专利名称：一种盐肤木不定芽高频率植株再生的方法
技术领域：
本发明属于植物生物技术领域，具体涉及一种盐肤木不定芽高频率植株再生的方法；这种方法不受季节、时间的限制，通过此方法获得的植株后代变异小，为盐肤木生态能源林的快速发展及分子遗传改良提供了支持。
背景技术：
盐肤木为漆树科盐肤木属落叶小乔木，是一种广泛分布的重要木本能源植物，也是我国主要经济树种，其种子含油率高达25%，不饱和脂肪酸含量达90%，相当于油茶中的含量，其中亚油酸含量在70. 4%-75. 3%，远高于油茶中的含量，作为高级食用油具有很高的保健价值。同时盐肤木具有很高的药用价值，根、茎、叶均可入药，且寄生在其叶片上的蚜虫虫瘿所形成的五倍子是重要的中药材和工业原料，广泛应用于医药、化工、印染冶金等行 业，是我国重要林特产品，已成为世界各国研究的重点。随着五倍子需求量的不断增大，扩建盐肤木林、提高五倍子产量、质量、培育高产优质的盐肤木品种已成为一种必然趋势。播种移栽育苗是目前盐肤木的主要育苗方法，由于盐肤木属深休眠类型，必须进行低温沙藏和脱蜡处理等，出苗后还需移栽，过程繁琐，费时费力，且播种受时间的限制；再者种子是榨取食用油和提取各种次生代谢物的部位，利用种子发芽不仅浪费、繁殖效率较低，而且对一些优良种质无法进行快速繁殖和推广，远不能满足对种苗的需求及盐肤木产业的快速发展；另外，由于没有一个高效稳定的再生体系，使得盐肤木在分子遗传改良方面的研究处于一片空白。因此，急需开发一种盐肤木高效再生的方法，以满足当前盐肤木种苗快速繁殖和品种改良的需要。迄今为止尚未见国内外有涉及盐肤木离体培养的报道，更未见有通过不定芽诱导的高频率盐肤木植株再生技术的报道。
发明内容
为解决上述问题，本发明运用生物技术手段，提供一种盐肤木不定芽高频率植株再生的方法，从而建立一种高效稳定、快速的盐肤木丛生芽再生方法。为了实现上述目的本发明采用如下技术方案
一种盐肤木不定芽高频率植株再生的方法，其特征在于首先取成熟盐肤木种子经表面消毒后接种到种子萌发培养基中，经过1-2周培养，长出完整的盐肤木植株；在无菌条件下，获得盐肤木子叶、子叶节及下胚轴节段，将它们分别接种于子叶、子叶节和下胚轴不定芽诱导培养基中，25-30d后获得嫩绿色不定芽丛；将嫩绿色不定芽丛移入相应的诱导培养基中进行继代培养，生长15-20d后，长出2-3cm高的完全展开2-4片真叶的健壮幼苗；再将幼苗转接于生根培养基中进行生根培养，25-30d长成根系发达的健壮试管植株，最后进行开盖炼苗后移栽，获得健壮的盐肤木再生苗。所述的表面消毒是指种子用98%的浓硫酸处理30min后用75%的乙醇表面消毒Imin,之后用O. I %的升萊消毒3min,最后用无菌水冲洗5遍,消毒期间不停地摇动。所述的子叶不定芽诱导培养基为MS+0. 5-8. Omg/L 6-BA或O. 1-3. Omg/L TDZ+ O. o-l. Omg/L IBA+30g/L蔗糖+7. 5g/L琼脂；所述的子叶节不定芽诱导培养基为MS+0. 05-3. O mg/L TDZ+0. 0-0. 5mg/L IBA+30g/L 蔗糖 +7. 5g/L 琼脂；所述的下胚轴不定芽诱导培养基MS+0. 25-8. Omg/L 6-BA 或0. 05-3. 0 mg/L TDZ+0. 0-1. Omg/L IBA+30g/L蔗糖+7. 5g/L 琼脂。所述的生根培养基为1/2MS+0.5-2. Omg/L IBA+30g/L 蔗糖 +7. 5g/L 琼脂。本发明有益效果在于
1、盐肤木播种移栽育苗过程繁琐，费时费力且受季节限制，不能满足盐肤木经济林建设的需求，严重制约着再生能源产业和以五倍子为代表的药用产业的发展，目前有关盐肤木丛生芽高效再生的方法尚未见报道，盐肤木丛生芽高效再生技术将为我国主要经济树种盐肤木的快速繁殖和分子遗传改良提供重要的技术支持，以打破有关该研究目前尚属空白的局面；
2、本发明证实进行盐肤木种苗的快繁可以不必通过种子育苗法和根压法，从而节约了时间，解除了时间限制而且繁殖效率大大提高，可以快速为盐肤木经济林的建设提供充足的种苗；同时，这种高效的再生方法为盐肤木的分子改良特别是转基因技术提供了很好的基础。
图I为完整种子苗。图2为子叶、子叶节和下胚轴不定芽丛，其中(a)为子叶不定芽丛，(b)为子叶节不定芽丛，(C)为下胚轴不定芽丛。图3为丛生芽生根及获得的健壮植株苗,其中(a)为丛生芽生根，(b)为健壮植株苗。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进一步详细说明。
实施例一种盐肤木不定芽高频率植株再生的方法具体操作如下
1、种子首先用98%的浓硫酸处理30min后用75%的乙醇表面消毒lmin，之后用O.1%的升汞消毒3min，最后用无菌水冲洗5遍，消毒期间不停的摇动；
2、将消毒好的种子放在萌发培养基上进行生长，经过1-2周左右的培养，形成2片子叶完全展开，3-5cm左右长的下胚轴的完整种子苗(图I);种子苗的子叶、子叶节、下胚轴均作为本发明中诱导不定芽的外植体材料；
3、获得的无菌盐肤木子叶、子叶节及下胚轴接种在不定芽诱导培养基中，30d后即获得嫩绿不定芽丛(图2)，诱导率可达95%。子叶诱导不定芽培养基为MS+0. 5-8. Omg/L 6-BA或 O. 1-3. Omg/L TDZ + O. 0-1. Omg/L IBA+30g/L 蔗糖 +7. 5g/L 琼脂；子叶节不定芽诱导培养基MS+0. 05-3. O mg/L TDZ+0. 0-0. 5mg/L IBA+30g/L 蔗糖 +7. 5g/ 琼脂 L ;下胚轴不定芽诱导培养基MS+0. 25-8. Omg/L 6-BA 或 O. 05-3. Omg/L TDZ+0. 0-1. Omg/L IBA+30g/L 蔗糖+7. 5g/L 琼脂；4、将获得的具有2-3cm高的健壮幼苗转入生根培养基中，在光照下培养生长25-30d，即可获得根系发达的再生植株苗(图3)，生根培养基为1/2MS+0. 5-2. Omg/L IBA+30g/L蔗糖+7. 5g/L琼脂；最后开盖炼苗移栽，获得健壮的再生苗。··
权利要求
1.一种盐肤木不定芽高频率植株再生的方法，其特征在于首先取成熟盐肤木种子经表面消毒后接种到种子萌发培养基中，经过1-2周培养，长出完整的盐肤木植株；在无菌条件下，获得盐肤木子叶、子叶节及下胚轴节段，将它们分别接种于子叶、子叶节和下胚轴不定芽诱导培养基中，25-30d后获得嫩绿色不定芽丛；将嫩绿色不定芽丛移入相应的诱导培养基中进行继代培养，生长15-20d后，长出2-3cm高的完全展开2_4片真叶的健壮幼苗；再将幼苗转接于生根培养基中进行生根培养，25-30d长成根系发达的健壮试管植株，最后进行开盖炼苗后移栽，获得健壮的盐肤木再生苗。
2.根据权利要求I所述的盐肤木不定芽高频率植株再生的方法，其特征在于所述的表面消毒是指种子用98%的浓硫酸处理30min后用75%的乙醇表面消毒lmin，之后用O.I %的升汞消毒3min，最后用无菌水冲洗5遍,消毒期间不停地摇动。
3.根据权利要求I所述的盐肤木不定芽高频率植株再生的方法，其特征在于所述的子叶不定芽诱导培养基为MS+0. 5-8. Omg/L 6-BA 或 O. 1-3. Omg/L TDZ + 0. 0-1. Omg/L IBA+30g/L蔗糖+7. 5g/L琼脂；所述的子叶节不定芽诱导培养基为MS+0. 05-3. O mg/L TDZ+0. 0-0. 5mg/L IBA+30g/L蔗糖+7. 5g/L琼脂；所述的下胚轴不定芽诱导培养基MS+0. 25-8. Omg/L 6-BA 或 O. 05-3. O mg/L TDZ+ O. 0-1. Omg/L IBA+30g/L 蔗糖+7. 5g/L 琼脂。
4.根据权利要求I所述的盐肤木不定芽高频率植株再生的方法，其特征在于所述的生根培养基为l/2MS+0. 5-2. 0mg/L IBA+30g/L 蔗糖 +7. 5g/L 琼脂。
全文摘要
本发明公开一种盐肤木不定芽高频率植株再生的方法，此方法再生效率高，繁殖速度快，平均出芽率较高，最高可达95%；获得的芽苗生根率较好，平均每株产生4-8条左右的健壮根系。本发明证实进行盐肤木种苗的快繁可以不必通过种子育苗法和根压法，从而节约了时间，解除了时间限制而且繁殖效率大大提高，可以快速为盐肤木经济林的建设提供充足的种苗；同时，这种高效的再生方法为盐肤木的分子改良特别是转基因技术提供了很好的基础。
文档编号A01H4/00GK102893864SQ20121034962
公开日2013年1月30日 申请日期2012年9月19日 优先权日2012年9月19日
发明者吴丽芳, 侯金艳, 李明浩, 毛颖基 申请人:中国科学院合肥物质科学研究院