专利名称：以丛生芽为外植体的胡萝卜无性系建立方法
技术领域：
本发明属于属于植物遗传改良技术的蔬菜作物组织培养技术领域，特别涉及一种 以丛生芽为外植体的胡萝卜无性系建立方法，它是在胡萝卜无性系建立过程中，采用胡萝 卜丛生芽作为外植体进行组织培养，经过材料的灭菌、继代增殖培养，生根培养，驯化后，建
立胡萝卜无性系的一种方法。
背景技术：
对具有优良变异的胡萝卜进行离体培养，能在短时间内通过丛生芽获得大量胡萝 卜试管苗，这一技术在胡萝卜优良种质保存繁殖等方面具有重要的应用价值。利用该技术，
还可以达到在短期内大量繁殖遗传基因型比较一致的优良材料，充分利用繁殖材料的遗传 潜能达到最佳的效果，并为优良变异品系的长期保存和利用提供技术支撑。同时也为将来 无性系的诱变、突变筛选等技术的开展作必要的准备。有关胡萝卜无性系的建立国内鲜有 报道，多数报道的是人工种子的培养方法，而在无性系建立过程中，采用胡萝卜丛生芽作为 外植体的无菌苗获得方式则未发现有关报道。以丛生芽作为外植体的胡萝卜无性系建立过 程中，丛生芽的灭菌方法是一个技术难点，本发明经过试验材料的选择、前处理、多菌灵和 升汞的处理、后处理，可获得成活率达到90%的无菌苗，为胡萝卜无性系的建立奠定了坚实 的基础。
发明内容
本发明目的在于建立以丛生芽作为外植体的胡萝卜无性系。本发明的技术方案是经过试验材料的选择、前处理、多菌灵和升汞的处理、后处 理，可获得成活率达到90%的无菌苗，然后再通过继代增殖培养，生根培养，驯化后，建立胡 萝卜无性系。一种以丛生芽为外植体的胡萝卜无性系建立方法，其特征在于在以具有有利变 异性状的丛生芽为外植体的胡萝卜无性系建立过程中，一种对带菌丛生芽的灭菌方法，在 胡萝卜无性系建立过程中，采用胡萝卜丛生芽作为外植体进行组织培养，经过材料的选择、 前处理、浓度为0. 1-20%多菌灵和浓度为0. 001-10%升汞的处理、后处理，可获得成活率 达到90%的无菌苗的一套灭菌方法。所述的以丛生芽为外植体的胡萝卜无性系建立方法，其特征在于获得胡萝卜无 菌苗后，经过继代增殖培养，生根培养，驯化后，建立胡萝卜无性系的方法1)将灭菌后的丛生苗切成具有1个芽，长4厘米左右的茎段，接种到以MS培养基 为基本培养基，附加不同细胞分裂素6BA的培养基上，进行丛生苗芽的诱导培养；10天后观 察，培养基中丛生苗长势旺盛，叶子较大，颜色深绿，平均每瓶增殖达3倍；2)当分化苗生长到3厘米左右的时候，将分化苗从基部切下，接种到以MS为基本 培养基，附加0. 1 % 5%的NAA的培养基上，每瓶接种2株苗，20天后观察，可生长出根，并 生长旺盛；
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3)将已具有8 10个根的植株，打开封口膜，在22°C自然光照一天后，洗去培养 基，栽入比例为蛭石草炭土珍珠岩=2 1 1的基质中，用地膜密封，在22°C自然 光照一天后移人人工气候室，白天25. 50C，夜间24°C，相对湿度70%，每天光照3000Lux，光 照14小时，地膜密封一天后逐渐掀开部分地膜减少湿度，5天后地膜全部去除，期间浇一次 营养液，10天后驯化成活。本发明具有以下优点和特点1.本发明方法简单容易掌握。2.以丛生芽作为外植体的胡萝卜无性系的方法，国内未发现相关报道。3.本发明中的外植体灭菌方法可以获得成活率高达90%的胡萝卜无菌苗。
具体实施例方式1)选择具有有利变异性状的胡萝卜，将其洗净，剥去叶子，栽植于花盆中，定期浇 水，待其长出主芽后，用小刀切去，继续栽培，获得丛生芽，待其长到3厘米高左右的时候， 作为处理材料。2)将试验材料用清水冲洗5 30分钟，洗衣粉(浓度0. 01 20% )振荡冲洗 30 60分钟，再用清水冲洗20 150分钟。然后放入(浓度0. 1 20% )多菌灵浸泡5 分钟，再放入(浓度0. 001 10% )的升汞浸泡2 15分钟，再用无菌蒸馏水反复冲洗2 次，再在无菌蒸馏水中浸泡10 30分钟，获得无菌苗。3)将灭菌后的丛生苗切成具有1个芽，长4厘米左右的茎段，接种到以MS培养基 为基本培养基，附加不同细胞分裂素6BA的培养基上，进行丛生苗芽的诱导培养。10天后观 察，培养基中丛生苗长势旺盛，叶子较大，颜色深绿，平均每瓶增殖达3倍。4)当分化苗生长到3厘米左右的时候，将分化苗从基部切下，接种到以MS为基本 培养基，附加0. 1 % 5%的NAA的培养基上，每瓶接种2株苗，20天后观察，可生长出根，并 生长旺盛。5)将已经有8 10个根的植株，打开封口膜，22°C自然光照一天后，洗去培养基， 栽入比例为蛭石草炭土珍珠岩=2 1 1的基质中，用地膜密封，在22°C自然光照一 天后移人人工气候室，白天25. 5°C，夜间24°C，相对湿度70%，每天光照3000LUX光照14小 时，地膜密封一天后逐渐掀开部分地膜减少湿度，5天后地膜全部去除，期间浇一次营养液， 10天后驯化成活。
权利要求
一种以丛生芽为外植体的胡萝卜无性系建立方法，其特征在于在以具有有利变异性状的丛生芽为外植体的胡萝卜无性系建立过程中，一种对带菌丛生芽的灭菌方法，在胡萝卜无性系建立过程中，采用胡萝卜丛生芽作为外植体进行组织培养，经过材料的选择、前处理、浓度为0.1 20％多菌灵和浓度为0.001 10％升汞的处理、后处理，可获得成活率达到90％的无菌苗的一套灭菌方法。
2.根据权利要求1所述的以丛生芽为外植体的胡萝卜无性系建立方法，其特征在于 获得胡萝卜无菌苗后，经过继代增殖培养，生根培养，驯化后，建立胡萝卜无性系的方法1)将灭菌后的丛生苗切成具有1个芽，长4厘米左右的茎段，接种到以MS培养基为基 本培养基，附加不同细胞分裂素6BA的培养基上，进行丛生苗芽的诱导培养；10天后观察， 培养基中丛生苗长势旺盛，叶子较大，颜色深绿，平均每瓶增殖达3倍；2)当分化苗生长到3厘米左右的时候，将分化苗从基部切下，接种到以MS为基本培养 基，附加0. 1 % 5%的NAA的培养基上，每瓶接种2株苗，20天后观察，可生长出根，并生长 旺盛；3)将已具有8 10个根的植株，打开封口膜，在22°C自然光照一天后，洗去培养基，栽 入比例为蛭石草炭土珍珠岩=2 1 1的基质中，用地膜密封，在22°C自然光照一 天后移人人工气候室，白天25. 5°C，夜间24°C，相对湿度70%，每天光照3000Lux，光照14 小时，地膜密封一天后逐渐掀开部分地膜减少湿度，5天后地膜全部去除，期间浇一次营养 液，10天后驯化成活。
全文摘要
一种以丛生芽为外植体的胡萝卜无性系建立方法，是利用具有有利变异性状的丛生芽为外植体的胡萝卜无性系建立方法，用于植物遗传改良领域。在胡萝卜无性系建立过程中，采用胡萝卜丛生芽作为外植体进行组织培养，经过材料的选择、前处理、多菌灵和升汞的处理、后处理，可获得成活率达到90％的无菌苗，后经过继代增殖培养，生根培养，驯化后，建立胡萝卜无性系。
文档编号A01H4/00GK101960990SQ201010515768
公开日2011年2月2日 申请日期2010年10月22日 优先权日2010年10月22日
发明者付任胜, 尹立荣, 管长志, 陈磊 申请人:天津市农业生物技术研究中心