎机例如江苏常州国华仪器厂以商品名JJ-2组织捣碎均浆机销售的产品。二、鱼肉的皂化将步骤(一)得到鱼肉糊解冻，称取2.0-3.0重量份鱼肉糊置于碘量瓶中，加入10-40体积份的2-10mol/L氢氧化钠溶液、加入10-25体积份的无水乙醇，在温度15-75。C下摇动皂化8-38小时，这样制得鱼肉消化液。在本申请的文件中，所述的重量份与体积份都应该是相同量级的，例如重量份为克数量级的，则体积份为亳升数量级的，除非另外指出。在本发明的意义上，皂化应该理解是脂肪酸甘油酯的碱性水解，即将脂肪酸甘油酯水解成脂肪酸盐和甘油。根据一种优选实施方式，在所述的皂化步骤中加入10-20体积份的2-10mol/L氢氧化钠溶液。根据另一种优选实施方式，在所述的皂化步骤中加入6mol/L氢氧化钠溶液。根据另一种优选实施方式，在所述的皂化步骤中加入10-20体积份的无水乙醇。更优选地，所述皂化步骤在温度25-45T:下进行12-24小时。三、萃取和吸附将步骤(二)得到的鱼肉消化液倒入分液漏斗中，然后使用四氯化碳按照所述的鱼肉消化液体积与四氯化碳体积比2/5至2/3萃取所述鱼肉消化液三次，每次萃取后得到的萃取液使用水按照所述萃取液体积与水体积比2/5至1/l进行洗涤，然后，洗涤萃取液用无水硫酸钠进行干燥，千燥后的萃取液加入50mL容量瓶中，再添加四氯化碳至标线，混匀，得到四氯化碳萃取液；其中使用的四氯化碳应该是在26003200cm"之间的吸光度小于0.03(例如使用lcm石英比色皿，无锡本色环保科技有限公司)，本发明方法的各个步骤都使用这种四氯化碳。根据一种优选实施方式，萃取时加入以所述的鱼肉消化液体积计1-5体积份的氯化钠饱和水溶液。更优选地，萃取时加入以所述的鱼肉消化液体积计3-4体积份的氯化钠饱和水溶液。所述的四氯化碳萃取液以0.8-1.2mL/min的流速通过硅酸镁柱除去杂质。其中硅酸镁是经过下述处理得到的硅酸镁取60-100目的农残级硅酸镁置于坩埚中，在高温马弗炉内在50(TC加热2h,然后在该炉内冷至约150°C，再移入干燥器中冷却至室温，在磨口玻璃瓶中保存待用。农残级硅酸Florisil(60-100目)购于北京中科三环仪器有限责任公司。四、红外光谱测定标准曲线绘制步骤首先配制标准油将正十六烷、异辛烷与苯按照体积比65:25:10进行混和而得到标准油；分别量取0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50、1.75mL所述标准油加到有少量四氯化碳的10mL容量瓶中，再添加四氯化碳至标线，混勾得到标准油溶液；其次，使用红外光谱仪，以四氯化碳为背景测定所述标准油溶液的在32002600cm"的红外吸收光谱。所述红外光谱仪例如是傅立叶变换红外光谱仪NicoletNexus，由ThermoElectronCorporation牵!)造。根据这些红外吸收光谱绘制标准曲线，得到回归方程为y=0.2642x+0.012,R2=0.9997。五、石油烃含量测定步骤使用红外光谱仪在下述条件下测定其除去杂质的四氯化碳萃取液的红外吸收光谱扫描范围3200~2600cm";扫描次数28-36;分辨率2-6cm";然后按公式(1)计算所述鱼肉中的石油烃含量=-----公式(i)1000M式中X广样品中石油烃含量，单位为毫克每克(mg/g);m-从标准曲线上得出的石油烃含量(mg/L);V,-萃取液定容体积(mL);M-样品质量，单位为克(g)。优选地，每次萃取后得到的萃取液使用水按照所述萃取液体积与水体积比2/5至1/1进行洗涤，除去萃取液中所存在的极性杂质。优选地，萃取时加入以所述的鱼肉消化液体积计1-5体积份的氯化钠饱和水溶液。更优选地，萃取时加入以所述的鱼肉消化液体积计3-4体积份的氯化钠饱和水溶液。在硅酸镁柱中加入以硅酸镁重量计0.5-2%的氧化铝，除去氧化铝能吸附的不皂化物。下面更详细地说明本发明。为了测定的准确性，鱼肉应该进行预处理。所述预处理包括脂肪皂化和蛋白质水解。脂肪酸甘油酯是甘油与脂肪酸酯化的结果。人们将脂肪酸甘油酯碱性水解称作皂化。使用过量的碱，油脂可以完全水解并转化成脂肪酸盐和甘油。在实际皂化水解动物油脂过程中，存在皂化时间过长，皂化不完全甚至难以皂化等问题。由于天然油脂与碱液互不相溶，皂化反应又是一个界面反应，因此，任何影响油水二相分散程度以及界面上二相分子接触的因素，都会影响皂化反应速度和皂化度。油脂本身的复杂组成及其在反应过程中的流变性、在水相中的分散状况、皂膜破裂的速度以及油脂分子与碱分子碰撞速度等，都是影响皂化反应的直接原因。而这些原因又与皂化反应的时间、温度和碱液用量等有关。一般而言，蛋白质的水解采用三种方法，即酸水解、碱水解和酶水解。为了简化方法，本发明釆用碱水解，在脂肪酸进行皂化的同时，鱼肉中蛋白质的水解也同时进行。所以，本发明所涉及的样品前处理即皂化处理其实上包括了脂肪的皂化和蛋白质的水解。皂化效果是该方法处理的关键步骤，如果皂化效果不好，萃取液会出现较严重的棕黄色，使得乳化现象严重，影响萃取的效果，从而影响测定结果。在皂化过程中釆用加入水量、皂化时间、温度等条件都会影响皂化效果。为此，本发明人进行了皂化条件的研究。一、鱼肉皂化条件的研究1、皂化温度对皂化效果的影响将鱼肉样品解冻，准确称取鱼肉样品2.0-3.0g(精确到O.Olg)，置于100mL碘量瓶中，加入20mL6mol/L的氢氧化钠溶液、20mL无水乙醇，加塞，充分摇动于一定温度下皂化18h,最初2h内每隔半小时振摇砩量瓶一次，制得样品消化液。皂化温度分别选择15、25、35、45、55、65、75°C。其结果见表1与图1。由图1可以看到，其测定值随着皂化温度的升高明显降低，到达35。C后变化趋于平缓，继续升高温度，超过50。C后测定值随着皂化温度的升高而缓慢降低。表明过低的温度不利于皂化反应，在15"C下的皂化液中可见未皂化的微小颗粒，皂化不完全。随着温度的升高，皂化反应速度加快，35。C下的皂化液比较澄清，皂化较完全，温度过高，样品中的一些低沸点挥发性石油烃挥发，测定值下降，因此选择皂化温度35°C,继续后续实验。2、皂化时间对皂化效果的影响其实施方式与前面相同，只是在皂化温度35"C下分别皂化8、13、18、23、28、33、38h。其结果见表2与图2。从图2可以看出测定值随着皂化时间的增加而降低，至18h后变化趋于平缓，表明随着皂化时间的延长，水解程度不断增加，阜化趋于完全。继续延长时间对测定值并无明显影响，故选择18h继续后续实验。3、碱液用量对皂化效果的影响其实施方式与前面相同，只是使用10、15、20、25、30、35mL和40mL的6mol/L的NaOH溶液在皂化温度35"C下皂化时间18h。其结果见表3与图3。图3显示测定值随着碱液用量的增加而降低，至20mL的6mol/L的NaOH溶液后变化趋于平缓，表明随着碱液用量的增大，水解程度不断增加，皂化趋于完全，继续增大碱液用量不再有明显变化，因此选择20mL的6mol/LNaOH的溶液进行后续实验。4、响应面分析通过单因素实验发现皂化温度、皂化时间和碱液用量对石油烃含量的测定都有明显的影响，而且这三者之间存在一定的交互影响。传统的单因素分析法无法完成交互影响因素的优化，但是响应面分析法可以满足这一要求。响应面分析法是数学方法和统计技术相结合的一种分析方法，实验中广泛用来确定多变量的影响效果和优化实验过程、条件，中心旋转组合设计是响应面分析法常用的一种实验设计方法。试验设计和结果见表l。整个试验设计包括15个试验点，试验1-12是析因点，自变量取值范围在各因素所构成的三维顶点，试验13-15是零点，为区域的中心点，中心实验重复3次，用以估计实验误差。_表lRSA试验设计和结果_<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表2方差分析表<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表3参数估计表<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>从表2和表3可以看出，总回归模型是显著的，失拟项不显著。响应面分析方法的图形是特定的响应面Y对应的因素X,、X2、&构成的一个三维空间，可以直观地反映各因素对响应值的影响，从试验所得的响应面分析图4-6中可以看出响应值与3个影响因素皂化时间、皂化温度和碱液用量的关系。从图中可以看出在一定的范围内，总的趋势都是随着皂化时间、皂化温度和碱液用量的增加，石油烃的含量先减少后增加趋于平缓。釆用SAS分析系统对回归方程进行分析，优化了皂化条件皂化温度为30'C,时间为20h，碱液用量为16.5mL。白鲢鱼在此条件下进行皂化，结合溶剂萃取和吸附柱吸附，测得鱼肉中石油烃的平均含量为0.082lmg/g。二、萃取和吸附研究将所述消化液全部倒入500mL的分液漏斗中，用20mL饱和氯化钠溶液和80mL蒸馏水洗涤碘量瓶，将洗涤液依次转移到分液漏斗中，用40mL四氯化碳分三次萃取样品的消化液，合并三次萃取液，并水洗涤三次，萃取液通过放置约2g无水硫酸钠于滤纸锥顶处的坡璃漏斗流入50mL容量瓶内。待萃取液流入容量瓶后，量取适量四氯化碳洗涤无水硫酸钠层及漏斗，洗涤液并入50mL容量瓶，加四氯化碳至标线，混匀，得到四氯化碳萃取液。四氯化碳萃取液经硅酸镁柱吸附处理后用红外光谱仪测定。1、标准油的选择红外分光光度法充分考虑了烷烃和芳香烃的共同影响，规定一种固定配比的混合油为标准油，当待测样品中各种烃类的组成有所变化时，对红外分光光度法的测定影响不大。本文所用的标准油按照国家标准GB/T16488-1996的规定，即由65%正十六烷、25%异辛烷和10%苯混合配制的。2、萃取条件的选择鱼肉样品皂化后加入已知量的标准油进行四氯化碳用量、萃取次数等萃取条件的优化。结果表明，用40mL的四氯化碳分三次萃取即可完全萃取出样品中的石油烃。在萃取过程中有时会出现乳化现象，加入少量(l-3mL)的氯化钠饱和溶液有助于破乳，使得溶液更容易分层，提高萃取效率。结果见表4。表4样品加入标准油回收实验<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>3、柱条件的选择(l)装柱方法的选择国家标准GB/T16488-1996中指出硅酸镁装柱之前要用纯净水浸泡12h,然后湿法上柱，但是在实际操作过程中，湿法上柱难以避免会引入水，从图9可以看出干法上柱的效果比湿法上柱的效果好。因为湿法上柱容易引入水，水的存在会严重干扰红外测定，即使过柱后的溶液用无水硫酸钠进行脱水，结果也没有干法上柱的效果好。另一方面湿法上柱，水的存在会影响萃取液与硅酸镁的充分接触，降低了吸附效率。所以试验中选用干法上柱。柱子下面的活塞一定不能涂润滑剂，因为润滑剂会被四氯化碳带到流出液中，降低结果准确性。P)吸附剂用量的确定国家标准GB/T16488-1996中规定吸附剂硅酸镁在玻璃层析柱(内径为10mm,长为200mm)中的填充高度为80mm,GB/T16488-1996所针对的测定样品是水质，而本试验的样品是鱼肉，考虑到不同样品经过四氯化碳萃取后萃取溶剂中所含的杂质量也会有差异，于是本试验选取了不同量的吸附剂过柱，从而确定吸附剂用量。在具体的装柱过程中发现填充高度80mm左右的吸附剂的质量在2g左右，于是分别选取了lg、2g、3g硅酸镁吸附剂对萃取液进行吸附。lg、3g硅酸镁吸附剂吸附后的红外测定值分别与2g吸附剂吸附后的测定值进行比较。从表5中的测定值可以看出lgMgSi03吸附剂无法完全去除杂质，而表6的结果则表明2gMgSi03吸附剂可以完全去除杂质，所以本试验后续实验中硅酸镁吸附剂的使用量都是2g。表5MgSi03用量的比较实验结果一<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注误差与相对误差是以2g硅酸镁吸附后的测定值为真值求得(3)柱流速的确定四氯化碳萃取液在硅酸镁柱中的流速不宜过快也不宜过慢。流速过快，萃取液和硅酸镁吸附剂的接触时间很短，吸附不完全造成分离效果较差；由于四氯化碳是挥发性溶剂，如果流速过慢，则会影响测定结果。所以，流速控制在1.0mL/min左右即可。4、萃取步骤的优化在实验过程中发现用四氯化碳萃取皂化液得到的萃取液经过硅酸镁吸附剂吸附后的红外测定值十分的高，对吸附后的溶液用高效液相色谱测定，结果发现吸附后的溶液中仍然有胆固醇残留；红外谱图中(见图10)出现了羰基吸收峰。于是对萃取步骤进行了改进，对萃取液进行了水洗和在硅酸镁柱中加入少量的氧化铝，由于石油烃不溶于水而萃取液中所存在的极性杂质可溶于水，氧化铝可以吸附掉不皂化物如色素能物质的千扰。经过水洗步骤后又对吸附后的溶液进行了高效液相色谱测定和红外涂膜法测定，结果表明改进后的步骤有利于杂质的去除，去除了红外测定干扰物质。对未优化和经优化步骤后的萃取液进行红外扫描(图11)，从图上可以看出两图的C-H键的振动吸收峰的位置发生了改变，这是由于未水洗的萃取液中残留杂质对吸收的影响。5、萃取溶液的稳定性试验过程中对经硅酸镁吸附后的四氯化碳萃取溶液的稳定性作了测定，结果表明最后得到的四氯化碳萃取溶液密封保存在冰箱里(1-4。C)一个月后再测定其得到的结果不变,说明四氯化碳萃取溶液的稳定性较好。图U是硅酸镁吸附后的四氯化碳萃取溶液放置不同时间段后测定的红外光谱图。6、方法检出限方法检出限是确定一种特定分析方法在给定的置信度内从样品中检出待测物质的最小浓度或最小值，其意义在于精确判定样品中是否存有浓度高于空白的待测物质。本实验釆用美囯EPASW-846中所规定的方法检出限MDL=3.143Sb作为计算依据，分别配制1.50mg/L的标准油溶液7组进行测定，算得方法检出限为0.14mg/L(结果见表7)。表7方法检出限测定(mg/L)序号测定值(Xb)一121.57231.47541.53951.58661.61371.528平均值(^)1.549标准偏差(Sb)0.045方法检出限(MDL)0.147、精密度精密度是指多次重复测定同一量时各次测定值之间彼此相互一致的程度。好的精密度是保证获得良好准确度的先决条件，测量精密度不好,就不可能有良好的准确度。测定过程中的随机误差决定了测定结果的精密度，精密度用偏差、标准偏差或相对标准偏差的形式表示，偏差反映精密度的准确性较差，而标准偏差和相对标准偏差是表示精密度的好方法。为了验证红外分光光度法测定结果的重复性和精密度，对鲢鱼样品进行平行测定6次，测定结果见表8。根据测得的数据计算出相对标准偏差为5.9%,表明本方法精密度较好，具有较好的重现性。表8鲢鱼石油烃测定的精密度实验测定结果(mg/g)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>8、准确度准确度是在一定实验条件下测定的量值平均值与真值相符合的程度。当系统误差存在时，会使测得的量值与被测定量的真值之间产生偏移。偏移大小以误差或相对误差来表示，误差或相对误差越小，表示测得值与真值之间的偏倚越小，准确度越高。在实际工作中，常用加入标准物质或标准方法进行对比试验，在无标准物质或标准方法时，常用加用加标回收试验来估计测定值的准确度。选取高、中、低三个浓度水平加入到样品中进行回收率测试，低浓度的回收率测定结果在70-85%之间，中、高浓度的回收率测定结果在90-105%之间，表明本实验准确度较高，结果见表9。表9鲢鱼石油烃测定的加标回收试验<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>由此可见通过测定方法检出限、精密度、准确度，证明了红外分光光度法测定水产品中石油烃残留含量的可行性。通过对萃取步骤、吸附步骤进行了优化，去除了杂质的干扰，提高萃取和吸附效率。用40mL四氯化碳分三次对皂化液进行萃取，萃取液经水洗后用干法上柱的硅酸镁吸附柱进一步吸附杂质，吸附溶液红外扫描。得到的白鲢鱼鲢鱼石油烃测定的中石油烃残留的含量平均值大约为0.10mg/g。本发明通过鱼肉皂化、萃取步骤、吸附步骤，除去杂质的干扰，实现红外分光光度法快速准确地测定水产品中石油烃残留含量，本发明方法的检出限低，相对标准偏差小，准确度高。图1是皂化温度对石油烃含量测定的影响图2是皂化时间对石油烃含量测定的影响图3是碱液用量对石油烃含量测定的影响图4是皂化时间与皂化温度对石油烃含量影响的响应面图图5是碱液用量与皂化温度对石油烃含量影响的响应面图图6是碱液用量与阜化时间对石油烃含量影响的响应面图图7是标准油的标准曲线图8是不同浓度标准油的红外光谱图(32002600cm")图9是同一样品干法过柱和湿法过柱后的红外谱图图IO是石油烃测定溶液通过涂膜法得到的红外谱图图11是未优化和经过优化后的萃取液的红外光谱图图12是硅酸镁吸附后的四氯化碳萃取溶液放置不同时间后测定的红外光谱图。具体实施方式实施例l白鲢鱼中石油烃含量测定按照下述步骤进行测定一、鱼肉处理步骤从青山巿场购买的白鲢鱼去鳞、去皮后取其肉，再用江苏常州国华仪器厂生产的JJ-2组织捣碎均浆机捣碎、混匀，得到的鱼肉糊放置在密封玻璃瓶中，在温度-2(TC下保存备用。二、鱼肉的皂化将步骤(一)得到鱼肉糊解冻，称取2.5克鱼肉糊置于碘量瓶中，加入15ml的5mol/L分析纯氢氧化钠溶液(去离子水，符合GB/T6682中一级水标准，国药集团化学制剂有限公司)、加入20mL无水乙醇，在30。C下摇动皂化20h,制得鱼肉消化液。三、萃取和吸附将步骤(二)得到的鱼肉消化液lOOmL倒入分液漏斗中，然后使用lOOmL分析纯四氯化碳(国药集团化学制剂有限公司产品)萃取所述鱼肉消化液，萃取三次，然后，合并萃取液用分析纯无水硫酸钠(国药集团化学制剂有限公司产品)进行干燥，量取10mL干燥萃取液与10mL洗涤四氯化碳的洗涤液一起加到50mL容量瓶中，添加四氯化碳至标线，混勻，得到四氯化碳萃取液；然后，让所述的四氯化碳萃取液以0.8mL/min通过按照前面方法处理的硅酸镁柱，除去杂质。四、红外光谱测定标准曲线绘制步骤首先配制标准油将正十六烷、异辛烷与苯按照体积比65:25:10进行混和而得到标准油；分别量取0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50、1.75mL所述标准油加到有少量四氯化碳的10mL容量瓶中，再添加四氯化碳至标线，混匀得到标准油溶液；其次，使用红外光谱仪，以四氯化碳为背景测定所述标准油溶液的在33002600cm"的红外吸收光谱；根据这些红外吸收光谱绘制标准曲线，得到回归方程为y=0.2642x+0.012,R2=0.9997;五、石油烃含量测定步骤使用傅立叶红外光谱仪NicoletNexus(ThermoElectronCorporation)在下述条件下测定上述四氯化碳萃取液的红外吸收光谱，测定条件如下扫描范围32002600cm";扫描次数32;分辨率4cm";然后按公式(1)计算所述鱼肉中的石油烃含量Xl=----公式(！)励OM式中X,-样品中石油烃含量，单位为亳克每克(mg/g);m-从标准曲线上得出的石油烃含量(mg/L);V,-萃取液定容体积(mL);M-样品质量，单位为克(g)。即得到鲢鱼中的石油烃含量为0.1060mg/g。实施例2草鱼中石油烃含量测定按照下述步骤进行测定一、鱼肉处理步骤从青山巿场购买的草鱼去鳞、去皮后取其肉，再用江苏常州国华仪器厂生产的JJ-2组织捣碎均浆机捣碎、混匀，得到的鱼肉糊放置在密封玻璃瓶中，在温度-20'C下保存备用。二、鱼肉的皂化将步骤(一)得到鱼肉糊解冻，称取2.8g鱼肉糊置于碘量瓶中，加入15mL的6mol/L分析纯氢氧化钠溶液(去离子水，符合GB/T6682中一级水标准，国药集团化学制剂有限公司)、加入15mL无水乙醇，在3(TC下摇动皂化20h,制得鱼肉消化液。三、萃取和吸附将步骤(二)得到的鱼肉消化液100mL倒入分液漏斗中，然后使用100mL分析纯四氯化碳(国药集团化学制剂有限公司产品)萃取所述鱼肉消化液，萃取三次，然后，合并萃取液用分析纯无水硫酸钠(国药集团化学制剂有限公司产品)进行干燥，量取10mL千燥萃取液与10mL洗涤四氯化碳的洗涤液一起加到50mL容量瓶中，添加四氯化碳至标线，混匀，得到四氯化碳萃取液；然后，让所述的四氯化碳萃取液以1.0mL/min通过按照前面方法处理的硅酸镁柱，除去杂质。四、红外光谱测定标准曲线绘制步骤首先配制标准油将正十六烷、异辛烷与苯按照体积比65:25:10进行混和而得到标准油；分别量取0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50、1.75mL所述标准油加到有少量四氯化碳的10mL容量瓶中，再添加四氯化碳至标线，混匀得到标准油溶液；其次，使用红外光谱仪，以四氯化碳为背景测定所述标准油溶液的在33002600cm"的红外吸收光谱；根据这些红外吸收光谱绘制标准曲线，得到回归方程为y=0.2642x+0.012,R2=0.9997;五、石油烃含量测定步骤使用傅立叶红外光谱仪NicoletNexus(ThermoElectronCorporation)在下述条件下测定上述四氯化碳萃取液的红外吸收光谱，测定条件如下扫描范围3200~2600cm";扫描次数30;分辨率4cm-1;然后按上述公式(1)计算，即得到草鱼中的石油烃含量为0.0904mg/g。实施例3鱿鱼中石油烃含量测定按照下述步骤进行测定一、鱼肉处理步骤从青山巿场购买的鱿鱼取其肉，再用江苏常州国华仪器厂生产的JJ-2组织捣碎均浆机捣碎、混匀，得到的鱼肉糊放置在密封玻璃瓶中，在温度-2(TC下保存备用。二、鱼肉的皂化将步骤(一)得到鱼肉糊解冻，称取2.3克鱼肉糊置于碘量瓶中，加入20mL的6moI/L分析纯氢氧化钠溶液(去离子水，符合GB/T6682中一级水标准，国药集团化学制剂有限公司)、加入15mL无水乙醇，在35t:下摇动皂化18h,制得鱼肉消化液。三、萃取和吸附将步骤(二)得到的鱼肉消化液100mL倒入分液漏斗中，然后使用100mL分析纯四氯化碳(国药集团化学制剂有限公司产品)萃取所述鱼肉消化液，萃取三次，然后，合并萃取液用分析纯无水硫酸钠(国药集团化学制剂有限公司产品)进行干燥，量取10mL干燥萃取液与10mL洗涤四氯化碳的洗涤液一起加到50mL容量瓶中，添加四氯化碳至标线，混匀，得到四氯化碳萃取液；然后，让所述的四氯化碳萃取液以0.9mL/min通过按照前面方法处理的硅酸镁柱，除去杂质。四、红外光谱测定标准曲线绘制步骤首先配制标准油将正十六烷、异辛烷与苯按照体积比65:25:10进行混和而得到标准油；分别量取0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50、1.75mL所述标准油加到有少量四氯化碳的10mL容量瓶中，再添加四氯化碳至标线，混勻得到标准油溶液；其次，使用红外光谱仪，以四氯化碳为背景测定所述标准油溶液的在33002600cm"的红外吸收光谱；根据这些红外吸收光谱绘制标准曲线，得到回归方程为y=0.2642x+0.012，R2=0.9997。五、石油烃含量测定步骤使用傅立叶红外光谱仪NicoletNexus(ThermoElectronCorporation)在下述条件下测定上述四氯化碳萃取液的红外吸收光谱，测定条件如下扫描范围32002600cm";扫描次数32;分辨率4cm";然后按上述公式(1)计算，即得到鱿鱼中的石油烃含量为0.1121mg/g。实施例4太湖银鱼中石油烃含量测定按照下述步骤进行测定一、银鱼肉的处理步骤从青山巿场购买的太湖银鱼去皮、去头取其肉，再用江苏常州国华仪器厂生产的JJ-2组织捣碎均浆机捣碎、混勾，得到的鱼肉糊放置在密封玻璃瓶中，在温度-2(TC下保存备用。二、白虫下肉的皂化将步骤(一)得到鱼肉糊解冻，称取3.0克鱼肉糊置于砩量瓶中，加入16.5mL的6mol/L分析纯氢氧化钠溶液(去离子水，符合GB/T6682中一级水标准，国药集团化学制剂有限公司)、加入20mL无水乙醇，在3(TC下摇动皂化20h，制得鱼肉消化液。三、萃取和吸附将步骤(二)得到的鱼肉消化液100mL倒入分液漏斗中，然后使用lOOmL分析纯四氯化碳(国药集团化学制剂有限公司产品)萃取所述鱼肉消化液，萃取三次，然后，合并萃取液用分析纯无水硫酸钠(国药集团化学制剂有限公司产品)进行干燥，量取10mL干燥萃取液与10mL洗涤四氯化碳的洗涤液一起加到50mL容量瓶中，添加四氯化碳至标线，混勾，得到四氯化碳萃取液；然后，让所述的四氯化碳萃取液以1.0mL/min通过按照前面方法处理的硅酸镁柱，除去杂质。四、红外光谱测定标准曲线绘制步骤首先配制标准油将正十六烷、异辛烷与苯按照体积比65:25:10进行混和而得到标准油；分别量取0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50、1.75mL所述标准油加到有少量四氯化碳的10mL容量瓶中，再添加四氯化碳至标线，混句得到标准油溶液；其次，使用红外光谱仪，以四氯化碳为背景测定所述标准油溶液的在3200~260011-1的红外吸收光谱；根据这些红外吸收光谱绘制标准曲线，得到回归方程为Y=0.2642x+0.012，R2=0.9997。五、石油烃含量测定步骤使用傅立叶红外光谱仪NicoletNexus(ThermoElectronCorporation)在下述条件下测定上述四氯化碳萃取液的红外吸收光谱，测定条件如下扫描范围3200~2600cm";扫描次数32;分辨率4cm";然后按上述公式(1)计算，即得到太湖银鱼中的石油烃含量为0.0875mg/g。权利要求1、鱼肉中石油烃含量的测定方法，其特征该方法的步骤如下一、鱼肉处理步骤在鱼去鳞、去皮后取其肉，再用高速生物组织捣碎机捣碎、混匀，得到的鱼肉糊放置在密封玻璃瓶或保险盒中，在温度-20℃下保存备用，二、鱼肉的皂化将步骤(一)得到的鱼肉糊解冻，称取2.0-3.0重量份鱼肉糊置于碘量瓶中，加入10-40体积份的2-10mol/L氢氧化钠溶液、加入10-25体积份的无水乙醇，在温度15-75℃下摇动皂化8-38小时，这样制得鱼肉消化液；三、萃取和吸附将步骤(二)得到的鱼肉消化液倒入分液漏斗中，使用四氯化碳按照所述的鱼肉消化液体积与四氯化碳体积比2/5至2/3萃取所述鱼肉消化液三次，每次萃取后得到的萃取液使用水按照所述萃取液体积与水体积比2/5至1/1进行洗涤，然后，萃取液用无水硫酸钠进行干燥，将干燥后的萃取液加入50mL容量瓶中，添加四氯化碳至标线，混匀，得到四氯化碳萃取液；所述的四氯化碳萃取液以0.8-1.2mL/min通过硅酸镁吸附柱除去杂质。四、红外光谱测定标准曲线绘制步骤首先配制标准油将正十六烷、异辛烷与苯按照体积比65∶25∶10进行混和而得到标准油；分别量取0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50、1.75mL所述标准油加到有少量四氯化碳的10mL容量瓶中，再添加四氯化碳至标线，混匀得到标准油溶液；其次，使用红外光谱仪，以四氯化碳为背景测定所述标准油溶液的在3300～2600cm-1的红外吸收光谱；根据这些红外吸收光谱绘制标准曲线，得到回归方程为y＝0.2642x+0.012，R2＝0.9997；五、石油烃含量测定步骤使用红外光谱仪在下述条件下测定其除去杂质的四氯化碳萃取液的红外吸收光谱扫描范围3200～2600cm-1；扫描次数28-36；分辨率2-6cm-1；然后按公式(1)计算所述鱼肉中的石油烃含量2、根据权利要求l所述的方法，其特征在于所述皂化步骤是在温度25-45"下进行的。3、根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的皂化步骤进行12-24小时。4、根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的皂化步骤加入10-20体积份的2-10mol/L氢氧化钠溶液。5、根据权利要求l所述的方法，其特征在于每次萃取后得到的萃取液使用水按照所述萃取液体积与水体积比2/5至1/1进行洗涤，除去萃取液中所存在的极性杂质。6、根据权利要求l所述的方法，其特征在于萃取时加入以所述的鱼肉消化液体积计1-5体积份的氯化钠饱和水溶液。7、根据权利要求l所述的方法，其特征在于萃取时加入以所述的鱼肉消化液体积计3-4体积份的氯化钠饱和水溶液。8、根据权利要求l所述的方法，其特征在于和在硅酸镁柱中加入以硅酸镁重量计0.5-2%的氧化铝，除去氧化铝能吸附的不皂化物。全文摘要本发明涉及采用红外光谱法鱼肉中石油烃含量的测定方法。本发明通过鱼肉皂化、萃取步骤、吸附步骤，除去杂质干扰，实现红外分光光度法快速准确地测定水产品中石油烃残留含量，本发明方法的检出限低，相对标准偏差小，准确度高。文档编号G06F19/00GK101241074SQ200810084978公开日2008年8月13日申请日期2008年3月12日优先权日2008年3月12日发明者坚汤,燕赵,顾小红申请人:江南大学