专利名称：：一种调节海水鱼免疫机能的肽类饲料添加剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及饲料添加剂，尤其涉及一种调节海水鱼免疫机能的肽类饲料添加剂。技术背景随着海水鱼网箱养殖业的快速发展，养殖密度过大、投饲频率增加、水质恶化等原因导致鱼感染疾病的几率大大升高，且有越来越严重的趋势，这给养殖业造成了巨大的经济损失。对养殖海水鱼病害的防治，目前大多采用抗生素。随着抗生素的大量使用和长期使用，不但防治效果差，而且还会造成以下不良后果如细菌耐药菌株的产生、水体正常微生物种群失调、动物内脏机能损伤(Weston,1996)。此外，由于不规范地使用药物的品种和剂量，造成了药物在水产品中的残留，使得水产品的食品安全性受到了影响，对人类的健康带来严重的威胁。给水产动物服用免疫调节剂，以提高动物体的特异性和非特异性免疫机能，从而提高其抗病能力，是一种防治水产动物疾病的有效思路。已有研究发现，维生素C、维生素E、葡萄糖等可以提高养殖鱼的免疫功能，增强抗病能力(Lall等，1993;Siwieki等，1994;Waagbo等，1994;Cuesta等，2001)。由于肽类具有多种生物学活性，是一种安全无公害的营养添加剂，近年来用作词料添加剂已有研究报道，但这些研究主要限于畜禽等陆生动物，在水产动物上的研究很少。目前，已有确凿证据证明胸腺五肽可以提高人的免疫机能，对治疗风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、各种免疫细胞机能低下的疾病(如病毒性肝炎、预防上呼吸道感染、顽固性口腔溃疡等)和肿瘤的辅助治疗均具有明显疗效。因此，肽类完全具有开发成为水产动物免疫调节剂的潜力，目前仅有利用微生物发酵产生的混合肽类成分用作水产动物免疫调节剂的报道，但这些产品多是微生物发酵后的混合物，未经任何分离，各批次之间的效果有较大差异，另外，这些产品的成本也比较高，目前在生产实践中应用较少。
发明内容本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种调节海水鱼免疫机能的肽类饲料添加剂。它是由鳕鱼鱼肉及鱼皮、内脏经过酶水解产生的分子量范围分别为100500Da、5001500Da、15003000Da、30005000Da、50008000Da的肽中的三种或三种以上按比例组成。调节海水鱼免疫机能的饲料添加剂中各种肽的配比如下1)分子量为15003000Da、5001500Da、100500Da三种肽的比例是1:150:1100;2)分子量为30005000Da、5001500Da、100500Da三种肽的比例是1:1100:1250;3)分子量为50008000Da、5001500Da、100500Da三种肽的比例是1:卜200:卜500;4)分子量为30005000Da、15003000Da、5001500Da、100500Da四种肽的比例是h12.5:1100:1250;5)分子量为50008000Da、15003000Da、5001500Da、100500Da四种肽的比例是l:15:1200:1500;6)分子量为50008000Da、30005000Da、15003000Da、5001500Da、100500Da五种肽的比例是1:12:15:卜200:1500。上述复合物混合均匀，即得到调节海水养殖鱼类免疫机能的肽类饲料添加剂，该添加剂添加到全价配合饲料中，按全价配合饲料计，其添加量为15%。本发明从我国主要养殖海水鱼类的生理特点出发，综合运用营养学、免疫学技术及其它现代生物技术手段，将鳕鱼蛋白酶水解多肽经超滤分离及喷雾干燥等分为分别为100500Da、5001500Da、15003000Da、30005000Da、50008000Da的肽段，通过合理搭配，研制出一种能够调节海水养殖鱼类免疫机能的肽类伺料添加剂。应用本发明的饲料添加剂能够明显提高海水鱼血清和皮肤粘液中溶菌酶的水平，从而增强鱼类抵抗病原菌感染的能力；显著提高海水养殖鱼类血清和皮肤粘液IgM水平及血细胞呼吸爆发活性，提高鱼类免疫应答水平，从而提高养殖鱼类的抗病力。还可以显著提高鱼类日增重，并降低馆料系数，从而达到较好的经济效益。经多次试验、分析，本发明调节海水养殖鱼类免疫机能的肽类饲料添加剂高效、安全、无公害，饲喂的鱼类完全符合食品卫生要求。具体实施方式本发明的调节海水养殖鱼类免疫机能的词料添加剂为粉末状，使用时，将该饲料添加剂添加到全价饲料中并混合均匀，其添加量为15%。调节海水鱼免疫机能的肽类饲料添加剂以鳕鱼鱼肉及鱼皮、内脏为原料，通过双酶(Flavourzyme和Alcalase)水解，经不同截流分子量的滤膜超滤，得到分子量范围分别为100500Da、5001500Da、15003000Da、30005000Da、50008000Da的肽，喷雾干燥，得到黄色粉末，不同分子量的肽经合理配比，制得调节海水鱼免疫机能的饲料添加剂。实施例1:将分子量为15003000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照1:10:50的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例2:将分子量为15003000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照1:5:75的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例3:将分子量为15003000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照1:2.5:90的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例4:将分子量为15003000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照1:1.25:IOO的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例5:将分子量为15003000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照1:20:80的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例6:将分子量为15003000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照1:40:75的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例7:将分子量为30005000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照1:10:200的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例8:将分子量为30005000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照1:5:225的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例9:将分子量为30005000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照1:20:IOO的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的词料添加剂。实施例10:将分子量为30005000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照1:50:105的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例11:将分子量为30005000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照1:75.5:50的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例12:将分子量为30005000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照1:100:25.5的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的词料添加剂。实施例13:将分子量为50008000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照h2.5:500的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的词料添加剂。实施例14:将分子量为50008000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照1:10:400的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例15:将分子量为50008000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照1:25:300的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例16:将分子量为50008000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照1:50:225的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例17:将分子量为50008000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照1:100:185的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例18:将分子量为50008000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照1:150:125的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例19:将分子量为30005000Da、15003000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照1:1:55:225的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例20:将分子量为30005000Da、15003000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照l:1.05:65:200的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例21:将分子量为30005000Da、15003000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照1:1.25:40:250的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例22:将分子量为30005000Da、15003000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照l:1.5:75:185的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例23:将分子量为30005000Da、15003000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照1:2.05:25:175的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例24:将分子量为30005000Da、15003000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照l:2.5:15:150的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例25:将分子量为5000,0Da、15003000Da、5001500Da、画500Da三种肽按照l:1:100:150的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例26:将分子量为50008000Da、15003000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照1:1.05:55:200的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例27:将分子量为50008000Da、15003000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照1:1.15:75:100的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的词料添加剂。实施例28:将分子量为50008000Da、15003000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照1:1.5:125:125的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例29:将分子量为50008000Da、15003000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照1:1.75:50:400的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例30:将分子量为50008000Da、15003000Da、5001500Da、100500Da三种肽按照h2.5:25:500的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例31:将分子量为50008000Da、30005000Da、15003000Da、5001500Da、100500Da五种肽按照1:1:2.5:125:500的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的伺料添加剂。实施例32:将分子量为50008000Da、30005000Da、15003000Da、5001500Da、100~500Da五种肽按照1:1.5:1.5:100:400的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例33:将分子量为50008000Da、30005000Da、15003000Da、5001500Da、100500Da五种肽按照1:2:4:100:225的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例34:将分子量为50008000Da、30005000Da、15003000Da、5001500Da、100500Da五种肽按照1:1.75:2.5:50:75的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例35:将分子量为50008000Da、30005000Da、15003000Da、5001500Da、100500Da五种肽按照1:1.5:5:25:50的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。实施例36:将分子量为50008000Da、30005000Da、15003000Da、5001500Da、100500Da五种肽按照1:2:1.05:10:150的重量比例组合，并将上述物质混合均匀，得到一种调节海水养殖鱼类免疫机能的饲料添加剂。应用实施例1经课题组在浙江宁波、温州、台州等地50多个海水鱼养殖场进行的对比试验表明在海水鱼全价配合饲料中添加1.5%本发明调节海水鱼免疫机能的饲料添加剂后，对大黄鱼、美国红鱼及黑鯢鱼血清中补体C3和C4的影响见表1、2、3。表l、免疫调节剂对对大黄鱼血清中补体C3和C4的影响(mg/L)_^_^_对照组57.05±2.91a19.25±1.31a免疫调节剂系列组_68.09±2.73b_25.64±1.98b表2、免疫调节剂对对美国红鱼血清中补体C3和C4的影响(mg/L)_^_^_对照组65.94±3.06a21.68±1.59a免疫调节剂系列组78.35±4.08b29.64±1.67b表3、<table>tableseeoriginaldocumentpage159</column></row><table>配合饲料中添加1.5%免疫调节剂后，大黄鱼血清中补体C3、C4的水平分别提高20.77%、33.19%(PO.05);美国红鱼血清中补体C3、C4的水平分别提高18.82%、36.72%(P<0.05);大黄鱼血清中补体C3、C4的水平分别提高24.75%、31.89%(P<0.05)。应用实施例2全价配合词料中添加2.5%的免疫调节剂后，对大黄鱼、美国红鱼及黑鯢鱼血清中溶菌酶和IgM水平的影响见表4、5、6。表4、免疫调节剂对大黄鱼血清溶菌酶及IgM水平的影响_对照组免疫调节剂系列组溶菌酶(ug/mL)29.98±2.17a37.68±5.23bIgM(mg/L)365.23±11.71a400.23±8.65b表5、免疫调节剂对美国红鱼血清溶菌酶及IgM水平的影响_对照组免疫调节剂系列组溶菌酶(ug/mL)35.6±2.05a46.18±6.28bIgM(mg/L)383.62±12.52a419.65±9.86b表6、免疫调节剂对黑鯢鱼血清溶菌酶及IgM水平的影响_对照组免疫调节剂系列组溶菌酶(ug/mL)55.69±3.98a62.38±4.62bIgM(mg/L)515.32±15.99a599.86±11.67b日粮中添加本发明的调节海水鱼免疫机能的饲料添加剂后，大黄鱼血清中溶菌酶及IgM的水平分别提高25.68%r<0.O5J和9.58%。<0.05义美国红鱼血清中溶菌酶及IgM的水平分别提高29.72%r<ft05J和9.39%*<0.05A黑鯢鱼血清中溶菌酶及IgM的水平分别提高12.01%(T^ftMJ禾H16.41%^<ft^A这说明免疫调节剂可以显著提高海水鱼的非特异性免疫应答能力。应用实施例3在大黄鱼日粮中添加2%本发明的调节免疫机能的饲料添加剂，经4周饲喂，测定大黄鱼、美国红鱼及黑鯢鱼肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)的活性，结果见表7。表7、免疫调节剂对大黄鱼、美国红鱼及黑鯢鱼肝脏SOD水平的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>SOD是生物体内广泛分布的清除超氧阴离子自由基的酶类，对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用。它是机体抗自由基作用的主要酶，日粮中添加免疫调节剂后，大黄鱼肝脏中的SOD水平提高33.62%6P<ftft5A美国红鱼肝脏中的SOD水平提高16.75%&<0.05义黑鯢鱼肝脏中的SOD水平提高11.87%(<a^5A这说明本发明的免疫调节剂具有抗氧化效果，能够减轻大黄鱼机体氧化压力。权利要求1、一种调节海水鱼免疫机能的肽类饲料添加剂，其特征在于由鳕鱼鱼肉及鱼皮、内脏经过酶水解产生的分子量范围分别为100～500Da、500～1500Da、1500～3000Da、3000～5000Da、5000～8000Da的肽中的三种或三种以上按比例组成。2、根据权利要求1所述的一种调节海水鱼免疫机能的肽类饲料添加剂，其特征在于分子量为15003000Da、5001500Da、100500Da三种肽的重量比例是l:150:1100。3、根据权利要求1所述的一种调节海水鱼免疫机能的肽类饲料添加剂，其特征在于分子量为30005000Da、5001500Da、100500Da三种肽的重量比例是h1100:1250。4、根据权利要求1所述的一种调节海水鱼免疫机能的肽类饲料添加剂，其特征在于50008000Da、5001500Da、100500Da三种肽的重量比例是1:1200:1500。5、根据权利要求1所述的一种调节海水鱼免疫机能的肽类饲料添加剂，其特征在于分子量为30005000Da、15003000Da、5001500Da、100500Da四种肽的重量比例是l:12.5:1跳1~250。6、根据权利要求1所述的一种调节海水鱼免疫机能的肽类饲料添加剂，其特征在于分子量为50008000Da、15003000Da、5001500Da、100500Da四种肽的重量比例是l:15:1纖1500。7、根据权利要求1所述的一种调节海水鱼免疫机能的肽类饲料添加剂，其特征在于分子量为50008000Da、30005000Da、15003000Da、5001500Da、100500Da四种肽的重量比例是1:12:15:1200:1500。全文摘要本发明公开了一种调节海水鱼免疫机能的肽类饲料添加剂。它是由鳕鱼鱼肉及鱼皮、内脏经过酶水解产生的分子量范围分别为100～500Da、500～1500Da、1500～3000Da、3000～5000Da、5000～8000Da的肽中的三种或三种以上按比例组成。在饲料中添加1～5％的本发明的免疫调节剂，可明显提高海水鱼血清中IgM和溶菌酶的水平；本发明的免疫调节剂还可以提高养殖鱼类肝脏SOD水平，从而提高其抗氧化能力。本发明的免疫调节肽类添加剂还可以显著提高鱼类日增重，降低肝体指数。本发明的调节海水鱼免疫机能的肽类饲料添加剂安全、无公害，使用本添加剂养殖的鱼符合绿色食品卫生要求。文档编号A23K1/10GK101326958SQ20081006320公开日2008年12月24日申请日期2008年7月22日优先权日2008年7月22日发明者吴天星,唐宏刚,张邦辉,王进波申请人:浙江大学;宁波天邦股份有限公司;浙江大学宁波理工学院