专利名称：红肉猕猴桃组培苗继代增殖培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种植物组培生根培养基，特别涉及红肉猕猴桃组培苗继代增殖培养基。
背景技术：
猕猴桃是一种经济价值较高的木质藤本植物，猕猴桃实肉厚汁多，酸甜适度，营养丰富，以其维生素C特高的营养价值而成为当前水果中之珍品，已经成为当今世界的新兴栽培果树。猕猴桃家族中的特色品种红肉猕猴桃，果实子房鲜红色，果肉黄绿色，果实中大，圆柱形，整齐度高，商品性能好，果皮绿褐包无毛，单果重92. 5克，最大150克。含糖量高，总糖13. 45%，总酸0. 49%，可溶性固形物19. 6% 24%，维生素C含量每100克135. 77毫克以上，具有极高的市场前景和开发利用价值。
猕猴桃属雌雄异株，倍性复杂，雌雄株间花期不遇使种间杂交困难，育种周期长，且有不确定性，给育种工作带来了难度，系统开展其组织培养研究具有重要的意义。通过嫁接繁殖优良苗木的速度有限，而利用种子繁殖的实生苗性状不稳定，雌株不易获得。随着猕猴桃栽培的进一步兴起和引种工作的进行，良种苗需要量急剧增加，而采用常规繁育方法周期长、成活率低，采用组织培养技术快速繁殖猕猴桃成为重要的良种繁育途径。组织培养获得的植株不仅品种性状稳定，而且繁殖速度快，是现在普遍认同的良种繁育方法。中华猕猴桃、美味猕猴桃等许多品种都曾用作组织培养研究的材料进行品种推广。组织培养是否成功，在很大程度上取决于对培养基的选择。目前，植物组织培养普遍使用的培养基为MS培养基。其由大量元素(硝酸钾、硝酸铵、磷酸二氢钾、硫酸镁和氯化钙)、微量元素(碘化钾、硼酸、硫酸锰、硫酸锌、钥酸钠、硫酸铜和氯化钴)、铁盐(乙二胺四乙酸二钠和硫酸亚铁)、有机物(肌醇、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇和烟酸)、激素(6-苄氨基嘌呤、萘乙酸和吲哚乙酸等)、蔗糖和琼脂组成大量元素保证植株生长所需的矿质营养并加速愈伤组织的生长；微量元素、铁盐和有机物给予植株全面的营养保证，确保植株正常生长；激素的调控使植株在离体条件下快速健壮生长；蔗糖为植株生长提供必需的碳源并调节渗透压；琼脂对植株起支持和固定作用。红肉猕猴桃组培工厂化育苗的技术问题还没完全解决，采用MS培养基红肉猕猴桃组培苗继代增殖培养时，常出现以下问题组培生根苗基部愈伤组织膨大，组培苗生长势弱、叶片大、茎矮小、节间伸长生长慢、增殖系数低等现象等。
发明内容
有鉴于此，为克服现有技术的不足，本发明的目的在于对MS培养基进行改进，提供一种适合红肉猕猴桃组培苗的培养基，更进一步地，本发明涉及一种适合红肉猕猴桃组培苗连续继代、快速、高效和/或稳定生长的增殖培养基。为达到此目的，本发明的红肉猕猴桃组培苗继代增殖养基(ACT)，包括以下组分硝酸钟 KNO31500-2400mg/L
硝酸铵 NH4NO31250-2050 mg/L
磷酸二氢钾 KH2PO4300-440 mg/L
磷酸二氢纳 NaH2PO4 . 2H20120-220 mg/L
硫酸镁 MgSO4 . 7H20300-440 mg/L
硝酸钓 Ca (NO3) 2 . 4H20200-400 mg/L
石典化钟 KI0. 63-1. 0 mg/L
硼酸 H3BO34-10 mg/L
硫酸锰 MnSO4 4H2018-26 mg/L
硫酸锌 ZnSO4 . 7H206-10mg/L
钼酸纳 Na2MoO4 2H200. 15-0. 35 mg/L
硫酸铜 CuSO4 . 5H2O0. 015-0. 035 mg/L
氯化钴 CoCl2. 6H200. 015-0. 035 mg/L
乙二胺四乙酸二钠 Na2-EDTA . 2H2030-50mg/L
硫酸亚铁 FeSO4 7H2020-40 mg/L
肌醇150-250 mg/L
甘氨酸1-3 mg/L盐酸疏胺素VB10. 3-0. 7 mg/L
盐酸吡哆醇VB60. 3-0. 7 mg/L
烟酸 VB5或 VPP0. 3-0. 7 mg/L
6-苄氨基嘌呤6-BA1-2 mg/L
吲咮乙酸 IBA0.1-0. 4 mg/L
庶糖1000G -50000mg/L
卡拉股2000 -8000mg/L本发明优选的培养基包括如下组分硝酸钾 KNO31900 mg/L
硝酸铵 NH4NO31650 mg/L
磷酸二氢钾 KH2PO4370 mg/L
磷酸二氢钠 NaH2PO4 . 2H20170 mg/L
硫酸镁 MgSO4 . 7H2O370 mg/L
硝酸钥 Ca (NO3) 2 4H2O300 mg/L
碘化钾 KI0. 83 mg/L硼酸 H3BO36. 2 mg/L
硫酸锰 MnSO4 . 4H2022. 3 mg/L
硫酸锌 ZnSO4 . 7H208. 6 mg/L
相酸纳 Na2MoO4 . 2H200. 25 mg/L
硫酸铜 CuSO4 5H2O0. 025 mg/L
氯化钴 CoCl2. 6H200. 025 mg/L
乙二胺四乙酸二钠 Na2-EDTA . 2H2037. 3 mg/L
硫酸亚铁 FeSO4 7H2027. 8 mg/L
肌醇200 mg/L
甘氨酸2 mg/L盐酸疏胺素VB10. 5 mg/L
盐酸p比口多醇VB60. 5 mg/L
烟酸 VB5 或 VPP0. 5 mg/L
6-辛氣基票吟6-BAI. 5 mg/L
吲哚乙酸IBA0.3 mg/L
蔗糖30000 mg/L
卡拉胶6000 mg/L在本发明中，除非有特殊说明，当所述组分中含有结晶水时，所述的质量体积浓度是指带有结晶水的质量体积浓度，所述的组分的中文名称也是指带有结晶水的组分名称。
本发明的有益效果在于本发明的红肉猕猴桃继代增殖培养基，在MS培养基的基础上，通过调整大量元素的种类和浓度和优化激素调控琼脂浓度等，为红肉猕猴桃组培苗继代增殖提供了均衡合理的营养需求，保证了其快速、高效、健壮生长，有效的促进了节间伸长，提高了增殖系数。
为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明作进一步的详细描述，其中图I为以ACT培养基培养的红肉猕猴桃组培苗照片。
具体实施例方式为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明的优选实施例进行详细的描述。 本发明以红肉猕猴桃优良单株离体芽器官诱导培养扩繁而来的组培继代苗为试验材料，在MS培养基的基础上，添加了 NaH2PO4 ·2Η20和Ca(NO3)2 ·4Η20，去掉了 CaC12 ·2Η20，调整了肌醇和盐酸硫胺素的浓度，并优化激素调控和琼脂浓度等。I、红肉猕猴桃组培苗继代增殖基本培养基优化(I)材料与方法将红肉猕猴桃优良单株离体芽器官诱导培养扩繁而来的组培继代苗转接到不同的培养基配方中进行增殖培养。增殖培养基分别以Β5、MS和ACT为基本培养基，均包含配比为6-ΒΑ1. 0mg/L+NAA0. 3mg/L的激素，培养温度控制在25±1°C，光照时间12h/d，光照强度2000LuX-3000LuX。每个处理50个芽，25d后统计增殖后的苗高、总芽数、增殖系数、愈伤及芽苗的生长情况。(2)结果与分析植物的基本培养基是植物组培营养物质供给的基础。由表3可知，试验中所比较的3种基本培养基对红肉猕猴桃组培苗继代增殖的影响明显差异，其中以B5和MS为培养基的所有处理，继代苗生势弱于ACT的处理。以ACT为培养基的处理，在苗高、总芽数/株和增殖系数都优于B5和MS处理。综合考虑，ACT培养基更适红肉猕猴桃继代增殖。表3不同激素浓度配比对灰毡毛忍冬‘渝蕾I号’芽苗继代的影响
权利要求
1.红肉猕猴桃组培苗继代增殖培养基，其特征在于包含以下浓度的组分硝酸钾 KNO31500-2400mg/L硝酸铵 NH4NO31250-2050 mg/L磷酸二氢钾 KH2PO4300-440 mg/L鱗酸二氢钠 NaH2PO4 · 2H20120-220 mg/L硫酸镁 MgSO4 . 7H20300-440 mg/L硝酸钓 Ca (NO3) 2 · 4H20200-400 mg/L破化钾 KIO. 63-1. O mg/L硼酸 H3BO34-10 mg/L疏酸猛 MnSO4 . 4H2O18-26 mg/L硫酸锌 ZnSO4 · 7H2O6-10mg/L钼酸納 Na2MoO4 . 2H20O. 15-0. 35 mg/L硫酸铜 CuSO4 . 5H200. 015-0. 035 mg/L氯化钴 CoCl2. 6H200. 015-0. 035 mg/L乙二胺四乙酸二钠 Na2-EDTA · 2H2030-50mg/L硫酸亚铁 FeSO4 · 7H2020-40 mg/L肌醇150-250 mg/L甘氨酸1-3 mg/L盐酸疏胺素VB10. 3-0. 7 mg/L盐酸吡哆醇VB6O. 3-0. 7 mg/L烟酸 VB5* VPPO. 3-0. 7 mg/L6-千氣基嗓吟6-BA1-2 mg/L吲咮乙酸 IBAO. 1-0. 4 mg/L蔗糖10000 -50000mg/L卡拉胶2000 -8000mg/L
2.根据权利要求I所述的红肉猕猴桃组培苗增殖培养基，其特征在于所述NaH2PO4 · 2H20 的浓度为 170mg/L，Ca(NO3)2· 4H20 的浓度为 300mg/L，肌醇的浓度为 200mg/L,盐酸硫胺素的浓度为O. 5mg/L, 6-BA浓度I. 5mg/L, IBA浓度O. 1-0. 3mg/L,优选为O. 3mg/L0
3.根据权利要求I所述的红肉猕猴桃组培苗增殖培养基，其特征在于包含以下浓度的组分 硝酸钾 KNO31900 mg/L 硝酸铵 NH4NO31650 mg/L 鱗酸二氢钾 KH2PO4370 mg/L 鱗酸二氢钠 NaH2PO4 . 2H20170 mg/L硫酸镁 MgSO4 · 7H20370 mg/L 硝酸4弓 Ca (NO3) 2 · 4H20300 mg/L 碘化钾 KIO. 83 mg/L 硼酸 H3BO36. 2 mg/L疏酸锰 MnSO4 · 4H2022. 3 mg/L硫酸锌 ZnSO4 · 7H208. 6 mg/L 相酸钠 Na2MoO4 . 2H200. 25 mg/L 硫酸铜 CuSO4 · 5H2O0. 025 mg/L氯化钴 CoCl2. 6H200. 025 mg/L 乙二胺四乙酸二钠Na厂EDTA . 2H2037. 3 mg/L 硫酸亚铁 FeSO4 · 7H2027. 8 mg/L 肌醇200 mg/L 甘氨酸2 mg/L 盐酸疏胺素VB10. 5 mg/L盐酸p比哆醇VB6O. 5 mg/L 烟酸 VB5 或 VPPO. 5 mg/L6-苄氨基嘌呤6-BAI. 5 mg/L吲咮乙酸IBAO. 3 mg/L蔗糖30000 mg/L卡拉胶6000 mg/L
4.一种红肉猕猴桃组培苗继代增殖方法，其特征在于以权利要求1-3任意一项所述的培养基为培养基。
5.根据权利要求4所述的增殖方法，其特征在于所述的组培苗以红肉猕猴桃优良单株离体芽器官诱导培养扩繁而来的组培继代苗进行增值培养。
全文摘要
本发明公开了一种红肉猕猴桃组培苗继代增殖培养基，在MS培养基的基础上，通过调整大量元素的种类和浓度和优化激素调控琼脂浓度等，为红肉猕猴桃组培苗继代增殖提供了均衡合理的营养需求，保证了其快速、高效、健壮生长，有效的促进了节间伸长，提高了增殖系数。
文档编号A01H4/00GK102823498SQ20121034962
公开日2012年12月19日 申请日期2012年9月20日 优先权日2012年9月20日
发明者唐建民, 刘奕清, 陈泽雄, 廖林正, 黄科, 黄登艳, 袁海英 申请人:重庆文理学院