专利名称：一种杀灭植物病虫害的复方中药提取物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种杀灭植物病虫害的复方中药提取物。
背景技术：
鉴于化学农药具有众所周知的诸多弊端，目前国内外农业生产均提出研究高效、低毒、低残留、无公害的农药，开发天然植物源农 药就是最好的途径之一，也是当前研究的热门课题。植物源农药来源于植物本身，对环境和人体具有较高的安全性，是未来杀虫剂研究的重点。传统中药本身就是天然植物源，某些中药既可以用于人体治疗疾病，同时还能有效的杀灭植物害虫，受到了国内外学者的高度关注。为了寻找杀蚜虫和抗枯萎病毒最佳植物源药物，本课题组通过对多种单方中药和几种不同复方中药的反复筛选，对比以及农田实验，最终用复方中药提取物取得了理想的杀虫效果。从天然植物源中寻找活性物质替代化学农药，以减少化学农药对人体的伤害和对环境的污染，已成为当前农业研究的方向。
发明内容
针对上述现有技术，本发明提供了一种杀灭植物病虫害的复方中药提取物。本发明是通过以下技术方案实现的一种杀灭植物病虫害的复方中药提取物，是由以下原料药提取制备得到的川穹20 30g，黄柏15 25g，白头翁15 25g，苦参20 30g，蒲公英30 40g ；提取方法为(I)取各原料药，粉碎成粗粉，加蒸馏水1000 1800ml浸泡40 60分钟，振荡、煮沸50 70分钟，过滤得滤液和药渣，药渣加蒸馏水1000 1200ml，煎煮35 45分钟，过滤得滤液和药渣，合并两次滤液，浓缩得到生药量为lg/ml的浓缩液，向浓缩液中添加2%(即100ml浓缩液中加入2g)的吐温80助溶剂，超声波振动，得水提液；(2)上述药渣加3倍(重量倍数)95% (体积百分数)乙醇,磁力搅拌3. 5 4. 5h，恒温振荡仪中37°C振荡2. 5 3. 5h，静置20 28h，过滤，回收乙醇，得醇提液；(3)合并水提液和醇提液，于旋转蒸发仪上减压低温浓缩至含生药为I. 5g/ml,即得复方中药提取物，4 0C冰箱保存备用。本发明的复方中药提取物，经实验证明，对蚜虫、植物枯萎病原菌具有良好的灭杀作用，可以作为化学农药的替代品进行应用。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步的说明。实施例I制备一种杀灭植物病虫害的复方中药提取物配方为川穹25g，黄柏20g,白头翁20g，苦参25g，蒲公英35g ；提取方法为
(I)取各原料药，粉碎成粗粉，加蒸馏水1400ml浸泡50分钟，振荡、煮沸60分钟，过滤得滤液和药渣，药渣加蒸馏水1100ml，煎煮40分钟，过滤得滤液和药渣，合并两次滤液，浓缩得到生药量为lg/ml的浓缩液，向浓缩液中添加2% (即100ml浓缩液中加入2g)的吐温80助溶剂，超声波振动，得水提液；(2)上述药渣加3倍(重量倍数)95% (体积百分数)乙醇,磁力搅拌4h，恒温振荡仪中37°C振荡3h，静置24h，过滤，回收乙醇，得醇提液；(3)合并水提液和醇提液，于旋转 蒸发仪上减压低温浓缩至含生药为I. 5g/ml,即得复方中药提取物，4 0C冰箱保存备用。实施例2制备一种杀灭植物病虫害的复方中药提取物配方为川穹20g，黄柏25g，白头翁15g，苦参30g，蒲公英30g ；提取方法为(I)取各原料药，粉碎成粗粉，加蒸馏水IOOOml浸泡60分钟，振荡、煮沸50分钟，过滤得滤液和药渣，药渣加蒸馏水1000ml，煎煮35分钟，过滤得滤液和药渣，合并两次滤液，浓缩得到生药量为lg/ml的浓缩液，向浓缩液中添加2% (即100ml浓缩液中加入2g)的吐温80助溶剂，超声波振动，得水提液；(2)上述药渣加3倍(重量倍数)95% (体积百分数)乙醇,磁力搅拌3. 5h，恒温振荡仪中37°C振荡2. 5h，静置20h，过滤，回收乙醇，得醇提液；(3)合并水提液和醇提液，于旋转蒸发仪上减压低温浓缩至含生药为I. 5g/ml,即得复方中药提取物，4 0C冰箱保存备用。实施例3制备一种杀灭植物病虫害的复方中药提取物配方为川穹30g，黄柏15g，白头翁25g，苦参20g，蒲公英40g;提取方法为(I)取各原料药，粉碎成粗粉，加蒸馏水1800ml浸泡40分钟，振荡、煮沸70分钟，过滤得滤液和药渣，药渣加蒸馏水1200ml，煎煮45分钟，过滤得滤液和药渣，合并两次滤液，浓缩得到生药量为lg/ml的浓缩液，向浓缩液中添加2% (即100ml浓缩液中加入2g)的吐温80助溶剂，超声波振动，得水提液；(2)上述药渣加3倍(重量倍数)95% (体积百分数)乙醇,磁力搅拌4. 5h，恒温振荡仪中37°C振荡3. 5h，静置28h，过滤，回收乙醇，得醇提液；(3)合并水提液和醇提液，于旋转蒸发仪上减压低温浓缩至含生药为I. 5g/ml,即得复方中药提取物，4 0C冰箱保存备用。实验I复方中药提取物对蚜虫的杀灭作用I 材料I. I试剂95%乙醇，山东诚挚生物技术有限公司生产。苯甲酸(分析纯)，济南鲁健试剂材料有限公司生产。1.2中药川穹、黄柏、白头翁、苦参、蒲公英，购于山东省济南市地道药材公司。I. 3供试虫体选择个体大小和形态一致的无翅蚜虫。1.4实验仪器WG_5磁力加热搅拌器，北京创先科技有限公司生产。RT- II旋转振荡仪，成都医疗器械厂生产。ZH-TI超声波振动器，北京朝阳制药总厂生产。SD-2智能调控摇床，北京尼达实业科技有限公司生产。自动双重蒸馏器，上海黄浦科技有限公司生产。
2 方法2. I复方中药提取物制备按实施例I的方法制备得到复方中药提取物。2. 2样品溶液制备复方中药提取物加无菌水按两倍稀释法稀释成500mg、250mg、125mg、62. 5mg、31. 3mg/ml五个浓度梯度的样品溶液。2. 3杀虫活性测定将带有蚜虫的豆角叶采下，剔除不合要求的个体，每个样品处理供试虫75 100头，浸入不同浓度的样 品溶液，IOs后吸出多余的药液，采用蒸馏水做对照(CK)，置于加盖保湿的培养皿中，于室温下(20-25°C )观察24h-48h，记录活虫头数，以死亡率表示杀虫效果。3.结果实验结果表明，复方中药提取物对蚜虫具有明显的触杀作用，死亡率随浓度增高而显著增加。但即使在低浓度31. 3mg/ml时,对姆虫仍有一定的触杀效果,见表I和表2。表I复方中药提取物24h对蚜虫的杀灭作用
稀释倍数WU I ) 供试虫数(头) 死亡虫数(头) 死亡率(％)
SOOmg857790.58
250mg907684.44
125mg1007373.00
62.5mg956164.21
31. 3mg803240.00
CK7500表2复方中药提取物48h对蚜虫的杀灭作用
稀释倍数(/ml) 供试虫数(头) 死亡虫数(头) 死亡率(％)
SOOmg858397.65
250mg908594.7I7I
125mg1008686.00
62.5mg906572.22
31.3mg804151.25
CK75011.33实验2复方中药提取物对植物枯萎病原菌的影响I 材料I. I试剂95%乙醇、苯甲酸，山东诚挚生物技术有限公司生产。牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂，葡萄糖，济南鲁健试剂材料有限公司生产。I. 2中药川穹、黄柏、白头翁、苦参、蒲公英，购于山东省济南市地道药材公司。I. 3供试菌种西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporumf. sp. niveum),黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporumf. sp. cucumerinum)均由山东农业大学重点实验室提供。1.4实验仪器WG_5磁力加热搅拌器，北京创先科技有限公司生产。RT- II旋振荡仪，成都医疗器械厂生产。ZH-TI超声波振动器，北京朝阳科技医疗器械总公司生产。自动双重蒸馏器，上海黄浦科技有限公司生产。LXD-5培养箱，江苏南京医疗器械公司生产。抑菌圈测量器，上海红星医疗开发责任有限公司生产。2 方法2. I复方中药提取物制备按实施例I的方法制备得到复方中药提取物。2. 2样品溶液制备复方中药提取物加无菌水按两倍稀释法稀释成0. 5g/ml、0. 25g/ml、0. 125g/ml、0. 0625g/ml、0. 0313g/ml 五个浓度梯度的样品溶液。2. 3供试菌液制备取西瓜枯萎病原菌和黄瓜枯萎病原菌斜面活化,置培养箱中35°C培养16h。取活化好的斜面，加入无菌水震荡摇 匀，配制成浓度为107Cfu/ml菌悬液，于20分钟内接种至平板培养基进行抑菌实验。2. 4抗菌活性测定取直径为6_的滤纸圆片，100°C干热灭菌2h,灭菌滤纸片放入药液中浸泡30min，取出晾干。将配制好的菌悬液，注入固体培养基的平皿，用无菌涂布器均匀涂布于培养基表面，无菌镊子夹取含药纸片，放入菌悬液培养基中，轻轻按压，使含药纸片紧贴培养基，置恒温培养箱中30°C培养48h，每个培养器皿放药纸3片，各纸片间距相等，重复3次，取平均值，最后用抑菌圈测量器测定药物纸片的抑菌圈直径。3.结果实验结果表明(表3)，复方中药提取物对西瓜枯萎病原菌和黄瓜枯萎病原菌具有明显的抑制作用，其抑制作用随浓度增高而显著增加。即使在低浓度0.0313g/ml时，对该两种病原菌仍有较好的抑制效果。表3复方中药提取物对枯萎病原菌的影响
药液抑菌圈直径(mm)
病原菌---------------------------
0.5g 0. be 0. 125g 0.0625g 0.03i3g
西瓜枯萎病原菌o 2924IQi
黄瓜枯萎病原菌31L171权利要求
1.一种杀灭植物病虫害的复方中药提取物，其特征在于是由以下原料药提取制备得到的川穹20 30g，黄柏15 25g，白头翁15 25g，苦参20 30g，蒲公英30 40g ；提取方法为 (1)取各原料药，粉碎成粗粉，加蒸馏水1000 1800ml浸泡40 60分钟，振荡、煮沸50 70分钟，过滤得滤液和药渣，药渣加蒸馏水1000 1200ml，煎煮35 45分钟，过滤得滤液和药渣，合并两次滤液，浓缩得到生药量为lg/ml的浓缩液，向浓缩液中添加2%的吐温80助溶剂，超声波振动，得水提液； (2)上述药渣加3倍95%乙醇，磁力搅拌3.5 4. 5h，恒温振荡仪中37°C振荡2. 5 .3.5h，静置20 28h，过滤，回收乙醇，得醇提液； (3)合并水提液和醇提液，于旋转蒸发仪上减压低温浓缩至含生药为I.5g/ml,即得复方中药提取物。
全文摘要
本发明公开了一种杀灭植物病虫害的复方中药提取物，是由以下原料药提取制备得到的川穹20～30g，黄柏15～25g，白头翁15～25g，苦参20～30g，蒲公英30～40g；提取方法为(1)取各原料药，粉碎成粗粉，加蒸馏水浸泡，振荡、煮沸，过滤，药渣加蒸馏水，煎煮，过滤，合并两次滤液，浓缩，加助溶剂，超声波振动，得水提液；(2)药渣加95%乙醇，磁力搅拌，恒温振荡仪中振荡2.5～3.5h，静置，回收乙醇，得醇提液；(3)合并水提液和醇提液，于旋转蒸发仪上减压低温浓缩，即得复方中药提取物。本发明的复方中药提取物，经实验证明，对蚜虫、植物枯萎病原菌具有良好的灭杀作用，可以作为化学农药的替代品进行应用。
文档编号A01N65/36GK102812971SQ20121027979
公开日2012年12月12日 申请日期2012年8月8日 优先权日2012年8月8日
发明者戴争, 张博, 赵玖华, 王升吉, 孙廷林, 任青华, 尚佑芬 申请人:山东省农业科学院植物保护研究所