专利名称：无菌培养黄粉虫的方法
技术领域：
本发明属生物技术领域，涉及一种无菌培养黄粉虫的方法。
背景技术：
黄粉虫(Tenebrio moIitor L.)分类上属鞘翅目、拟步行甲科、拟步甲族、拟步甲属。它是一种大型仓贮害虫，同时又是一种极具开发潜力的资源昆虫。该虫主要用作禽类和其它一些特种经济动物(蝎子、蛤蚧、牛蛙、林蛙、鳖、蝎、蛇、蜈蚣、观赏鱼及鸟类等)的饲料，同时也用于开发保健食品或药品(白耀宇，程家安，昆虫知识，2003，40 (4):317-322)。黄粉虫食性杂、食物来源广、生活力强、易于人工饲养，作为病原真菌的诱捕昆虫是一种理想的材料。贾春生等利用黄粉虫分离土壤昆虫病原真菌(贾春生，由士江，高文韬，昆虫知识,2006，43 (2):260-261)，结果昆虫病原真菌的总检出率优于用大蜡螟诱集方法诱捕昆虫病原真菌；李会平等用黄粉虫诱集法分离球孢白僵菌(李会平，黄大庄，王晓红，郑建伟，蚕业科学，2006，32 (3):320-323)，也取得较好的效果。使用敏感昆虫诱获土壤中的昆虫病原真菌，较容易得到致病性强的生防菌。但这种方法常常会受到供试昆虫供给的制约。在利用黄粉虫诱捕土壤病原真菌的实践中，黄粉虫自身携带病菌，也会导致黄粉虫死亡，从而干扰了实验的准确性。为避免黄粉虫自身致病死亡，需要消除黄粉虫自身携带的病菌。本发明采用无菌培养黄粉虫的方法，构建无菌黄粉虫材料，可应用到黄粉虫生活史各个阶段无菌材料的取材要求实验中。
发明内容
本发明提供了一种无菌培养黄粉虫的方法。该方法的操作步骤如下:(I)初代黄粉虫材料的处理:选取生长健壮的黄粉虫幼虫，用无菌水进行表面清洗3次，用无菌滤纸片吸干虫体上的水分，在75%消毒酒精中消毒5-15秒钟，在无菌滤纸片上挥干酒精，处理好的幼虫作为初代材料。(2)无菌麸皮培养基制备:取30g麸皮装在500ml罐头瓶内，封好瓶口，于0.llMPa，121°C灭菌 60min，冷却备用。(3)黄粉虫无菌培养:将步骤(I)中制备好的初代黄粉虫按每瓶10只的量分别置于步骤(2)的无菌麸皮培养基罐头瓶中，15-25°C培养至幼虫化蛹。将蛹无菌操作转移至新鲜无菌麸皮培养基中，待蛹羽化后再转移至新鲜无菌麸皮培养基中，交配后的成虫转移至无菌铁丝网筛内，筛子下面放一张无菌纸，收集成虫产下的卵即为子一代卵。子一代卵置于无菌麸皮培养基中继续培养至成虫，筛选无菌虫体，用同样的方法产卵，为子二代卵。如此逐代稀释，子二代卵培养至成虫，检测到的无菌率达90% ;子三代卵培养至成虫，检测到的的无菌率达95%;子四代卵培养至成虫， 检测到的的无菌率达100%。得到的无菌虫体可以根据实验需要，继续培养至实验需要的虫龄。
(4)无菌成虫的检测和数量统计:将无菌培养的刚羽化的黄粉虫成虫分别无菌操作转移至含水量50%的无菌新鲜麸皮培养基中，25°C培养10天，无微生物生长起来的虫体为无菌。统计无菌成虫数量，计算无菌率。本发明的关键点在于:黄粉虫幼虫消毒要充分，但需要控制好消毒时间，避免时间过长，将幼虫杀死；培养温度会影响黄粉虫生长，适宜的培养温度，能获得健壮的黄粉虫材料；无菌的获得是通过饲养培养基的无菌和产卵条件的无菌，不断稀释虫体本身所带菌，所以培养、继代、产卵的过程无菌操作要严格。以上关键点如能把握好，可以获得健康无菌的黄粉虫子代卵。本发明操作简便，效果良好，可应用到无菌培养黄粉虫生活史各个阶段取材的实验中。
具体实施方式
以下实例用于说明本发明，但不是对本发明的限制。实施例1:(I)初代黄粉虫材料的处理:选取生长健壮的黄粉虫幼虫，用无菌水进行表面清洗3次，立即用无菌滤纸片吸干虫体上的水分，在75%消毒酒精中消毒5秒钟，在无菌滤纸片上挥干酒精，处理好的幼虫作为父代材料。(2)无菌麸皮培养基制备:取30g麸皮装在500ml罐头瓶内，封好瓶口，于0.llMPa，121°C灭菌 60min，冷却备用。(3)黄粉虫无菌培养:将制备好的初代黄粉虫按每瓶10只的量分别置于无菌麸皮培养基罐头瓶中，15°C培养至幼虫化蛹。将蛹无菌操作转移至新鲜无菌麸皮培养基中，待蛹羽化后再转移至新鲜无菌麸皮培养基中，交配后的成虫转移至无菌铁丝网筛内，筛子下面放一张无菌纸，收集成虫产下的卵即为子一代卵。子一代卵，置于无菌麸皮培养基中，培养至实验需要的虫龄。(4)统计无菌成虫的得率为60%，比只经过无菌水虫体表面处理的对照组得率提高 44%。实施例2:(I)初代黄粉虫材料的处理:选取生长健壮的黄粉虫幼虫，用无菌水进行表面清洗3次，立即用无菌滤纸片吸干虫体上的水分，在75%消毒酒精中消毒10秒钟，在无菌滤纸片上挥干酒精，处理好的幼虫作为父代材料。(2)无菌麸皮培养基制备:取30g麸皮装在500ml罐头瓶内，封好瓶口，于0.llMPa，121°C灭菌 60min，冷却备用。(3)黄粉虫无菌培养:将制备好的初代黄粉虫按每瓶10只的量分别置于无菌麸皮培养基罐头瓶中，20°C培养至幼虫化蛹。将蛹无菌操作转移至新鲜无菌麸皮培养基中，待蛹羽化后再转移至新鲜无菌麸皮培养基中，交配后的成虫转移至无菌铁丝网筛内，筛子下面放一张无菌纸，收集成虫产下的卵即为子一代卵。子一代卵，置于无菌麸皮培养基中，培养至实验需要的虫龄。(4)统计无菌成虫的得率为75%，比只经过无菌水虫体表面处理的对照组得率提闻 59 % ο
实施例3:(1)初代黄粉虫材料的处理:选取生长健壮的黄粉虫幼虫，用无菌水进行表面清洗3次，立即用无菌滤纸片吸干虫体上的水分，在75%消毒酒精中消毒15秒钟，在无菌滤纸片上挥干酒精，处理好的幼虫作为初代材料。(2)无菌麸皮培养基制备:取30g麸皮装在500ml罐头瓶内，封好瓶口，于0.llMPa，121°C灭菌 60min，冷却备用。(3)黄粉虫无菌培养:将制备好的初代黄粉虫按每瓶10只的量分别置于无菌麸皮培养基罐头瓶中，25°C培养至幼虫化蛹。将蛹无菌操作转移至新鲜无菌麸皮培养基中，待蛹羽化后再转移至新鲜无菌麸皮培养基中，交配后的成虫转移至无菌铁丝网筛内，筛子下面放一张无菌纸，收集成虫产下的卵即为子一代卵。子一代卵，置于无菌麸皮培养基中，培养至实验需要的虫龄。(4)统计无菌成虫的得率为98%，比只经过无菌水虫体表面处理的对照组得率提闻 82 % ο
权利要求
1.一种无菌培养黄粉虫的方法，其特征在于该方法的操作步骤包括: (1)初代黄粉虫材料的处理:选取生长健壮的黄粉虫幼虫，用无菌水进行表面清洗3次，用无菌滤纸片吸干虫体上的水分，在75%消毒酒精中消毒5-15秒钟，在无菌滤纸片上挥干酒精，处理好的幼虫作为父代材料。
(2)无菌麸皮培养基制备:取30g麸皮装在500ml罐头瓶内，封好瓶口，于0.1lMPa,121°C灭菌60min，冷却备用。
(3)黄粉虫无菌培养:将制备好的初代黄粉虫按每瓶10只的量分别置于无菌麸皮培养基罐头瓶中，15-25°C培养至幼虫化蛹。将蛹无菌操作转移至新鲜无菌麸皮培养基中，待蛹羽化后再转移至新鲜无菌麸皮培养基中，交配后的成虫转移至无菌铁丝网筛内，筛子下面放一张无菌纸，收集成虫产下的卵即为子一代卵。子一代卵，置于无菌麸皮培养基中，培养至实验需要的虫龄。
(4)无菌成虫的检测和数量统计:将无菌培养的刚羽化的黄粉虫成虫分别无菌操作转移至含水量50%的无菌新鲜麸皮培养基中，25°C培养10天，无微生物生长起来的虫体为无菌。统计无菌成 虫数量 。
全文摘要
本发明涉及一种无菌培养黄粉虫的方法。其操作步骤主要包括(1)初代黄粉虫材料的处理；(2)无菌麸皮培养基制备；(3)黄粉虫无菌培养；(4)无菌成虫的检测和数量统计。使用本发明所提出的无菌培养黄粉虫的方法，达到虫体不带菌，生长健壮。本发明操作简便，效果良好，可应用到黄粉虫生活史各个阶段无菌材料的取材要求实验中。
文档编号A01K67/033GK103098762SQ201110360999
公开日2013年5月15日 申请日期2011年11月15日 优先权日2011年11月15日
发明者徐玲, 陈自宏 申请人:保山学院