专利名称：一种复合微生物添加剂及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种复合微生物添加剂808及其制备方法与应用，属于植物生物调节 剂在农作物种植中应用的生物材料技术领域。
背景技术：
饲料添加剂最初的定义是饲料补充物，以添加维生素和无机盐等成分填补饲料中 营养成分的不足，平衡饲料的营养，并获得良好的饲养效果。随着畜禽集约化死样的进一步发展和畜禽饲养密度的增加，各种畜禽疾病的发生 越来越频繁，多数养殖的畜禽都处于亚健康状态。曾经广泛使用的治疗药物不仅使病原微 生物产生了严重的抗药性，还引起畜产品药物残留的严重问题，发展下去势必影响人类的 健康。微生态制剂在这种历史背景下应运而生，为畜牧业的持续发展提供了一条有效、 可靠的途径。采用生物工程技术复合发酵，利用多种微生物相互作用，形成一个生态平衡的 系统。
发明内容
本发明所要解决的问题是采用多种菌种制备复合微生物菌剂，利用该复合微生物 菌剂制成饲料级复合微生物添加剂应用在畜禽养殖业。进入畜禽动物体内，形成优势种群， 参与肠道微生物的平衡，提高动物的饲料利用率和生长速度，提高动物机体非特异性免疫 功能，防病抗病。本发明的技术解决方案如下一种复合微生物添加剂808采用啤酒酵母 {Saccharomyces cerevisiae) ATCC No. 9763，产朊假丝酵母utilis) ATCC No. 22023，沼泽红假单胞菌 iHhodopseudom onas /^^Asiris) ATCCNo. 33872，植物乳杆菌 {Lactobacillus plantarum)ATCC No. 8014, BfSIILff^ {Leatobacillus acidophilus) ATCC No. 11073，枯草芽孢杆菌(feci/^As subtil is) KKL No. 6633制备菌种；所述菌种的 质量百分比如下啤酒酵母30飞0%，产朊假丝酵母5 30%，沼泽红假单胞菌5 30%，植物乳杆 菌5 30%，嗜酸乳杆菌5 40%，枯草芽孢杆菌5 25%。所述的一种复合微生物添加剂808的制备步骤如下
1.接种将所述各菌种接于斜面培养基上。啤酒酵母培养温度为30°C，培养时间为6 48h ；产朊假丝酵母培养温度25 30°C，培养时间为6 48h ；沼泽红假单胞菌培养温度为 25 30°C，培养时间为6 48h ；植物乳杆菌培养温度25 30°C，培养时间为6 48h ；嗜酸 乳杆菌培养温度为27 37°C，培养时间为6 48h ；枯草芽孢杆菌培养温度为27 37°C， 培养时间为6 48h ；
2.一级菌种培养将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的50mL锥形瓶中，培养基pH 为6. 0 8. 0，锥形瓶放入摇床振荡，温度为30°C，振荡24 48h ；采用血球计数板计数，菌 液中菌种数量分别达到IO8个/mL ；3.二级发酵将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的IOOOmL锥形瓶中，培养基 pH3飞，放入摇床振荡，温度为30°C，振荡48 72h ；使菌种数量分别达到IO8个/mL以上， 将各菌种按所述菌种的质量百分比混合；
4.三级发酵将混合后的菌液接种于盛有复合菌剂培养基的发酵罐中，复合菌剂培养 基pH3飞，接种量为1 5%，30°C下培养4 7天，使发酵液中菌数达到8 10 X IO8个/mL， 即得到所述微生物复合菌剂。所述液体培养基配方为
1.啤酒酵母采用的液体培养基配方为酪蛋白胨15g/L，酵母25g/L，葡萄糖30g/L， KH2PO4 2. 4g/L, K2HPO4 · 3H20 16. 34 g/L ；
2.产阮假丝酵母采用的液体培养基配方为稀释去除啤酒花的麦芽汁至浓度为 12Brix,琼脂15 g，高压灭菌30分钟；
3.沼泽红假单胞菌采用的液体培养基配方为氯化铵1.5g，磷酸二氢钾1. 5g，七水硫 酸镁0. 8g，氯化钠4. Og,碳酸氢钠1. 8g，氯化钙0. Olg, VBO. Ig,酵母粉1. 0 g，乙酸钠4. Og, 微量元素1. OmL/L包括(六水氯化铁5. Og,七水硫酸锌1. Og,五水硫酸铜0. 05g,六水氯化
钴0. 5g，硼酸1. Og,四水氯化锰0. 5g)，添加乙酸调节pH，水适量； 4.植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌采用的液体培养基配方为乳酪蛋白胨10g、蛋白胨10g、 酵母膏5g、葡萄糖5g、吐温80 lg、K2HP042g、醋酸钠5g、柠檬酸二胺2g、MgS04 · 7H20 0. 2g、MnSO4 · H2O 0. 05g、蒸馏水 1000ml ；
5.枯草芽孢杆菌采用的液体培养基配方为牛肉膏5g、蛋白胨10g、Nacl3g、pH 7.0。所述复合菌剂培养基配方为蜂蜜1 5g/100mL、蔗糖2 10g/100mL、蛋白胨 0. 1 0. 5g/100mL,KH2PO4 0. 1 0. 5g/100mL,K2HPO4 0. 5 2g/100mL、MgS04 ·7Η20 0· 5 2g/100mL、Nacl 0. 5 2g/100mL 其余为蒸馏水。所述复合微生物添加剂808在畜禽动物养殖中作为饲料添加剂。本发明的有益效果是复合微生物菌剂采用啤酒酵母、产朊假丝酵母、沼泽红假 单胞菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌制备菌种。以上菌种分别经过一级菌种培 养，二、三级发酵，使发酵液中菌数达到8 10 X IO8个/mL，即得复合微生物添加剂808。本 产品经长期实地验证，配方合理，功效稳定，能够促进动物生长，提高动物产品产量，提高成 活率，防病抗病，提高饲料转化率，改善产品品质。
具体实施例方式本发明采用啤酒酵母、Saccharomycescerevisiae) ATCC No. 9763，产朊假丝酵 母(Candida utilis) ATCC No. 22023，沼泽红假单胞菌onas Palustris) ATCCNo. 33872，植物乳杆菌 Lactobacillus plantarum)ATCC No. 8014，嗜酸乳杆菌 {Leatobacillus acidophilus) ATCC No. 11073，枯草芽孢杆菌 Uaci/A/s subtil is) KKL No. 6633制备菌种，生产复合微生物添加剂808。菌种的质量百分比为啤酒酵母30飞0%，产朊假丝酵母5 30%，沼泽红假单胞菌 5 30%，植物乳杆菌5 30%，嗜酸乳杆菌5 40%，枯草芽孢杆菌5 25%。
常用配方表
5
按照上述配方表和制备方法得到的复合微生物添加剂808，菌数含量达到9 X IO8个/
mLo实施例1
采用本发明制备的复合微生物添加剂808 (以下简称808)在仔猪养殖中应用效果试
验
1.供试材料复合微生物添加剂808
2.试验对象保山农校猪场选择45日龄的断奶长约2元杂仔猪16头。3.试验分组按照强弱大小搭配均勻分组，每组8头，试验组头均体重12. 79kg，对 照组头均体重13. 31kg。试验要求试验组和对照组的基础饲料配制相同。试验组饲粮添加复合微生物添 加剂808发酵4-6天才进行饲喂。4.试验方法
试验组每0. 1吨饲料使用复合微生物添加剂808 IOOmLJn 30kg清水。对照组基础饲料添加“猪博士”预混料，进行饲喂。先进行5天的饲喂，然后进入正式试验期32天。表1基础饲料组成及营养成分
试验组饲喂发酵饲料，对照组饲喂湿拌料，每天饲喂4顿，两组均采用限制饲喂方式 (八成饱)，自由饮水。5.试验结果与分析
试验组日增重348g，对照组日增重333g。试验组的仔猪采食量少，嗜睡，粪便量少且 臭味小；对照组仔猪喜好运动，少数出现呼吸系统疾病。由此可见，使用复合微生物添加剂 808发酵饲料饲喂仔猪，提高饲料的利用率，相对降低生产成本，有效预防了仔猪的胃肠及 呼吸系统疾病。实施例2
采用本发明制备的复合微生物添加剂808 (以下简称808)在奶牛养殖中应用效果试
验1.试验材料
供试奶牛健康无疾病的泌乳荷斯坦奶牛
2.试验方法
试验设两个试验点，每个试验点10头奶牛分为两组，试验组饲喂复合微生物添加剂 808，另一组对照。第一个试验点，每日一次饲料添加。第二个试验点，每日分早、午、晚三次饲料添加。3.试验时间为30天。5天预试期，正式试验期为25天。4.试验结果
试验前10天试验组比对照组产奶量提高8%。后15天平均比对照组提高13. 4%。奶牛 增奶效果显著。日粮利用率提高，生产成本降低。
权利要求
一种复合微生物添加剂，其特征在于采用 啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) ATCC No.9763，产朊假丝酵母(Candida utilis)ATCC No.22023，沼泽红假单胞菌(Rhodopseudom onas Palustris)ATCCNo.33872，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ATCC No.8014，嗜酸乳杆菌(Leatobacillus acidophilus) ATCC No.11073，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ATCC No.6633制备菌种；所述菌种的质量百分比如下啤酒酵母30~60%，产朊假丝酵母5~30%，沼泽红假单胞菌5~30%，植物乳杆菌5~30%，嗜酸乳杆菌5~40%，枯草芽孢杆菌5~25%。
2.根据权利要求1所述的一种复合微生物添加剂的制备方法，其特征在于所述复合 微生物添加剂的制备步骤如下、1.接种将所述各菌种接于斜面培养基上。啤酒酵母培养温度为30°C，培养时间为6 48h ；产朊假丝酵母培养温度25 30°C，培养时间为6 48h ；沼泽红假单胞菌培养温度为 25 30°C，培养时间为6 48h ；植物乳杆菌培养温度25 30°C，培养时间为6 48h ；嗜酸 乳杆菌培养温度为27 37°C，培养时间为6 48h ；枯草芽孢杆菌培养温度为27 37°C， 培养时间为6 48h ；、2.一级菌种培养将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的50mL锥形瓶中，培养基pH 为6. 0 8. 0，锥形瓶放入摇床振荡，温度为30°C，振荡24 48h ；采用血球计数板计数，菌 液中菌种数量分别达到IO8个/mL ；
3.二级发酵将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的IOOOmL锥形瓶中，培养基 pH3飞，放入摇床振荡，温度为30°C，振荡48 72h ；使菌种数量分别达到IO8个/mL以上， 将各菌种按所述菌种的质量百分比混合；
4.三级发酵将混合后的菌液接种于盛有复合菌剂培养基的发酵罐中，复合菌剂培养 基pH3飞，接种量为1 5%，30°C下培养4 7天，使发酵液中菌数达到8 10 X IO8个/mL， 即得到所述微生物复合菌剂。、3.根据权利要求2所述的一种复合微生物添加剂的制备方法，其特征在于所述液体 培养基配方为1.啤酒酵母采用的液体培养基配方为酪蛋白胨15g/L，酵母25g/L，葡萄糖30g/L， KH2PO4 2. 4g/L, K2HPO4 · 3H20 16. 34 g/L ；2.产阮假丝酵母采用的液体培养基配方为稀释去除啤酒花的麦芽汁至浓度为 12Brix,琼脂15 g，高压灭菌30分钟；3.沼泽红假单胞菌采用的液体培养基配方为氯化铵1.5g，磷酸二氢钾1. 5g，七水硫 酸镁0. 8g，氯化钠4. Og,碳酸氢钠1. 8g，氯化钙0. 01g, VB0. Ig,酵母粉1. 0 g，乙酸钠4. Og, 微量元素1. 0mL/L包括(六水氯化铁5. Og,七水硫酸锌1. Og,五水硫酸铜0. 05g,六水氯化钴 0. 5g，硼酸1. Og,四水氯化锰0. 5g)，添加乙酸调节pH，水适量；、4.植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌采用的液体培养基配方为乳酪蛋白胨10g、蛋白胨10g、 酵母膏5g、葡萄糖5g、吐温80 lg、K2HP042g、醋酸钠5g、柠檬酸二胺2g、MgSO4 · 7H20 0. 2g、MnSO4 · H2O 0. 05g、蒸馏水 1000ml ；
5.枯草芽孢杆菌采用的液体培养基配方为牛肉膏5g、蛋白胨10g、Nacl3g、pH 7.0。、4.根据权利要求2所述的一种复合微生物添加剂的制备方法，其特征在于所述复合菌剂培养基配方为蜂蜜1 5g/100mL、蔗糖2 10g/100mL、蛋白胨0. 1 0. 5g/100mL、KH2PO4 0. 1 0. 5g/100mL、K2HPO4 0. 5 2g/100mL、MgSO4 · 7Η20 0· 5 2g/100mL、Nacl 0. 5 2g/100mL其余为蒸馏水。5.根据权利要求1所述的复合微生物添加剂的应用，其特征在于所述复合微生物添 加剂在畜禽动物养殖中作为饲料添加剂。
全文摘要
一种复合微生物添加剂及其制备方法与应用，属于微生态调节剂在畜禽动物养殖中应用的生物材料技术领域。采用啤酒酵母30~60%，产朊假丝酵母5~30%，沼泽红假单胞菌5~30%，植物乳杆菌5~30%，嗜酸乳杆菌5~40%，枯草芽孢杆菌5~25%。以上菌种分别经过一级菌种培养，二、三级发酵，使发酵液中菌数达到8～10×108个/mL，即得复合微生物添加剂808。本产品经长期实地验证，配方合理，功效稳定，能够促进动物生长，提高动物产品产量，提高成活率，防病抗病，提高饲料转化率，改善产品品质。
文档编号A23K1/16GK101919494SQ201010296819
公开日2010年12月22日 申请日期2010年9月30日 优先权日2010年9月30日
发明者刘美娜, 崔国臣 申请人:大连三科生物工程有限公司