专利名称：邓恩桉组培快繁的生根方法
技术领域：
本发明涉及一种邓恩桉生根的方法，尤其涉及一种利用组织培养对邓恩桉进行快速 繁殖的生根方法，属于植物组织培养技术领域。
背景技术：
邓恩桉(Eucalyptus dunnii Maiden)为桃金娘科桉树属、双蒴盖亚属(subgenus symphyomyrtus)、蓝桉组(section Maidenaria)多枝桉系(series Viminales)， 原产于澳大禾(J 亚，生长快，树干通直，木质粗细均匀，纹理直，耐干旱，抗病性，耐寒性极强等特性， 可作刨花板材、纸浆材、木片材等多种用途，为推广扩大桉树人工林种植范围的优良种 源。但从目前市场形势看，国内大面积种植邓恩桉还有很多问题尚待解决。由于邓恩桉 在澳大利亚分布有限，产种量少，而国内邓恩桉难于开花结实，不能生产种子，种子价 格非常昂贵，每公斤价格高达3万多元，且还存在货源不稳和质量等问题，远远满足不 了市场的需求。因此进行邓恩桉快速繁殖对开发和利用宝贵的桉树资源具有重要的意 义。
关于邓恩桉的组织培养，自1989年ME.Cortezzi Graca等首先用茎段诱导获得再生植 株以来，国内外在这方面进行了一些研究，ReginaR. Termignoni等(1996)以3日生种 苗为材料诱导了体细胞胚胎的发生，欧阳磊(2003年)、陈研华(2004年)、易敏(2005)、 马英(2006年)、易霭琴 (2007年)、王以红(2005、 2006、 2008年)等主要采用下 胚轴、萌芽条的茎段、半木质化的带芽茎段、种子实生苗的带芽茎段等材料为外植体， 通过不同基本培养基、不同的激素组合、谷氨酸、抗氧化剂以及不同的光源和光照强度 对邓恩桉组培试管苗不定芽的分化和增殖进行了研究，芽的增殖系数较低为3 5。欧阳 磊(2006)和林彦(2007)等研究了生长素(ABT、 IBA、 NAA)、活性炭、大量元素、 微量元素、有机物、蔗糖、温度及光照等对组培苗生根的影响，结果表明不同无性系之 间的生根率差别非常大，大部分株系生根率很低约为20%。 2002年彭信海等发明了关于 "邓恩桉组培育苗方法"的专利(专利号02114142)，试管苗的繁殖系数仅为3，生根 率未见报道。虽然近几年关于邓恩桉已做了不少的研究，但增殖系数较低，远远满足不 了大规模工厂化育苗和市场的大量需求，生根未解决，在生产上根本无法应用。因此， 建立高效稳定的邓恩桉组培快繁体系，尤其是邓恩桉生根极为困难，用常规的组织培养 生根方法和培养基达不到效果，已成为目前国内外组培中的难点。
从上述有关邓恩桉组织培养的研究结果看，国内外尚未见到有关邓恩桉继代增殖培 养中采用不同激素种类的培养基交替使用，通过极低激素浓度或无激素培养基的壮苗培 养后，再以较低pH值及生长素和细胞分裂素的组合诱导生根获得完整植株的研究报道。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种邓恩桉快速繁殖的生根方法，以解决邓恩桉组培苗生根难的问题。本发明所述邓恩桉组培快繁的生根方法，步骤包括(1)无菌苗培育，(2)芽的继 代增殖，(3)试管苗复壮，(4)诱导生根，(5)试管苗移栽；其中步骤(1)所述无菌苗培育的具体方法是挑选饱满无病虫害的种子，消毒后接种到萌发培养基中，进行昼夜光照周期培养，光照强度为38 42pmoL m'、"，光照时间 13 15h'd—1，昼温度25士rC，夜温度18士rC， 5 8d后种子萌发，获得无菌苗；步骤(2)所述芽的继代增殖培养的具体方法是将步骤(1)培育的无菌苗从子叶 基部剪断，带子叶转接于增殖培养基I或II中，以步骤(1)所述条件进行昼夜光照周 期培养，7 10d后诱导形成丛生芽，形成的丛生芽再分割成带2~3个芽的芽丛接种于增 殖培养基I或II中进行继代增殖，继代周期15~20d,在继代增殖培养中所述2种增殖培 养基I或II交替使用；步骤(3)所述试管苗复壮培养的具体方法是将步骤(2)苗高1~2厘米、带1~2 个芽的小苗接种到壮苗培养基中，以步骤(1)所述条件进行昼夜光照周期培养12~15d 后进行诱导生根；步骤(4)所述诱导生根培养的具体方法是待步骤(3)培养复壮的试管苗长到 3~4cm,将其切成单株，接种到第一生根培养基中培养6~9d，再转接到第二生根培养基 中培养8 12d获得生根植株,培养条件为步骤(1)所述昼夜光照周期培养；步骤(5)所述试管苗移栽的具体方法是把生根的瓶苗移到遮光度80%~90%遮荫 网塑料大棚温室条件下适应ld后，逐渐打开瓶苗封口膜降低湿度，2 3d后，用镊子将 苗夹出，用清水洗去基部残留的培养基，移栽到装有混合基质育苗盘中，利用间歇喷雾 装置或人工喷水保持相对湿度在80%以上，经驯化炼苗5 6d后，栽入盆栽基质中继续 培养3~4d后，然后转移到遮光度约50%~60%遮荫网通风棚内培养8~12d定植于大田；其中所述的混合基质育苗盘的成分以体积比计为细沙土育苗基质=4: 1: 1， 混合基质育苗盘上面再放置细沙l~2cm;盆栽基质的成分以体积比计为沙壤土炉灰 育苗基质=5: 1: 1;所述育苗基质购于寿光市恒先育苗基质加工厂。上述方法各步中采用的培养基及其配方是萌发培养基是指MS+0 0.5mg/L 6-BA(6-苄基氨基嘌呤)+25~35g/L蔗糖+4 6g/L琼 脂，pH值5.7 5.9;MS培养基组分为KN03 1900 mg L"， NH4N03 1650 mg L"， MgS04.7 H20 370mg-L", KHzPC^nOmg'L-1, CaCl2.2H20 440 mg I/1 ， MnS04'4H20 22.3 mg . L"， ZnS047H20 8.6 mg L曙1， H3B03 6.2 mg L-1， KI 0.83 mg L1， NaMo04-2H20 0.25 mg L-1, CuS04'5H20 0.025 mg L-1 ， CoCl26H20 0.025 mg L-1, Na2-EDTA 37.3 mg . L-1 ， FeSO4'7H20 27.8 mg L—1，盐酸硫胺素O.lmg L—1，盐酸比哆醇0.5 mg . L—1，烟酸0.5 mg'L"，肌醇lOOmg. 1/1,甘氨酸2.011^'1/1。增殖培养基I是指MS+0.4 0.6mg/L6-BA+0.4 0.6mg/LKT(激动素)+0.2 0.4mg/LIBA (吲哚丁酸)+25~35§^蔗糖+4~68/^琼脂，pH值5.7 5.9;增殖培养基II是指MS+0.4~0.6mg/L ZT (玉米素)+ 0.2-0.4mg/L IAA (吲哚乙酸) +25~358^蔗糖+4~6§/!^琼脂，pH值5.7 5.9;壮苗培养基是指MS+0~0.1 mg/LKT+0~0.05mg/LNAA (萘乙酸)+25~35g/L蔗糖 十4 6g/L琼脂，pH值5.7 5.9;第一生根培养基是指l/2MS+2.0~4.0 mg/L IBA+0.005~0.02 mg/L NAA+0.05~0.2 mg/L KT+15~25g/L庶糖+6~8 g/L琼脂，pH值5.2~5.5;第二生根培养基是指1/2MS+15 25g/L蔗糖+6 8g/L琼脂，pH值5.2 5.5;其中1/2 MS是指培养基的组分中MS大量元素减半及其余为MS全量元素，其具 体组分为KNO3 950mg.L"， NH4N03 825 mg L", MgS04'7 H20 185mg . I/1 ， KH2P04 85 mg L-1 ， CaCl2.2H20 220 mg I/1 ， MnS04-4H20 22.3 mg L-1 ， ZnS04.7H20 8.6 mg I/1 ， H3B036.2 mg L-1, KI 0.83 mg L"， NaMo042H20 0.25 mg . L", CuS045H20 0.025 mg I/1 ， CoCl26H20 0.025 mg U1 ， Na2-EDTA 37.3 mg I/1 ， FeSO4.7H20 27.8 mg L'1 ， 盐酸硫胺素0.1mg-L-'，盐酸比哆醇0.5mg丄—1,烟酸0.5 11^丄-|，肌醇100mg'L",甘 氨酸2.0mg'L-'。上述邓恩桉组培快繁的生根方法中，所述无菌苗培育、芽的继代增殖、试管苗复壮、 诱导生根各阶段昼夜光照周期培养条件优选为光照强度40pmoL m^s"，光照时间 14h'd'1，昼温度25'C，夜温度18'C。上述邓恩桉组培快繁的生根方法中，所述无菌苗的获得、芽的继代增殖、试管苗复 壮各阶段培养基中，琼脂优选5g/L,蔗糖优选30g/L， pH值优选5.8。上述邓恩桉组培快繁的生根方法中，步骤(4)中所述的第一生根培养基组成优选 为1/2MS+3.0 mg/L IBA+0.01 mg/L NAA+0.1 mg/L KT+20g/L蔗糖+7 g/L琼脂，pH值 5.4。上述邓恩桉组培快繁的生根方法中，步骤(4)中所述的单株接种到第一生根培养 基中优选培养7d，再转接到第二生根培养基中培养。本发明的技术方案是在继代增殖培养过程中，采用不同激素种类的培养基交替使 用，大幅度提高了试管苗的增殖系数，通过极低激素浓度或无激素培养基的壮苗培养后， 以较低pH值及生长素和细胞分裂素的组合诱导生根获得完整植株。本发明所提供的邓恩桉组培快繁的生根方法解决了邓恩桉组培苗生根难的问题，经 实验统计生根率可达86%以上，试管苗的增殖系数由原来的3提高到10以上，增殖系 数提高3倍以上，实现了邓恩桉快繁生根的目的。应用本发明方法短时间内能提供大量 的种苗，以代替进口种子，完全能够满足大规模生产的需要。
图1增殖培养 图2壮苗培养 图3生根培养图4移栽炼苗具体实施方式
下面结合实施案例对本发明作进一步说明 实施例1挑选饱满无病虫害的邓恩桉种子，放于1.5ml离心管中，自来水冲洗干净后浸泡 10min，用70%乙醇灭菌30秒，再用0.1%氯化汞灭菌2分钟，然后用无菌水洗涤5次， 在无菌条件下接种到MS+0.5mg/L 6-BA+5g/L琼脂+30 g/L蔗糖萌发培养基中(pH值 5.8),培养条件为昼温度25T:，夜温度18'C，光照强度4(^mol'nT、",光照时间14h-d—1 (培养条件下同)，8d后种子萌发，获得无菌苗。将无菌苗从子叶基部剪断，带子叶转接于MS+0.5mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.25mg/L IBA +5g/L琼脂+30g/L蔗糖(pH值5.8)或MS+0.5 mg/L ZT+0.25 mg/L IAA+5g/L琼脂 +30§^蔗糖(pH值5.8)增殖培养基中，以上述条件进行昼夜光照周期培养，9d后诱 导形成丛生芽，获得的芽丛可不断切割繁殖，继代周期20d，在继代增殖培养中所述2 种增殖培养基I或II交替使用。将苗高l~2cm，带1~2个芽的苗接种到MS+0.1mg/LKT+0.05mg/LNAA+5g/L琼脂 +30§^蔗糖(pH值5.8)壮苗培养基中，以上述条件进行昼夜光照周期培养，培养15d 后剪取高3厘米以上的健壮苗接种到1/2MS+3.0 mg/L IBA+0.01 mg/L NAA+0.1 mg/L KT+7g/L琼脂+20g/L蔗糖(pH值5.4)第一生根培养基中昼夜光照周期培养7d，再转 接到1/2MS+7g/L琼脂+20 g/L蔗糖(pH值5.4)第二生根培养基中昼夜光照周期培养 9d获得生根植株，生根率达92%以上。把生根植株的瓶苗移到遮光度约80%~90%遮荫网塑料大棚温室条件下适应ld后， 逐渐打开瓶苗封口膜降低湿度，2d后用镊子将苗轻轻夹出，用清水洗去基部残留的培养 基，移栽到装有混合基质育苗盘中，利用间歇喷雾装置或人工喷水以保持相对湿度在 80%以上，经驯化炼苗6d后，栽入盆栽基质中继续培养3d，然后转移到遮光度约 50%~60%遮荫网通风棚内培养8d定植于大田，成活率达卯％以上。实施例2挑选饱满无病虫害的邓恩桉种子，放于1.5ml离心管中，自来水冲洗干净后浸泡 10min，用70%乙醇灭菌20秒，再用0.1%氯化汞灭菌3分钟，然后用无菌水洗涤6次， 在无菌条件下接种到MS+0.3mg/L 6-BA+5g/L琼脂+30 g/L蔗糖萌发培养基中(pH值 5.8)，培养条件为昼温度25'C，夜温度18。C，光照强度40^imol'mAs"，光照时间14h-d" (培养条件下同)，6d后种子萌发，获得无菌苗。将无菌苗从子叶基部剪断，带子叶转接于MS+0.45mg/L 6-BA+0.6mg/L KT+0.3mg/L IBA +5g/L琼脂+30g/L蔗糖(pH值5.8)或MS+0.45 mg/L ZT+0.3 mg/L IAA+5g/L琼脂 十30g/L蔗糖(pH值5.8)增殖培养基中，以上述条件进行昼夜光照周期培养，lld后诱 导形成丛生芽，获得的芽丛可不断切割繁殖，继代周期18d，在继代增殖培养中所述2 种增殖培养基I或II交替使用。将苗高2cm，带1~2个芽的苗接种到MS+0.2mg/L KT+0.01mg/L NAA+5g/L琼脂 +3(^化蔗糖(pH值5.8)壮苗培养基中，以上述条件进行昼夜光照周期培养，培养15d 后剪取高3厘米以上的健壮苗接种到1/2MS+2.5 mg/L IBA+0.02mg/L NAA+0.15 mg/L KT+7g/L琼脂+20 g/L蔗糖(pH值5.4)第一生根培养基中昼夜光照周期培养9d,再转 接到1/2MS+6g/L琼脂+20 g/L蔗糖(pH值5.5)第二生根培养基中昼夜光照周期培养 9d获得生根植株，生根率达87%以上。把生根植株的瓶苗移到遮光度约80%~90%遮荫网塑料大棚温室条件下适应ld后， 逐渐打开瓶苗封口膜降低湿度，3d后用镊子将苗轻轻夹出，用清水洗去基部残留的培养 基，移栽到装有混合基质育苗盘中，利用间歇喷雾装置或人工喷水以保持相对湿度在80 %以上，经驯化炼苗5d后，栽入盆栽基质中继续培养2d，然后转移到遮光度约50%~60% 遮荫网通风棚内培养9d定植于大田，成活率达87%以上。实施例3挑选饱满无病虫害的邓恩桉种子，放于1.5ml离心管中，自来水冲洗干净后浸泡 10min,用70%乙醇灭菌40秒，再用0.1%氯化汞灭菌1分钟，然后用无菌水洗涤6次， 在无菌条件下接种到MS +5g/L琼脂+30 g/L蔗糖萌发培养基中(pH值5.8)，培养条件 为昼温度25°C ，夜温度18°C ，光照强度40nmol' m《s人光照时间14bd'k培养条件下同)， 7d后种子萌发，获得无菌苗。将无菌苗从子叶基部剪断，带子叶转接于MS+0.4mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.6mg/L IBA +6g/L琼脂+35g/L蔗糖(pH值5.8)或MS+0.4mg/L ZT+0.2 mg/L IAA+6g/L琼月旨 +35§^蔗糖(pH值5.8)增殖培养基中，以上述条件进行昼夜光照周期培养，lld后诱 导形成丛生芽，获得的芽丛可不断切割繁殖，继代周期15d，在继代增殖培养中所述2 种增殖培养基I或II交替使用。将苗高2cm，带1~2个芽的苗接种到MS +5g/L琼脂+30g/L蔗糖(pH值5.8)壮苗 培养基中，以上述条件进行昼夜光照周期培养，培养15d后剪取高2厘米以上的健壮苗 接种到1/2MS (MS大量元素减半，其余为MS全量元素)+3.5mg/L IBA+0.025mg/L NAA+0.1 mg/LKT+7g/L琼脂+20 g/L蔗糖(pH值5.4)第一生根培养基中昼夜光照周期 培养8d，再转接到1/2MS (MS大量元素减半，其余为MS全量元素)+7g/L琼脂+20 g/L 蔗糖(pH值5.5)第二生根培养基中昼夜光照周期培养lld获得生根植株，生根率达89% 以上。把生根植株的瓶苗移到遮光度约80%~90%遮荫网塑料大棚温室条件下适应2d后， 逐渐打开瓶苗封口膜降低湿度，2d后用镊子将苗轻轻夹出，用清水洗去基部残留的培养 基，移栽到装有混合基质育苗盘中，利用间歇喷雾装置或人工喷水以保持相对湿度在80 %以上，经驯化炼苗4d后，栽入盆栽基质中继续培养3d，然后转移到遮光度约50°/。~60% 遮荫网通风棚内培养lld定植于大田，成活率达95%以上。本发明方法实施中采用的培养基及其配方是MS培养基组分为KN03 1900 mg ■ L"， NH4N03 1650 mg L"， MgS04'7 H20 370mg.L—1， KH2PO4170mg-L-1， CaCl2'2H20 440 mg L.1, MnS044H20 22.3 mg ' L', ZnS047H20 8.6 mg L"， H3B03 6.2 mg L"， KI 0.83 mg L-1， NaMo04'2H20 0.25 mg ， CuS04'5H20 0.025 mg l/1 ， CoCl2'6H20 0.025 mg L-1 ， Na2-EDTA 37.3 mg L.1 ， FeSO(7H20 27.8 mg L"，盐酸硫胺素O.lmg L"，盐酸比哆醇0.5 mg L"，烟酸0.5 mg L"，肌醇lOOmg. L",甘氨酸2.0 mg L"。1/2 MS培养基的基本组分包括MS大量元素减半及其余为MS全量元素，其组分为 KN03 950 mg I/1 ， NH4N03 825 mg I/1, MgS04-7 H20 185mg L-1 ， KH2P04 85 mg I/1 ， CaCl2'2H20 220 mg L" ， MnS04.4H20 22.3 mg L-1 ， ZnS047H20 8.6 mg L", H3B036.2 mg L"， KI 0.83 mg . !/'， NaMo04-2H20 0.25 mg L"， CuS04-5H20 0.025 mg ■ L"， CoCl2-6H20 0.025 mg-L"， Na2-EDTA 37.3mg.L-1， FeSO4-7H20 27.8 mg L",盐酸硫 胺素O.lmg'L—1，盐酸比哆醇0.5mg'L—1，烟酸0.5mg'L—1，肌醇100mg'L",甘氨酸2.0 mg . I/1 。萌发培养基是指MS+0~0.5mg/L 6-BA+25~35g/L蔗糖+4 6g/L琼脂，pH值5.7~5.9;增殖培养基I是指MS+0.4~0.6mg/L 6-BA+0.4~0.6mg/L KT+0.2~0.4mg/L IBA+25~35g/L蔗糖+4~6 g/L琼脂，pH值5.7~5.9;增殖培养基II是指MS+0.4~0.6mg/L ZT + 0.2~0.4mg/L IAA+25~35g/L庶糖+4 6g/L 琼脂，pH值5.7 5.9;壮苗培养基是指MS+0~0.1 mg/LKT+0~0.05 mg/LNAA+25~35g/L蔗糖+4~6 g/L琼 脂，pH值5.7 5.9;第一生根培养基是指l/2MS+2.0~4.0 mg/L IBA+0.005~0.02 mg/L NAA+0.05~0.2 mg/LKT+15~25g/L蔗糖+6~8 g/L琼脂，pH值5.2~5.5;第二生根培养基是指1/2MS+15 25g/L蔗糖+6 8g/L琼脂，pH值5.2 5.5。上述的混合基质育苗盘的成分以体积比计为细沙土育苗专用基质=4: 1: 1， 混合基质育苗盘上面再放置细沙l~2cm;盆栽基质的成分以体积比计为沙壤土炉灰: 育苗专用基质=5: 1: 1。
权利要求
1、一种邓恩桉组培快繁的生根方法，步骤包括(1)无菌苗培育，(2)芽的继代增殖，(3)试管苗复壮，(4)诱导生根，(5)试管苗移栽；其特征在于步骤(1)所述无菌苗培育的方法是挑选饱满无病虫害的种子，消毒后接种到萌发培养基中，进行昼夜光照周期培养，光照强度为38～42μmol·m-2·s-1，光照时间13～15h·d-1，昼温度25±1℃，夜温度18±1℃，5～8d后种子萌发，获得无菌苗；步骤(2)所述芽的继代增殖培养的方法是将步骤(1)培育的无菌苗从子叶基部剪断，带子叶转接于增殖培养基I或II中，以步骤(1)所述条件进行昼夜光照周期培养，7～10d后诱导形成丛生芽，形成的丛生芽再分割成带2～3个芽的芽丛接种于增殖培养基I或II中进行继代增殖，继代周期15～20d，在继代增殖培养中所述2种增殖培养基I或II交替使用；步骤(3)所述试管苗复壮培养的方法是将步骤(2)苗高1～2厘米、带1～2个芽的小苗接种到壮苗培养基中，以步骤(1)所述条件进行昼夜光照周期培养12～15d后进行诱导生根；步骤(4)所述诱导生根培养的方法是待步骤(3)培养复壮的试管苗长到3～4cm，将其切成单株，接种到第一生根培养基中培养6～9d，再转接到第二生根培养基中培养8～12d获得生根植株，培养条件为步骤(1)所述昼夜光照周期培养；步骤(5)所述试管苗移栽的方法是把生根的瓶苗移到遮光度80％～90％遮荫网塑料大棚温室条件下适应1d后，逐渐打开瓶苗封口膜降低湿度，2～3d后，用镊子将苗夹出，用清水洗去基部残留的培养基，移栽到装有混合基质育苗盘中，利用间歇喷雾装置或人工喷水保持相对湿度在80％以上，经驯化炼苗5～6d后，栽入盆栽基质中继续培养3～4d后，然后转移到遮光度约50％～60％遮荫网通风棚内培养8～12d定植于大田；其中所述的混合基质育苗盘的成分以体积比计为细沙∶土∶育苗基质＝4∶1∶1，混合基质育苗盘上面再放置细沙1～2cm；盆栽基质的成分以体积比计为沙壤土∶炉灰∶育苗基质＝5∶1∶1；上述方法各步中采用的培养基及其配方是萌发培养基是指MS+0～0.5mg/L 6-BA+25～35g/L蔗糖+4～6g/L琼脂，pH值5.7～5.9；增殖培养基I是指MS+0.4～0.6mg/L 6-BA+0.4～0.6mg/L KT+0.2～0.4mg/LIBA+25～35g/L蔗糖+4～6g/L琼脂，pH值5.7～5.9；增殖培养基II是指MS+0.4～0.6mg/L ZT+0.2～0.4mg/L IAA+25～35g/L蔗糖+4～6g/L琼脂，pH值5.7～5.9；壮苗培养基是指MS+0～0.1mg/L KT+0～0.05mg/LNAA+25～35g/L蔗糖+4～6g/L琼脂，pH值5.7～5.9；第一生根培养基是指1/2MS+2.0～4.0mg/L IBA+0.005～0.02mg/L NAA+0.05～0.2mg/L KT+15～25g/L蔗糖+6～8g/L琼脂，pH值5.2～5.5；第二生根培养基是指1/2MS+15～25g/L蔗糖+6～8g/L琼脂，pH值5.2～5.5；其中1/2MS是指培养基的组分中MS大量元素减半及其余为MS全量元素，其具体组分为KNO3950mg·L-1，NH4NO3825mg·L-1，MgSO4·7H2O 185mg·L-1，KH2PO485mg·L-1，CaCl2·2H2O 220mg·L-1，MnSO4·4H2O 22.3mg·L-1，ZnSO4·7H2O 8.6mg·L-1，H3BO36.2mg·L-1，KI 0.83mg·L-1，NaMoO4·2H2O 0.25mg·L-1，CuSO4·5H2O 0.025mg·L-1，CoCl2·6H2O 0.025mg·L-1，Na2-EDTA 37.3mg·L-1，FeSO4·7H2O 27.8mg·L-1，盐酸硫胺素0.1mg·L-1，盐酸比哆醇0.5mg·L-1，烟酸0.5mg·L-1，肌醇100mg·L-1，甘氨酸2.0mg·L-1。
2、 如权利要求1所述邓恩桉组培快繁的生根方法，其特征在于，所述无菌苗培育、 芽的继代增殖、试管苗复壮、诱导生根各阶段昼夜光照周期培养条件为光照强度 40,1'm—V1,光照时间14h'd"，昼温度25。C，夜温度18°C。
3、 如权利要求1所述邓恩桉组培快繁的生根方法，其特征在于，所述无菌苗的获得、 芽的继代增殖、试管苗复壮各阶段培养基中，琼脂5g/L，蔗糖30g/L, pH值5.8。
4、 如权利要求1所述邓恩桉组培快繁的生根方法，其特征在于，步骤(4)中所述的 第一生根培养基组成为1/2MS+3.0 mg/L IBA+0.01 mg/L NAA+0.1 mg/L KT+20g/L蔗糖 十7g/L琼脂，pH值5.4。
5、 如权利要求1所述邓恩桉组培快繁的生根方法，其特征在于，步骤(4)中所述的 单株接种到第一生根培养基中培养7d，再转接到第二生根培养基中培养。
全文摘要
本发明公开了一种邓恩桉组培快繁的生根方法，包括(1)无菌苗培育，(2)芽的继代增殖，(3)试管苗复壮，(4)诱导生根，(5)试管苗移栽等步骤；本发明通过无菌苗的增殖培养和壮苗培养后接种于第一生根培养基和第二生根培养基诱导出完整的植株，解决了邓恩桉组培苗繁殖系数低尤其是难于生根的问题；利用本发明的技术方法可在短时间内提供大量种苗，以代替昂贵的进口种子，满足大规模工厂化育苗和市场的大量需求。
文档编号A01H4/00GK101331853SQ20081013877
公开日2008年12月31日 申请日期2008年8月5日 优先权日2008年8月5日
发明者刘翠兰, 阳 夏, 李双云, 燕丽萍, 王太明 申请人:山东省林业科学研究院