专利名称：枯草芽孢杆菌sf-628和咪鲜胺锰盐复配杀菌剂及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种复配杀菌剂及其应用，尤其是将一株枯草芽孢杆菌Sf-628和咪鲜胺锰盐复配成杀菌剂及其在防治茄果类作物土传病害(枯萎病和青枯病)中的应用。
背景技术：
随着人们生活水平的提高，对食品安全性的要求也越来越高。保障无公害、优质农产品的供给和实现资源的可持续利用是21世纪农业生产面临的最大挑战。一方面大幅度增加设施蔬菜种植面积是种植业结构调整中的核心内容；另一方面高产、连作、多样化的设施蔬菜种植布局为病虫害提供了充裕的营养和繁殖条件。因此，近年来设施条件下茄果类作物土传病害(枯萎病和青枯病等)频繁暴发，形成了在蔬菜生长期连续不断使用化学农药的严峻局面。利用化学药剂防治蔬菜土传病害的方法不仅造成生态环境严重污染，而且直接增加蔬菜中有毒化学物质的残留，对人类健康带来严重危害。如何减少蔬菜中的化学药剂残留量，已经成为各级政府、学者和菜农关注的焦点。生物农药对人畜安全、环境兼容 性好。因此利用生物农药防治蔬菜土传病害日益引起人们的重视。但是田间使用生物农药时也存在着一些问题，如田间防治效果不稳定、药效作用缓慢等。解决这一突出问题的根本途径是突破目前以化学农药为主的防治对策的局限性，开展生防微生物与低毒化学药剂协同控制茄果类作物土传病害的技术体系。通过有目的地引进有益微生物，恶化病菌生存环境，形成优势互补，既能发挥化学药剂高效、快速的抑菌作用，又能发挥生防微生物在诱导植物抗病性、持久地控制茄果类蔬菜土传病害流行的目的。江苏省农科院筛选获得的、对多种真菌病害有很好防效的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) sf-628于2006年8月I日被中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)受理保藏，保藏编号为CGMCC No. 1772，拉丁学名为Bacillus subtilissf-628 (本文简称sf-628)。其生物学性状记载为sf_628菌落圆形，米色，表面有皱褶。革兰氏反应阳性，细胞形状杆状，细胞直径大于I Pm，严格好气，L-阿拉伯糖、D-葡萄糖、D-木糖、D-甘露醇、淀粉水解、明胶液化等利用反应均为阳性。2007年以来江苏省农科院开展了枯草芽孢杆菌sf-628防治梨轮纹病的研究，并有相关报道(详见果树学报2010，27 (5) ；2010,27(1) ；2009,26(3);江苏农业学报2009，25(5))。近年来研究室发现枯草芽孢杆菌sf-628对蔬菜枯萎病和青枯病也有很强的防治作用。枯草芽孢杆菌sf-628是一株对化学药剂咪鲜胺锰盐有天然抗性的菌株，用咪鲜胺锰盐进一步抗性诱导，枯草芽孢杆菌sf-628能够在咪鲜胺锰盐含量IOOOOppm的YGPA培养基上正常生长。枯草芽孢杆菌sf-628还具有许多优良性能，如有较广的抑菌谱；生长速度快，适应环境能力强，能在土壤和植物表面定殖，并形成优势种群；诱导寄主产生抗病性；分泌产生多种抗菌物质。目前，江苏省苏科农化有限责任公司已生产了 200亿枯草芽孢杆菌sf-628可湿性粉剂。咪鲜胺猛盐,英文通用名prochloraz-manganese chloride complex ;化学名称为N-丙基-N[2-(2，4，6-三氯苯氧基)乙基]-IH咪唑-I-甲酰胺-氯化锰。其他名称施保功。原药外观为白色至褐色砂粒状粉末，气味微芳香，熔点141-142. 5°C，水中溶解度为40mg/L，易溶于有机溶剂。蒸气压为0.02Pa(20°C )。在水溶液中或悬浮液中，此复合物很快地分离，在25°C下其分离度于4小时内达55°C，属于低毒杀菌剂。原药对大鼠急性经口LD50 1600-3200mg/kgo咪鲜胺锰盐具有治疗和保护双重作用，内吸性强，可被根、茎、叶部吸收，并能很快地在植物株体内向上传导，能有效地防治多数真菌引起的病害。其作用机理是影响留醇的生物合成，使病原菌的细胞膜功能受到破坏，最终导致细胞死亡，从而起到杀菌、防病和治病的功效。咪鲜胺锰盐对茄果类作物土传病害有较好的防效。目前，将枯草芽孢杆菌sf-628和咪鲜胺锰盐复配的可湿性杀菌粉剂并未见诸报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) sf-628,该菌株已于2006年8月I日被中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心受理保藏，保藏编号为CGMCC No. 1772。本发明的另一目的是针对目前生产上大量使用化学农药防治蔬菜病害、严重污染生态环境、导致农产品中农药残留超标的问题，提出一株对茄果类作物土传病害(枯萎病、青枯病等)具有良好防治效果的枯草芽孢杆菌sf-628和咪鲜胺锰盐复配的可湿性杀菌粉剂及其应用。枯草芽孢杆菌sf-628和咪鲜胺锰盐复配后，形成优势互补的作用，既能发挥化学药剂高效、快速的抑菌作用，又能发挥枯草芽孢杆菌sf-628在诱导植物抗病性、持久地控制茄果类蔬菜土传病害流行的目的发明人从采样分离获得的2000个细菌菌株中筛选出枯草芽孢杆菌sf-628，抑菌试验结果表明该菌株对多种真菌病害具有很强的抑制作用；而且枯草芽孢杆菌sf-628是一株对化学药剂咪鲜胺锰盐有天然抗性的菌株，通过抗性诱导，枯草芽孢杆菌sf-628能够在咪鲜胺锰盐含量IOOOOppm的YGPA培养基上正常生长。因而可以将枯草芽孢杆菌sf-628与咪鲜胺锰盐复配成杀菌剂，实现长期共存。本发明提供了一种复配杀菌剂，其中有效活性成分由枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis) sf-628和咪鲜胺猛盐组成。本发明所述的复配杀菌剂，其中，枯草芽孢杆菌sf-628与咪鲜胺锰盐的的重量比为1-99 99-1。本发明所述的复配杀菌剂，它是可湿性粉剂，其中各组成与含量如下
活性成分10%-85%助剂1%-20%粘合剂2%-20%
表面活性剂l%-20°/o
填充剂10%-70%
本发明所述的复配杀菌剂，其中助剂可任选一种或多种下列物质NN0(亚甲基二萘磺酸钠)、氮酮、噻酮；粘合剂可任选一种或多种下列物质聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、聚乙烯醇(聚合数12000-20000);表面活性剂可任选一种或多种下列物质十二烷基磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠、木质素磺酸钠、茶枯粉、皂角粉；填充剂可任选一种或多种下列物质轻质碳酸钙、硅藻土、高岭土、絹云母粉和白碳黑。本发明提供了所述复配杀菌剂的用途，将所述的杀菌剂稀释后灌入蔬菜根部用于防治蔬菜土传病害；其特征在于所述的蔬菜土传病害是茄果类作物枯萎病和青枯病。本发明进一步提供了所述复配杀菌剂的应用，其特征在于将成品药剂稀释后的有效药物成分含量至少为300mg/L。本发明的优点在于通过引进对人畜安全、对茄果类作物枯萎病菌、青枯病菌均具有较强抑制作用的枯草芽孢杆菌sf-628，将其与低毒化学药剂咪鲜胺锰盐按一定比例复配，达到互补优势、减少化学药剂用药量、降低用药成本，在提高防治效果的同时，改善了生态环境、减少了化学药剂在蔬菜中的残留量。
具体实施例方式实施例I、枯草芽孢杆菌sf-628对番茄枯萎病菌和青枯病菌的抑制作用。供试病原菌菌株番茄枯萎病菌由江苏省农科院植保所提供。用PSA培养基(200g马铃薯、20g蔗糖、20g琼胶和IOOOmL蒸馏水，pH 5. 6 6. 6) 28°C培养5d，备用。番茄青枯病菌由江苏省农科院植保所提供。用NA培养基(牛肉浸膏3.0g，酵母膏lg，蛋白胨5g，葡萄糖10g，琼脂20g，蒸馏水IOOOmL) 28。。振荡(150r/m)培养2d，备用。将江苏省农业科学院筛选获得的枯草芽孢杆菌sf-628在NA培养基上进行活化，然后移入50mL NA培养液中，在28°C下振荡(150r/m)培养2d，备用。在PSA平板中央放置枯萎病菌菌块，直径为7mm ;培养皿四周呈十字架型放置4张滤纸片(离培养皿中心距离为22. 5mm)，每张滤纸片上加入不同稀释倍数的枯草芽孢杆菌sf-628菌液7 y L ;设清水对照。每处理重复3皿。28°C恒温培养，待对照平板上病原菌菌落长满时，测量处理菌落生长直径。计算抑制率抑制率(％)=[(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-7)] X 100%吸取青枯菌液涂布NA平板(0. 3mL菌液/平板)。培养皿中央放置I张灭菌滤纸片，滤纸片上加入不同稀释倍数的枯草芽孢杆菌sf-628菌液7 y L ;设清水对照。每处理重复3皿。28°C恒温培养2d，测量抑菌圈直径。试验结果见表I。枯草芽孢杆菌sf-628原液、100倍稀释液和500倍稀释液对番茄枯萎病菌和青枯病菌均具有较强的抑制作用。表I枯草芽孢杆菌sf-628对番茄枯萎病菌和青枯病菌的抑制作用
权利要求
1.一种复配杀菌剂，其中有效活性成分由枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) sf-628和咪鲜胺锰盐组成。
2.根据权利要求I所述的枯草芽孢杆菌sf-628和咪鲜胺锰盐复配杀菌剂，其中，枯草芽孢杆菌sf-628与咪鲜胺锰盐的的重量比为1-99 :99-1。
3.根据权利要求1-2所述的枯草芽孢杆菌sf-628和咪鲜胺锰盐复配杀菌剂是可湿性粉剂，其组成与含量如下 活性成分10%-85% 助剂1%-20% 粘合剂2%-20%。 表面活性剂1%-20% 填充剂10%-70%
4.根据权利要求3所述的枯草芽孢杆菌sf-628和咪鲜胺锰盐复配可湿性杀菌粉剂，其中助剂可任选一种或多种下列物质NNO(亚甲基二萘磺酸钠)、氮酮、噻酮；粘合剂可任选一种或多种下列物质聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、聚乙烯醇(聚合数12000-20000);表面活性剂可任选一种或多种下列物质十二烷基磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠、木质素磺酸钠、茶枯粉、皂角粉；填充剂可任选一种或多种下列物质轻质碳酸钙、硅藻土、高岭土、絹云母粉和白碳黑。
5.一种权利要求1-4所述的复配杀菌剂的用途，其特征在于将所述的杀菌剂稀释后灌入蔬菜根部用于防治蔬菜土传病害。
6.根据权利要求5所述的复配杀菌剂的应用，其特征在于所述的蔬菜土传病害是茄果类作物枯萎病和青枯病。
7.根据权利要求5或6所述的复配杀菌剂的应用，其特征在于将成品药剂稀释后的有效药物成分含量至少为300mg/L。
全文摘要
本发明涉及一种复配杀菌剂，其中有效活性成分由枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)sf-628和咪鲜胺锰盐组成。其特征在于所述的有效成分中，枯草芽孢杆菌sf-628与咪鲜胺锰盐的重量比为1-99∶99-1。该复配杀菌剂是可湿性粉剂，其组成与含量比例分别是50％咪鲜胺锰盐30％；200亿枯草芽孢杆菌sf-628可湿性粉剂30％；NNO(亚甲基二萘磺酸钠)为7％；聚乙二醇为3％；十二烷基苯磺酸钠为5％；轻质碳酸钙为25％。应用时，将上述复配杀菌剂稀释后灌入蔬菜根部用于防治蔬菜土传病害，主要是茄果类作物枯萎病和青枯病；稀释后的有效药物成分含量至少为300mg/L。其优点是将枯草芽孢杆菌sf-628与化学药剂咪鲜胺锰盐按一定比例混合使用，能实现优势互补、减少化学药剂用药量、降低用药成本，在提高防治效果的同时，改善生态环境、减少了化学药剂在农产品中的残留量。
文档编号A01N59/16GK102715193SQ20111033903
公开日2012年10月10日 申请日期2011年11月1日 优先权日2011年11月1日
发明者乔俊卿, 刘永锋, 刘邮洲, 聂亚峰, 陈志谊 申请人:江苏省农业科学院