专利名称：一种用于生物杀菌剂活菌代谢物有效组份的生物膜提取法的制作方法
技术领域：
本发明属于一种制备生物农药制剂的技术，特别是一种用于生物杀菌剂代谢物有效组份的生物膜提取法。
传统的杀菌剂绝大部分都是化学农药。其杀菌的主要成份(有效成份)是通过其化学物质的作用来抑制杀灭病菌，由于这类化合物在自然界中很难分解，残留期长，对生物有害，在生产使用中势必带来污染和药物残留等药害问题。为了克服上述缺点，人们研制开发出许多对人畜无害，不污染环境，还能保护害虫天敌的微生物农药，但当前国内所出现的生物杀菌剂因只能是通过微生物活体细胞自身的代谢活动来抑制有害微生物，这样势必带来防效稳定性差，作用效果慢等缺点，其原因就在于这些生物制剂施用后，微生物活体细胞的存活、代谢强弱是和施用地的环境密切相关的，各种不同环境的差异必然带来作用效果上的差异。为了克服上述生物农药的局限，本申请人曾研制了一种以发酵液活菌代谢物中有效抗菌物质的多少为取舍的微生物农药杀菌剂。该生物杀菌剂的成份是由所筛选的枯草芽孢杆菌(Bacillu subtili)及其代谢物为主要杀菌物质成份(见中国专利申请号02110602.9，申请日2002年1月18日)，由于该发明所用培养基配方与传统技术的配方有所不同，其活菌代谢物中有效抗菌物质成份含量高，具有使用方便，防治效果受环境因素影响小的特点，但当采用常规方法的蒸馏法提取、吸附提取，滤膜提取，沉淀物等电点提取法提取其有效抗菌物质时，存在成本高，效果差，市场难以接受的缺点。如何采用措施实现低成本最佳提取才能理想地分离出发酵液活菌代谢物中的具有活性最高，有效组份量最大的有效抗菌物成为一道有待科研人员继续探索的技术难题。
有鉴于此，本发明的目的是要设计提供一种用于生物杀菌剂活菌代谢物有效组份的生物膜(分离)提取法，它可适用于枯草芽孢杆菌类生物杀菌剂的提取，使得所制备的这类生物农药中活性最高、组份量(成份含量)最大的有效抗菌物能够实现最佳提取，且提取工艺简单、成本低，提取物可以象一般农药一样方便使用，且见效速度快，防治效果稳定。
本发明是以如下技术方案实现的该提取方法依序包括以下步骤将已经发酵好的发酵罐中的微生物即芽孢杆菌发酵菌液(为一种高产抗菌物质的发酵液)经100-150目网筛过滤去渣——调PH值6-6.4至等电点(以便有效物沉淀)——在温度＜20℃以下至少静置0.5小时(如静置0.5-1.5小时)后去上清液——膜分离提取(即利用生物膜提取获有效组份)——添加填充助剂SH—烘干粉碎——包装得成品。
本发明在具体实施时仍采用常规微生物工业发酵的设备条件进行提取前的发酵。在进行实际提取工艺步骤时还具有以下几点技术特征一、所述的膜分离提取工序步骤是指利用孔径为30000-100000目的生物膜对菌液进行分离过滤以得到发酵液中活菌代谢物中组份量最大的有效抗菌物。本发明之所以采用(上述孔径的)生物膜取提工艺，是鉴于生物膜在废水生物处理，医药食品加工，生化技术领域，包括微生物发酵物处理等领域应用时皆有其独特的适用性和良好的效果，而本发明之所以采用上述孔径的生物膜分离提取工艺，又是鉴于如下试验结果当采用不同孔径生物膜来分离发酵液的有效代谢物组份，并将所获得的这些不同的组份做抑菌圈试验，从而看出不同孔径的组份对病菌的生物抗菌活性是不相同的，当采用孔径为600-1400目生物膜分离提取时，其抑菌圈直径为0；当采用孔径为10000-20000目生物膜分离提取时，其抑菌圈直径皆为0.5mm；当采用孔径为30000目生物膜分离提取时，其抑菌圈直径为1.2mm；当孔径为50000目生物膜分离提取时，其抑菌圈直径为14mm；当孔径为70000目生物膜分离提取时，其抑菌圈直径为8mm；当孔径为100000-200000目生物膜分离提取时其抑菌圈直径为5-4mm；当孔径为500000目生物膜分离提取时，其抑菌圈直径为3mm。从以上试验数据可看出以通过30000-200000目孔径的滤液组份对假单孢病原菌(为防治对象的病原指示菌)的抗菌活性最高。
二、所添加的填充助剂SH是由农副产品有机物和高岭土组成，并经消毒粉碎过200目筛后所得的细粉。
本发明适用于枯草芽孢杆菌所产生抗菌物质的提取，与已有技术比较，利用本发明的生物膜提取工艺可使得该生物农药制剂中有效杀菌物质成份显著提高，这种提取物在使用中可以象一般农药一样方便使用，兼有生物农药和化学农药的使用优点，且提取成本低。由于富含生化产物，可以直接作用于防治对象，其作用效果快于活菌，使用中受环境影响小，使用范围广，不仅能使用于根部、叶面也一样使用，防治效果稳定，有利提高经济效益。
权利要求
1.一种用于生物杀菌剂活菌代谢物有效组份的生物膜提取法，其特征是该提取方法依序包括以下步骤将已经发酵好的发酵罐中的微生物即芽孢杆菌(Bacillu subtilis)发酵菌液经100-150目网筛过滤去渣——调PH值6-6.4至等电点，以便有效物沉淀——在温度＜20℃以下至少静置0.5-1.5小时后去上清液——膜分离提取，即利用生物膜提取获得有效组份——添加填充助剂SH——烘干粉碎——包装得成品。
2.根据权利要求1所述的生物膜提取法，其特征是所述的膜分离提取工序步骤是指利用孔径为30000-100000目的生物膜对菌液进行分离过滤以得到发酵液活菌代谢物中组份量最大的有效抗菌物。
3.根据权利要求1所述的生物膜提取法，其特征是所添加的填充助剂SH是由农副产品有机物和高岭土组成，并经消毒粉碎过200目筛后所得的细粉。
全文摘要
一种用于生物杀菌剂活菌代谢物有效组份的生物膜提取法，其特征是该提取法含括以下步骤将已经发酵好的微生物即芽孢杆菌发酵菌液经100－150目网筛过滤去渣—调pH值6－6.4至等电点—在温度＜20℃以下至少静置0.5小时后去上清液—利用生物膜分离提取—添加填充助剂SH—烘干粉碎—包装得成品，其中所述生物膜提取步骤是指利用孔径为30000－100000目的生物膜对菌液进行分离过滤以得到活菌代谢物中组份量最大的有效抗菌物。本发明的生物膜提取法可使制剂中有效杀菌物成份显著提高，提取成本低，可以象一般农药一样方便使用，还兼有生物农药和化学农药的使用优点。由于富含生化产物，可以直接作用于防治对象，根部和叶面能一样使用，其作用效果快于活菌，使用中受环境影响小，防治效果稳定，有利提高经济效益。
文档编号A01N63/04GK1444855SQ02111070
公开日2003年10月1日 申请日期2002年3月15日 优先权日2002年3月15日
发明者林国宪 申请人:福建泰禾生化科技股份有限公司