一种增菌培养基的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医学检验领域，具体涉及一种增菌培养基。
【背景技术】
[0002] 奴卡菌病（Norcardosis)是由奴卡氏菌属细菌引起的一种人兽共患的慢性病，特 征为组织化脓、坏死或形成脓肿。本病广泛分布于世界各地，以肺奴卡菌病作为常见，奴卡 菌通过呼吸道引起人的原发性、化脓性肺部感染，可出现肺结核的症状。肺部病灶可转移到 皮下组织，形成脓肿、溃疡和多发性瘘管，也可扩散到其他器官。临床症状上与肺结核、肺曲 菌病、肺韦格氏肉芽肿相似，很容易误诊。
[0003] 该病的临床诊断多依靠细菌培养，具体方法为：用普通血琼脂培养板（BAP)培养3 天后有可见菌落，7~10天后菌落凸起，气生菌丝形成后，表面呈绒毛状。现有培养方式 的存在以下问题：①由于奴卡氏菌属于苛养菌，即对生长环境、营养要求较苛刻的细菌，在 普通环境中不能或难以生长，因此可靠诊断需要7天才能进行完成，经常延误了临床对奴 卡菌病的准确诊断和及时采取有效的治疗措施，而造成奴卡菌病的病死率增高；②在标本 采集和运送过程中，由于杂菌生长，奴卡菌受抑制，而导致奴卡菌分离培养阳性率偏低的对 整个奴卡菌病的诊断影响巨大。因此，确保转运过程中充分增菌和防止杂菌污染很重要。
【发明内容】
[0004] 本发明的技术任务是针对以上现有技术的不足，提供一种能够确保奴卡菌阳性检 出率的足分支菌病诊断用培养基。
[0005] 本发明解决其技术问题的技术方案是：一种增菌培养基，其特征在，每升中含有： 牛肝粉10. 〇g ;麦芽浸粉2. 0g ;酵母浸出粉5. 0g ;氯化钠5. 0g ;琼脂15. 0g ;枸橼酸铁铵 〇. lg ;乳酸妈〇. 〇5g ;D-环丝氨酸0. 05g ;毛子草酮0. 001g ;维生素&0. lg ;无菌脱纤维绵 羊血100ml;;蒸馏水加至1000ml。
[0006] 上述培养基的制备方法为：称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；琼脂； 枸橼酸铁铵；乳酸钙；毛子草酮混匀，蒸馏水溶解，210°C，灭菌15min，冷却到45°C，加入灭 菌D-环丝氨酸；灭菌维生素k 1;灭菌络蛋白磷酸肽；无菌脱纤维绵羊血混匀，灭菌蒸馏水定 容到1000ml后分装。
[0007]其中：所述的牛肝粉、麦芽浸粉提供碳源、氮源，酵母浸出粉富含蛋白质、氨基酸、 多肽、核苷酸、维生素、生长因子、微量元素等营养成分，为微生物提供均衡营养，这些物质 对促进奴卡菌的繁殖和生长都是很重要的因素；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂为培养 基的凝固剂；枸橼酸铁铵为营养剂，为奴卡菌繁殖生长提供必需的铁元素，且该浓度下，枸 橼酸铁铵还具有缓冲剂作用；乳酸钙除了做营养增强剂外，还可以抑制革兰氏阳性球菌生 长，；D-环丝氨酸提供营养的同时，该浓度下，还抑制革兰氏阴性菌的生长；毛子草酮（2-Et hoxymethylene-3, 5-dihydroxy-y-pyrone)，实验室研宄表明毛子草酮可以抑制葡萄球菌、 链球菌、变形杆菌、肠炎杆菌、多种真菌等杂菌的生长，但该浓度下由于对奴卡氏菌属无抗 菌抑菌作用，因此提高了奴卡菌的分离率。通过实验将同一奴卡菌接种到2个BAP培养基 上，其中一个BAP培养基添加0. 1%灭菌维生素匕于37°C下培养，48小时后观察菌株，发现 添加维生素匕的BAP培养基有小的奴卡菌菌落，没有添加维生素k :的BAP培养基未发现奴 卡菌菌落，维生素h促进细胞生长、分化，是奴卡菌的生长促进因子，有助于缩短培养时间； 无菌脱纤维绵羊血提供能量环境；酪蛋白磷酸肽为激活剂，可以促进奴卡菌对铁元素、钙元 素的摄取；天冬酰胺为营养强化剂，促进奴卡菌对氨基酸的摄取；生地黄为玄参科植物生 地黄的新鲜或干燥块根，现代医学研宄表明，生地黄根茎中含有20多种苷类；8种糖类；20 余种氨基酸和20余种无机元素，生地黄水提液是良好的营养强化剂，并且有抑制金黄色葡 萄球菌生长的作用。
[0008] 本发明与现有技术相比较，具有检出可靠、奴卡菌分离率高的特点。
【具体实施方式】
[0009] 以下结合实际情况，对本发明的【具体实施方式】作详细说明。
[0010] 实施例1，配方为：牛肝粉l〇. 〇g ;麦芽浸粉2. 0g ;酵母浸出粉5. 0g ;氯化钠5. 0g ; 琼脂15. 0g ;枸橼酸铁铵0. lg ;乳酸钙0. 05g ;D-环丝氨酸0. 05g ;毛子草酮0.0 Olg ;维生 素心O.lg;无菌脱纤维绵羊血100ml ;;蒸馏水加至1000ml。制备方法称取牛肝粉；麦芽 浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；琼脂；枸橼酸铁铵；乳酸钙；毛子草酮混匀蒸馏水溶解，210°C， 灭菌15min，冷却到45°C，加入灭菌灭菌D-环丝氨酸；灭菌维生素K 1;无菌脱纤维绵羊血混 匀，灭菌蒸馏水定容到l〇〇〇ml后分装。
[0011] 实施例2,配方为：牛肝粉10. 0g;麦芽浸粉5. 0g;酵母浸出粉5. 0g;氯化钠5. 0g;琼脂15. 0g ;枸橼酸铁铵0. 3g ;乳酸钙0. 03g ;D-环丝氨酸0. 03g ;毛子草酮0. 003g ;维生素 I 0. 01g ;络蛋白磷酸肽0. lg ;无菌脱纤维绵羊血80ml ;;蒸馏水加至1000ml。制备方法 称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；琼脂；枸橼酸铁铵；乳酸钙；毛子草酮混匀， 蒸馏水溶解，210°C，灭菌15min，冷却到45°C，加入灭菌灭菌D-环丝氨酸；灭菌维生素k 1;灭 菌络蛋白磷酸肽；无菌脱纤维绵羊血混匀，灭菌蒸馏水定容到l〇〇〇ml后分装。
[0012]实施例3,配方为：牛肝粉5. 0g;麦芽浸粉3. 0g;酵母浸出粉10. 0g;氯化钠5. 0g; 琼脂20. 0g ;枸橼酸铁铵0. 2g ;乳酸钙0. 03g ;D-环丝氨酸0. 01g ;毛子草酮0. 001g ;维生 素I 0. 03g ;络蛋白磷酸肽0. 3g ;无菌脱纤维绵羊血90ml ;浓度200g / L的生地黄水提液 250ml;;蒸馏水加至1000ml。制备方法制备方法：（1)取50g生地黄加水煮沸45min，过 滤，取滤液，根据滤液体积，采取浓缩或者加水调整体积到浓度为200g/L，得生地黄水提液 250ml;(2)称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；琼脂；枸橼酸铁铵；乳酸钙；毛子 草酮混匀溶于步骤（1)所得的生地黄提取液中混匀，210°C灭菌15min，冷却到45°C，加入灭 菌灭菌D-环丝氨酸；灭菌络蛋白磷酸肽；灭菌维生素K 1;无菌脱纤维绵羊血混匀，灭菌蒸馏 水定容到l〇〇〇ml后分装。
[0013] 实施例4,配方为：牛肝粉8. 0g ;麦芽浸粉3. 0g ;酵母浸出粉8. 0g ;氯化钠5. 0g ; 琼脂20. 0g ;枸橼酸铁铵0. lg ;乳酸钙0. 01g ;D-环丝氨酸0. 05g ;毛子草酮0. 005g ;维生素 & 0. 05g ;络蛋白磷酸肽0. 3g ;天冬酰胺0. 01g ;无菌脱纤维绵羊血100ml ;浓度200g / L的 生地黄水提液300ml ;;蒸馏水加至1000ml。制备方法：（1)取60g生地黄加水煮沸60min， 过滤，取滤液，根据滤液体积，采取浓缩或者加水调整体积到浓度为200g/L，得生地黄水提 液300ml ; (2)称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；琼脂；枸橼酸铁铵；乳酸钙；毛 子草酮；天冬酰胺混匀溶于步骤（1)所得的生地黄提取液中混匀，210°C灭菌15min，冷却到 45°C，加入灭菌灭菌D-环丝氨酸；灭菌络蛋白磷酸肽；灭菌维生素K 1;无菌脱纤维绵羊血混 匀，灭菌蒸馏水定容到l〇〇〇ml后分装。所述生地黄水提液浓度200g/L指的是每升含有生 药 200g。
[0014] 临床试验资料如下。
[0015] 设定对照组和实验组，所述的对照组使用普通血琼脂培养板（BAP)培养基，其配 方为：牛肉粉5g / L、蛋白胨12g / L、琼脂15g / L、氯化钠5g / L、无菌脱纤维绵羊血 100ml / L。所述的实验组A、B、C、D分别对应实施例1方案组；实施例2方案组、实施例3 方案组、实施例4方案组。
[0016] 临床采集29例高度疑似奴卡菌病患者样品(痰、支气管抽出物、脓液等)，每一份样 本分别加入五个分组中，且每个分组中含有两个相同的培养基，分别标记为"转运"和"未转 运"。"转运"的处理方案为：室温（25°C)情况下离开检验科送检车辆内模拟运送环境，24h 后回到检验科进行细菌培养（35°C); "未转运"的处理方案为样品采集后立即进行细菌培养 (35°C )。所有样本的细菌培养环境参数一致，均在培养后4d、7d各挑取细小菌落进行菌属 鉴定。细菌培养阳性检出标准依从《临床微生物学诊断与图解》。
[0017] 五组细菌培养后4d、7d后阳性检出结果见下表，
【主权项】
1. 一种增菌培养基，其特征在于，每升中含有：牛肝粉10.Og;麦芽浸粉2.Og;酵母浸 出粉5.Og;氯化钠5.Og;琼脂15.Og;枸橼酸铁铵0.Ig;乳酸钙0. 05g;D-环丝氨酸0. 05g; 毛子草酮〇.OOlg;维生素K1 0.Ig;无菌脱纤维绵羊血100mL;;蒸馏水加至1000ml。
【专利摘要】本发明公开了一种增菌培养基。属于检验领域，其特征在于，配方含有牛肝粉、麦芽浸粉、酵母浸出粉、氯化钠、琼脂、枸橼酸铁铵、乳酸钙、D-环丝氨酸、毛子草酮、维生素K1、无菌脱纤维绵羊血、蒸馏水。本发明与现有技术相比较，具有转运增菌的作用。
【IPC分类】C12N1-20, C12R1-01
【公开号】CN104845917
【申请号】CN201510298137
【发明人】钟学文
【申请人】钟学文
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2015年6月4日