专利名称：一种香菇提取物及其应用的制作方法
技术领域：
本发明属于有机农业的植物源母药领域，具体是一种农用香菇多糖母药及其制备 方法。
背景技术：
由于高毒高残留化学农药的使用，使水源、土地、牲畜等的污染日益严重，已经严 重威胁人类的生存环境。当前保护环境和食品安全已越来越引起人们的关注。运用现代生 物、化工技术寻找新的高效低残留的有效活性物质，取代高毒高残留化合物是人类社会发 展的必然趋势。植物病毒病种类繁多，危害严重，对粮食生产、园艺作物、经济作物造成的经济损 失约数百亿元。目前我国防治病毒病多采用化学方法，国内缺少防治此类病害效果显著的 产品，亟待研究开发一种新型的更为有效的产品。香菇多糖是从食用菌香菇中分离的一种多糖。经过对其进行全组分分析，香菇多 糖的主要组成成分主要为菌类多糖，其单体是由7个葡萄糖组成。香菇多糖是一种能够增 强机体抑制各种细菌、病毒和寄生物的能力的物质。香菇多糖目前主要应用于医药领域，其用于医药方面具有抗血脂、抗肿瘤、调节免 疫、抗血小板凝结、抗病毒等功效，并且在临床中有很好的效果。20世纪末，香菇多糖开始应用于农业方面，其对于病毒有着很好的抑制和杀灭作 用，能增强植物的抗病能力，同时达到增产、提高植物品质的功效。香菇多糖一方面能降低病毒对植物所带来的危害，另一方面又能提高植物的抗病 能力，因此具有较为广泛的适用性。可用于防治水稻、番茄、辣椒、黄瓜、烟草、马铃薯、花卉 等多种作物的病毒病。目前已有的提取香菇多糖的相关文献、专利和报道中，有关于使用菇根提取制备 香菇多糖的方法。该方法所提取的香菇多糖是固体粉末，用于医药及食品方面。另外，还有 专利是使用香菇菌糠及柄蒂提取物制备生物农药及其工艺，该专利是使用香菇菌糠及其柄 蒂进行酶解、灭活及浓缩制成复合制剂，该专利主要阐述的是制备生物农药的工艺。在专 利号为2009101192575.8中所述的一中制备香菇多糖母药的制备工艺采用的主要原料是 香菇棒，通过对香菇棒进行粉碎、浸泡、酶解、灭活、醇析、过滤、稀释制备而成的香菇多糖母 液。而采用香菇子实体及其柄蒂使用超声波提取设备进行提取，并可将其作为肥料使用，此 类发明国内还未见有相关的专利。
发明内容
本发明的目的提供一种在有机农业生产中杀菌效果好，低毒、低残留并能作为肥 料使用的香菇提取物。本发明提供一种香菇提取物，其以香菇为原料，在提取过程中包含超声提取的步
马聚o
所述超声提取的时间为20 40分钟。优选地，超声提取所用的提取器为连续逆流提取设备。其中，在超声提取之前，对香菇原料进行粉碎和浸泡，在超声提取之后进行醇析。所述粉碎为将香菇粉碎至粒度在60 120目之间。粉碎后，用5 20倍体积的热水浸泡1 5小时，优选4小时；浸泡温度保持在 60 70°C。醇析所用的醇为体积百分比为60 80%的乙醇，用量为超声提取液2-4倍体积。醇析时间为3 6小时，醇析温度控制在0°C 5°C，醇析后的析出液进行减压浓缩。具体而言，本发明的香菇提取物，通过下述步骤制备得到1)对香菇原料粉碎粉碎至粒度在60 120目之间，然后用5 20倍体积的热水 浸泡1 5小时，优选4小时；浸泡温度保持在60 100°C ；2)对步骤1得到的浸泡液进行超声提取，时间为20 40分钟；3)加入体积百分比为60 80%的乙醇进行醇析，用量为超声提取液2-4倍体积， 醇析时间为3 6小时，醇析温度控制在0°C 5°C，醇析后的析出液进行减压浓缩。本发明进一步提供上述的香菇提取物在制备用于防治植物病毒病的农药中的应 用。本发明的香菇提取物，称为香菇多糖母药，其主要活性成分为香菇多糖，含量可达 90%，基本在10%以上。本发明的香菇提取物及其制备方法有如下有益效果(1)本发明使用香菇子实体及其柄蒂为香菇多糖母液的主要原料，所采用的原料 天然环保，很适宜用其加工成单一或复配制剂以及肥料，适用于有机农业生产过程中的病 害防治；(2)本发明采用香菇作为农用香菇多糖母药的原料，成本低，制备工艺简便，产品 质量好，香菇多糖母药有效成分含量高，含量可达1 % 90 %，而传统工艺则很难达到1 % 以上；(3)本发明采用的农用香菇多糖母药在制备过程中，注重对原材料浸泡温度的控 制，并且采用连续逆流超声提取设备提取制备农用香菇多糖母药；超声波提取技术是一种 新型的提取技术，应用于植物药材成分的提取，可大大降低提取时间，提高提取速度，减少 溶剂的使用，传统静态提取需要几小时至十几小时，超声波提取法最多只需几十分钟；另外 在制备过程中延长了醇析时间，极大地提高了香菇多糖母药的有效成分的含量，节约成本， 提高了生产效率。综上所述，本发明摒弃了传统提取香菇多糖的酶解方法，采用超声提取，其工艺流 程简单，工序少，提取时间短，节约资源，生产成本较低，所制备出的香菇多糖母药含量高。 并且本工艺采用的原料天然环保，无毒、无残留，所制备出的农用香菇多糖母药对人畜无 害，是一种环境友好型的产品。另外，通过该工艺制备的农用香菇多糖母药通过鉴别试验， 同时含有香菇多糖和氨基酸两种有效成分。因此，该母药不仅具有抗病毒作用还有增加作 物营养、增产的作用，可作为制备防治植物病毒病的植物诱抗剂和肥料，具有很大的农用价 值和经济效益。
具体实施例方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例1称取60kg香菇，粉碎后投至泡料釜中，加入60°C 70°C温水300kg，浸泡1个小 时。时时搅拌，得到浸泡液；然后利用超声提取设备超声提取40分钟；将过滤后的提取液抽 入反应釜中，加入4倍体积60% (体积百分比)工业乙醇，夹套中通饱和冷却食盐水开始醇 析，搅拌30分钟后，将温度严格控制在0°C 5°C。醇析4小时后，减压浓缩制成10% (质 量百分比浓度)的香菇多糖母药液体。实施例2称取20kg香菇，粉碎后将其投至泡料釜中，加入60°C 70°C温水400kg，浸泡3小 时，时时搅拌，得到浸泡液；然后利用超声提取设备超声提取20分钟，过滤后，抽至反应釜 中，加入2倍体积80%工业乙醇，夹套中通饱和冷却食盐水开始醇析，搅拌30分钟后，将温 度严格控制在0°C 5°C。醇析6小时后，减压浓缩制成有效成分含量为15% (质量百分比 浓度)的香菇多糖母药液体。实施例3称取30kg香菇，粉碎后将其投至泡料釜中，加入60°C 70°C温水300kg，浸泡4小 时，时时搅拌，得到浸泡液；然后利用超声设备超声提取30分钟，过滤后，抽至反应釜中，加 入3倍体积60%工业乙醇200kg，夹套中通饱和冷却食盐水开始醇析，搅拌30分钟后，将温 度严格控制在0°C 5°C。醇析4小时后，减压浓缩制成有效成分含量为20% (质量百分比 浓度)的香菇多糖母药液体。实施例4称取60kg香菇，粉碎后将其投至泡料釜中，加入60°C 70°C温水300kg，浸泡5小 时，时时搅拌，得到浸泡液；然后利用超声设备超声提取40分钟，过滤后，抽至反应釜中，加 入4倍体积80%工业乙醇200kg，夹套中通饱和冷却食盐水开始醇析，搅拌30分钟后，将温 度严格控制在0°C 5°C。醇析5小时后，减压浓缩制成有效成分含量为25% (质量百分比 浓度)的香菇多糖母药液体。实验例1将实施例1所得香菇多糖母药加水进行稀释制备成香菇多糖含量为1 % (按体积 比稀释10倍)的香菇多糖水剂。由于番茄病毒病是番茄目前主要的病害，尤其以秋番茄、秋延后栽培番茄最为严 重。目前，番茄病毒病发病普遍，为害严重，防治难度大，植株发病后几乎没有产量甚至绝 收。番茄病毒病已经成为威胁番茄生产的重要病害之一。其主要侵染病毒主要有烟草花叶 病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMV)。烟草花叶病毒寄主广泛，可侵染200多种植物，引起的 番茄病毒病发病比较普遍，且一般药剂对番茄病毒病效果很差。试验方法有两种(一 )整株法测定实施例1所得1 %香菇多糖活性方法如下种植普通三生烟，植株长到8片真叶时，保留第4-7片真叶，接种 13. 1 u g/mL烟草花叶病毒病毒后，每隔7天喷施一次药剂，每处理3次重复。设置对照处
5理。施药14天后取未接种和新生叶片，测定药剂对TMV抑制率，实验在防虫温室完成。药剂对TMV增殖的抑制率测定用烟草花叶病毒病毒包被缓冲液稀释处理好的样品，加入到酶联板加样孔中，每 孔200iU。同时设置空白对照、阴性对照和阳性对照。于温箱37°C孵育3h。加入10iU/ mL兔抗清TMV-lgG后，于37°C孵育3h。第二抗体为辣根过氧化物酶标记的鼠抗兔，底物为 邻苯二胺溶液。用酶标仪读取490nm波长的吸光值，用0D值表示。以各处理吸光值计算药 剂对TMV抑制率。( 二 )枯斑法测定实施例1所得香菇多糖稀释得到的香菇多糖水剂活性。取花盆中培养的健康幼番茄苗，采用半叶法进行接种，沿着主脉把叶片剪成两片。 设置对照，六个处理，三次重复。接种13. liU/mL烟草花叶病毒病毒后，立即将药剂喷施在 半叶的表面，放置在24 °C培养箱培养，病斑容易计数时进行枯斑数统计。对照处理用清水喷 施在半叶表面。抑制率=1-处理枯斑数/对照枯斑数结果如下表1整株法测定1 %香菇多糖活性 烟草整株测定结果表明，实施例1所得香菇多糖水剂对TMV具有显著的抑制作用， 其 EC50 为 121. 3mg/L。表2枯斑法测定1 %香菇多糖活性 枯斑法测定结果表明，香菇多糖水剂能有效的抑制TMV，其EC50为127. 8mg/L。试验通过烟草整株法和枯斑法测定了 香菇多糖对TMV的抑制效果，结果表明 香菇多糖能有效的抑制TMV。实验例2将实施例2-4所得香菇多糖母药加水进行稀释制备成香菇多糖含量为1 % (按体 积比稀释)的香菇多糖水剂。按照实施例1相同的方式，利用整株法测定香菇多糖活性测试方法测定结果 如下实施例2-4所得1 %香菇多糖水剂对TMV具有显著的抑制作用，其EC50分别为 120. 9mg/L、122. 3mg/L 和 123. 6mg/L。利用枯斑法测定香菇多糖活性结果表明，实施例2-4所得香菇多糖水剂能 有效的抑制 TMV，其 EC50 分别为 126. 9mg/L、128. 6mg/L 和 129. 4mg/L。试验通过烟草整株法和枯斑法测定了 香菇多糖对TMV的抑制效果，结果表明 香菇多糖能有效的抑制TMV。
权利要求
一种香菇提取物，其特征在于，其以香菇为原料，在提取过程中包含超声提取的步骤。
2.根据权利要求1所述的香菇提取物，其特征在于，所述超声提取的时间为20 40分钟。
3.根据权利要求1或2所述的香菇提取物，其特征在于，超声提取所用的提取器为连续 逆流提取设备。
4.根据权利要求1所述的香菇提取物，其特征在于，在超声提取之前对香菇原料进行 粉碎和浸泡，在超声提取之后进行醇析。
5.根据权利要求4所述的香菇提取物，其特征在于，所述粉碎为将香菇粉碎至粒度在 60 120目之间。
6.根据权利要求4所述的香菇提取物，其特征在于，粉碎后，用5 20倍体积的热水浸 泡1 5小时，浸泡温度保持在60 70°C。
7.根据权利要求4所述的香菇提取物，其特征在于，醇析所用的醇为体积百分比为 60 80%的乙醇，用量为超声提取液2-4倍体积。
8.根据权利要求7所述的香菇提取物，其特征在于，醇析时间为3 6小时，醇析温度 控制在0°C 5°C，醇析后的析出液进行减压浓缩。
9.制备权利要求1 8任一项所述的香菇提取物的方法，其特征在于，包括超声提取的 步骤。
10.包含权利要求1 8任一项所述的香菇提取物在制备用于防治植物病毒病的农药 中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种香菇提取物，其以香菇为原料，提取过程中包含超声提取的步骤。本发明摒弃了传统提取香菇多糖的酶解方法，采用超声提取，时间缩短至传统方法的1/3-1/4，温度降低30℃～40℃，得率提高5％～30％；其工艺流程简单，工序少，提取时间短，节约资源，生产成本较低，所制备出的香菇多糖母药含量高，具有很高的经济价值，有利于规模生产和具有很大的发展空间。
文档编号A01P1/00GK101851356SQ20101019855
公开日2010年10月6日 申请日期2010年6月4日 优先权日2010年6月4日
发明者代为, 杜贵生, 田苗, 纪秀英 申请人:北京三浦百草绿色植物制剂有限公司