专利名称：一种绿僵菌复配杀虫组合物及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种农药组合物及其应用，尤其是一种含有绿僵菌的复配杀虫组合物及其防治作物害虫的应用。
背景技术：
蛴螬是金龟甲幼虫的总称，属鞘翅目，金龟子总科，为害大豆、花生、甘蔗、玉米以及一些中药材、牧草、花卉、树苗、人工草坪等，其中以为害花生最为严重。近几年来，随着种植结构的调整、作物布局的改变以及气候的变化，蛴螬在我国大范围内连年发生，为害猖獗。蛴螬的生活史较长，完成一个世代所需时间1-6年不等，在生活史中，幼虫期历时最长，且由于其在地下为害，所以防治起来相当困难。对于蛴螬的防治主要还是以化学农药为主，常常大量使用化学农药，有的甚至使用高毒高残留的剧毒农药，容易污染环境、杀伤天敌及其它有益生物及造成害虫再猖獗和抗药性。
绿僵菌属半知菌类、丛梗菌目、丛梗霉科、绿僵菌属，是一种广谱的昆虫病原菌，具有一定的专一性，对人畜无害，同时还具有不污染环境、无残留、害虫不会产生抗药性等优点，在国外应用其防治害虫的面积超过了白僵菌，防治效果可与白僵菌媲美。目前，有的绿僵菌菌株已经开发为真菌杀虫剂，并已经登记注册，如100亿孢子/毫升金龟子绿僵菌油悬浮剂用于滩涂防治飞蝗。
单独使用绿僵菌效果慢且防效不稳定，绿僵菌与敌杀死(溴氰菊酯)、辛硫磷、灭幼脲III等混用可以提高杀虫速度[见福建林学院学报2001，21(4)308～311]，也已有将绿僵菌与菊酯类农药制成组合物的报道，但一般化学药剂对孢子存活和萌发有影响，很难制成稳定的混合制剂。
发明内容
本发明的目的是提供一种绿僵菌与化学农药的复配组合物，组合物不但能提高杀虫速度和效果，而且稳定性有显著提高、使用更方便、成本更低；本发明另一目的是提供一种用绿僵菌与新烟碱类杀虫剂的组合物防治地下害虫蛴螬的方法。
为解决上述技术问题，发明人通过大量的生物测定筛选，发现绿僵菌与新烟碱类杀虫剂以一定比例复配，对蛴螬有明显的增效作用。在上述发现的基础上，经过大量配方筛选试验，形成了本发明的技术方案，即 一种绿僵菌复配杀虫组合物，其特征在于，其有效成分为金龟子绿僵菌和一种新烟碱类杀虫剂。
组合物中绿僵菌的含量为1～100亿孢子/克，新烟碱类杀虫剂的含量为10～200克/千克，其余为农药辅助成分。所述绿僵菌为金龟子绿僵菌(Metarhiziumanisopliae)的自然分离菌株及其经人工培育的变种，可用其液体发酵产生的营养菌丝体，也可用固体发酵产生的分生孢子，本发明组合物优选采用固体发酵产生的分生孢子粉制备。作为对本发明绿僵菌杀虫组合物的一种改进，组合物中绿僵菌的含量优选为5～50亿孢子/克。
所述新烟碱类杀虫剂为吡虫啉、噻虫嗪、噻虫胺、啶虫脒中的任意一种。作为对本发明绿僵菌杀虫组合物的一种改进，组合物中新烟碱类杀虫剂的含量优选为20～100克/千克。
本发明的组合物除有效成分绿僵菌与新烟碱类杀虫剂之外，还包括有益于有效成分在制剂中稳定和药效发挥的辅助成分，以便制成适合使用的剂型，比如，可以用已知的方法制备成可湿性粉剂、颗粒剂、水分散粒剂或油悬浮剂等。
所述辅助成分包括分散剂、湿润剂、乳化剂、稳定剂、防冻剂、溶剂、填料等及其它有益于有效成分在制剂中稳定和药效发挥的已知物质，都是农药制剂中常用或允许使用的各种成分，并无特别限定，具体成分和用量根据配方要求通过简单试验确定。
适用于制备本发明组合物可湿性粉剂和水分散粒剂的分散剂包括木质素磺酸盐(如木质素磺酸钠)、改性木质素磺酸盐、萘磺酸甲醛缩合物、烷基萘甲醛缩合物磺酸盐、脂肪醇聚氧乙烯醚、二丁基萘磺酸钠、十二烷基聚氧乙烯醚磷酸酯、苄基酚聚氧乙烯醚、烷基酚聚氧乙烯醚、拉开粉中的一种或一种以上。
适用于制备本发明组合物可湿性粉剂和水分散粒剂的润湿剂包括特种聚醚改性聚有机硅氧烷、十二烷基硫酸钠、脂肪酸硫酸盐、脂肪醇聚氧乙烯醚、烷基酚基聚氧乙烯基醚中的一种或几种。
适用于制备本发明组合物水分散粒剂的崩解剂包括膨润土、硫酸铵、尿素、硫酸镁、蔗糖中的一种或一种以上。
适用于制备本发明组合物颗粒剂和水分散粒剂的粘合剂包括石蜡油、聚乙二醇、聚乙烯醇、环糊精、淀粉、硅酸钠中的一种或一种以上。
适用于制备本发明组合物油悬浮剂的油包括菜籽油、芝麻油、花生油等植物油及石蜡油；乳化剂可以选用山梨醇酐单油酸脂、失水山梨醇脂肪酸酯聚氧乙烯醚、脂肪醇与环氧乙烷缩合物、聚氧乙烯脂肪酸酯、三乙醇胺单油酸脂、蓖麻油与环氧乙烷缩合物中的一种或几种。
本发明组合物制剂中可以加入抗氧化剂或抗紫外剂作为稳定剂，可用的成分包括叔丁基对羟基茴香醚(BHA)、2，6-二叔丁基对甲酚(BHT)、没食子酸丙酯、特丁基对苯二酚等中的一种或一种以上，使用量为制剂总重量的0％-5％，优选为1％-3％。
本发明所述的绿僵菌复配杀虫组合物可用于防治危害植物的地上或地下害虫，如蚜虫、蓟马、蛴螬、金针虫等。本发明组合物特别适合用于防治危害植物地下部分的各种蛴螬，适用的场所或植物包括草坪、花生、甘薯、蔬菜等。
施药方法可以采取喷雾、淋灌、撒施等，以上施药方法均可与进一步的混土相结合。在蛴螬1-2龄盛期施用本发明组合物效果较好，施药量根据虫种、虫口密度、虫龄和土壤、作物等条件不同经简单试验确定。
本发明组合物具有以下优点两种有效成分组合后对蛴螬有增效作用；与单用绿僵菌比较施用方便，药效稳定，速效性好；与单用化学农药相比，持效期长，减少化学农药的使用量，减少环境污染；组合物有效组分的作用机理不同，害虫不容易产生抗药性。
具体实施例方式 本发明的组合物可以用已知的方法制备成适合农业使用的剂型，比较好的剂型为可湿性粉剂、颗粒剂、水分散粒剂或油悬浮剂。
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，本发明进一步用以下具体实施例和试验数据进行说明，但本发明绝非限于这些例子。以下所述绿僵菌孢子均指金龟子绿僵菌分生孢子，所述新烟碱类杀虫剂的量均为有效量，实际配制时根据所用原药含量进行折算，偏差的量通过填料加入量进行调节。
实施例1绿僵菌。啶虫脒颗粒剂(绿僵菌1亿孢子/g+啶虫脒5g/kg) 称取金龟子绿僵菌(R8-4菌株，中国农科院植物保护研究所研制)50亿孢子/g高孢粉20g、啶虫脒5g、石蜡油10g、玉米芯颗粒965g，将啶虫脒用少量丙酮溶解后与玉米芯颗粒混合均匀，再在混合器中将绿僵菌孢子粉与玉米芯颗粒混合，使孢子粉均匀吸附在玉米芯颗粒上，最后在搅拌下喷入石蜡油封闭以减少孢子粉脱落和减少吸水。
实施例2绿僵菌。吡虫啉可湿性粉剂(绿僵菌100亿孢子/g+吡虫啉100g/kg) 称取金龟子绿僵菌(重庆重大生物技术发展有限公司)200亿孢子/g高孢粉500g、吡虫啉100g、木质素磺酸钙30g、十二烷基硫酸钠10g、2，6-二叔丁基对甲酚20g、高岭土340g，将吡虫啉、木质素磺酸钙、十二烷基硫酸钠、2，6-二叔丁基对甲酚和高岭土混合后用气流粉碎机粉碎制得超细粉，再与绿僵菌孢子粉混合均匀即得产品。
实施例3绿僵菌。吡虫啉可湿性粉剂(绿僵菌40亿孢子/g+吡虫啉80g/kg) 称取金龟子绿僵菌(R8-4菌株，中国农科院植物保护研究所研制)100亿孢子/g高孢粉400g、吡虫啉80g、烷基萘甲醛缩合物磺酸盐30g、脂肪醇聚氧乙烯醚10g、叔丁基对羟基茴香醚20g、硅藻土460g，将吡虫啉、烷基萘甲醛缩合物磺酸盐、脂肪醇聚氧乙烯醚、叔丁基对羟基茴香醚和硅藻土混合后用气流粉碎机粉碎制得超细粉，再与绿僵菌孢子粉混合均匀即得产品。
实施例4绿僵菌。噻虫嗪水分散粒剂(绿僵菌50亿孢子/g+噻虫嗪200g/kg) 称取金龟子绿僵菌(R8-4菌株，中国农科院植物保护研究所研制)100亿孢子/g高孢粉500g、噻虫嗪80g、烷基萘甲醛缩合物磺酸盐50g、脂肪醇聚氧乙烯醚20g、叔丁基对羟基茴香醚50g、硫酸铵20g、淀粉10、硅藻土270g，将噻虫嗪、烷基萘甲醛缩合物磺酸盐、脂肪醇聚氧乙烯醚、叔丁基对羟基茴香醚、硫酸铵和硅藻土混合粗粉碎后，用气流粉碎机粉碎制得超细粉，将所得超细粉在流化床造粒机中以淀粉溶液为粘结剂进行造粒，干燥后经振动筛进行筛分得产品。
实施例5绿僵菌。吡虫啉油悬浮剂(绿僵菌30亿孢子/g+吡虫啉20g/kg) 称取金龟子绿僵菌(重庆重大生物技术发展有限公司)200亿孢子/g高孢粉150g、吡虫啉20g、失水山梨醇脂肪酸酯聚氧乙烯醚100g、十二烷基苯磺酸钙20g、叔丁基对羟基茴香醚30g、花生油380g、芝麻油300g，将吡虫啉、失水山梨醇脂肪酸酯聚氧乙烯醚、十二烷基苯磺酸钙、叔丁基对羟基茴香醚和植物油按配方的比例依次加入混合釜中，搅拌均匀，再进入砂磨机进行砂磨，砂磨至90％粒径小于5微米后与绿僵菌孢子粉混合均匀即得油悬浮剂产品。
实施例6绿僵菌。噻虫胺油悬浮剂(绿僵菌10亿孢子/g+噻虫胺50g/kg) 称取金龟子绿僵菌(R8-4菌株，中国农科院植物保护研究所研制)100亿孢子/g高孢粉100g、噻虫胺50g、山梨醇酐单油酸脂120g、亚甲基奈磺酸钠20g、没食子酸丙酯50g、菜籽油660g，将噻虫胺、山梨醇酐单油酸脂、亚甲基奈磺酸钠、没食子酸丙酯和菜籽油按配方的比例依次加入混合釜中，搅拌均匀，再进入砂磨机进行砂磨，砂磨至90％粒径小于5微米后与绿僵菌孢子粉混合均匀即得油悬浮剂产品。
生物测定试验例 不同品种的农药混合后，通常表现出三种作用类型，即相加作用、增效作用和拮抗作用，但具体为何种作用，只有通过大量试验才能知道。复配增效的配方，能明显提高实际防治效果，降低农药的使用量，有助于延缓害虫抗药性的产生速度。
本发明申请人通过大量的筛选试验，意外发现绿僵菌与新烟碱类杀虫剂以一定比例复配，对蛴螬有明显的增效作用，而不仅仅是两种药剂的简单相加，这从以下生物测定实例可以清楚看出。
试验药剂金龟子绿僵菌(R8-4菌株，中国农科院植物保护研究所研制)100亿孢子/g高孢粉；95％吡虫啉原药(江苏常隆化工有限公司)；95.8％噻虫嗪原药(瑞士先正达公司)。
试验对象铜绿丽金龟子(Anomala corpulenta Motschulsky)2龄幼虫 生物测定方法采用浸渍法。用加0.05％吐温-80的无菌水配制稀释绿僵菌孢子悬浮液，新烟碱类杀虫剂先用丙酮加10％曲拉通X-100配成母液，然后用0.05％吐温-80的无菌水稀释至需要的浓度，组合物采用稀释液混合配制；将幼虫在药液中浸渍30s，在无菌滤纸上吸去多余药液后放入盛有30g灭菌土的培养皿中，添加胡萝卜片每皿5头饲养。各浓度设4次重复，每重复供试虫数均为10头，设0.05％吐温-80为对照。每日检查、记录死亡虫数。
结果计算与评价方法 活性成分混合物的预期效力(即理论防治效果，％)使用Colby公式确定并与观察到的效力比较 Colby公式E＝X+Y-X*Y/100 E当组合物中活性成分A使用浓度为a，活性成分B使用浓度为b时的组合物预期效力， X活性成分A使用剂量为a时的效力， Y活性成分B使用剂量为b时的效力。
当观察到的防治效果超过预期防效时说明有增效作用。
绿僵菌与吡虫啉组合对蛴螬的增效作用测定见表1。
表1绿僵菌与吡虫啉组合对蛴螬的增效效果
测定结果(表1)表明绿僵菌1×105～1×107孢子/ml与吡虫啉10～200mg/L复配组合使用8个配比(M1～M8)对蛴螬的实际观察效力均大于按Colby公式计算的理论效力，说明均表现有增效作用。
绿僵菌与噻虫嗪组合对蛴螬的增效作用测定见表1。
表2绿僵菌与噻虫嗪组合对蛴螬的增效效果
测定结果(表2)表明绿僵菌1×105～1×107孢子/ml与噻虫嗪10～180mg/L复配组合使用8个配比(M1～M8)对蛴螬的实际观察效力均大于按Colby公式计算的理论效力，说明均有增效作用。
贮存孢子活性检测 将蛋白胨马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PPDA)直接涂抹于载玻片上，再取少许含绿僵菌分生孢子粉的本发明组合物用含0.1％甘油的无菌水稀释至1×107个/mL，滴加20μL孢子悬浮液后均匀涂抹，28℃保湿36h。每种处理统计300个左右的孢子，普通显微镜400倍下观察并记录孢子萌发情况，计算孢子萌发率。
表3本发明组合物中绿僵菌孢子的贮存稳定性 田间应用试验 1、防治草坪蛴螬 按表4中的各药剂的使用剂量，用球场砂(20g/m2)与药剂拌匀后撒施(实施例1的颗粒剂直接撒施)，以化学制剂毒死蜱(40％乳油)0.25mL/m2和清水为对照，施药后浇水一次。
施药前1d和施药后7d、15d、30d、60d，分别按五点取样，每点收集25×25cm2样方地表15cm内的所有蛴螬，记录活虫数，计算出虫口减退率和校正防效，用DPS软件对数据进行处理。
表4本发明组合物防治草坪蛴螬的田间试验结果
由上表结果可见，本发明实施例1～6组合物药后7～60d对草坪蛴螬的防治效果均在84％以上，已完全满足草坪害虫控制要求，而对照药剂40％毒死蜱乳油30天后的防效就在50％以下，效果较差且残效期短，绿僵菌单用的处理药后7天的防效也在50％左右，虽然残效期较长但速效性差，不能迅速控制危害。
40％毒死蜱乳油用量折合每公顷有效成分为2000g，而本发明实施例中化学组分新烟碱类杀虫剂折合每公顷有效成分为300～1000g，仅为毒死蜱的50％以下，这样大大减少了化学农药的使用量，有利于环境保护和生态安全。
2、防治花生蛴螬 试验地区发生的金龟子的优势种大黑鳃金龟(占55-60％)，其次为暗黑鳃金龟和铜绿丽金龟。
试验方法采用随机排列法在田间设定小区，每个小区33m2，采用清水对照，每个处理3次重复。于整地施肥后播种前将药剂按照试验设定的用量拌细土(30kg/亩)沟施于播种沟(或穴)附近，深度10-15cm，施后覆土。
花生出苗时、花生成熟中期和收获时共调查三次，每个小区随机取5点，每点10穴，第一次调查花生出苗状况及苗情，第二次调查残虫数，第三次调查每穴活虫、总荚数和被害荚数，计算被害果率、防治效果。
表5本发明组合物防治花生蛴螬的田间试验结果 表5结果表明，本发明实施例组合物对花生蛴螬的防效明显好于有机磷农药40％毒死蜱乳油，也显著优于吡虫啉或绿僵菌单剂的防效，说明本发明组合物具有增效作用、对花生蛴螬的控制效果好。
权利要求
1.一种绿僵菌复配杀虫组合物，其特征在于，其有效成分为金龟子绿僵菌和一种新烟碱类杀虫剂。
2.根据权利要求1，其特征在于，组合物中绿僵菌的含量为1～100亿孢子/克，新烟碱类杀虫剂的含量为10～200克/千克，其余为农药辅助成分。
3.根据权利要求1或2，其特征在于，所述新烟碱类杀虫剂为吡虫啉、噻虫嗪、噻虫胺、啶虫脒中的任意一种。
4.根据权利要求2，其特征在于，组合物中绿僵菌的含量为5～50亿孢子/克。
5.根据权利要求2，其特征在于，组合物中新烟碱类杀虫剂的含量为20～100克/千克。
6.根据权利要求3，其特征在于，组合物的剂型为可湿性粉剂、颗粒剂、水分散粒剂、微胶囊或油悬浮剂。
7.权利要求1所述的绿僵菌复配杀虫组合物用于防治危害植物的害虫。
8.根据权利要求7，其特征在于，组合物用于防治蛴螬。
全文摘要
本发明涉及一种绿僵菌复配杀虫组合物，其特征是有效成分为金龟子绿僵菌和一种新烟碱类杀虫剂，组合物中绿僵菌的含量为1～100亿孢子/克，新烟碱类杀虫剂的含量为10～200克/千克，其余为农药辅助成分。本发明组合物对蛴螬有明显增效作用，适用于防治危害植物的害虫，尤其是蛴螬，可用于草坪、花生、甘薯、蔬菜等多种作物或场所，具有药效稳定、速效性好、持效期长和安全环保等优点。
文档编号A01P7/04GK101755847SQ200910225149
公开日2010年6月30日 申请日期2009年11月25日 优先权日2009年11月25日
发明者曹明章, 朱卫锋, 徐齐云, 孙华英, 文伯健, 孔建 申请人:深圳诺普信农化股份有限公司