专利名称：用于沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基及制备方法
技术领域：
本发明属于致病菌的前增菌培养基，特别是涉及一种同时对沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基及其制备方法。
背景技术：
全球范围内，每年由沙门氏菌和志贺氏菌感染带来的胃肠道疾病致死人数高达百万，给各国均带来了较大的负担。金黄色葡萄球菌不仅能够污染食品，还是临床病人感染的主要源头之一。我国的调查显示，沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌都位居感染率最高的食源性致病菌之列，其中沙门氏菌在整个感染病例中所占比例最大。依赖于基因的检测方法现在已经广泛应用，成为国际上检测食源性致病菌的主要方法之一。PCR技术发展迅速，荧光定量PCR也已经成熟，而多重荧光定量PCR的应用也为 同时检测多种细菌指明了方向。这种方法效率高，准确性高，通量高，但一般都需要一个前增菌过程。当前的前增菌培养基已有很多，沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌均有各自的选择性前增菌培养基，能够特异的生长。营养肉汤等通用增菌培养基能够同时扩增多种细菌，但是缺乏抑制剂去选择目标菌，不合适于高背景微生物的原材料及未经处理的样品，因此研制一种能够能同时对沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌进行增菌同时能够抑制其他非目标菌的培养基成为当前的必要。
发明内容
本发明旨在提供可以同时支持沙门氏菌，志贺氏菌及金黄色葡萄球菌三种食源性疾病的同时生长，且抑制其他非目标菌的培养基，实现将常规检测方法中的前增菌步骤和选择性增菌步骤合二为一，用于在一个检测平台上检测多个致病菌。本发明目的通过如下技术方案实现用于沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基，以质量份数计，其原料配方组成为胰蛋白胨13-16份、大豆蛋白胨4-7份、磷酸二氢钠2-3份、葡萄糖2-3份、蒸馏水1000份、牛胆盐O. 07-0. 13份、氯化钠25-40份、氯化锂O. 4-1份、甘露醇I. 5-3. 5份和亚碲酸钾O. 0002-0. 0004份，pH值为7. 1-7. 3。为进一步实现本发明目的，以质量份数计，所述培养基的的配方优选为胰蛋白胨15份、大豆蛋白胨5份、磷酸二氢钠2. 5份、葡萄糖2. 5份、蒸馏水1000份、氯化钠35. O份、氯化锂O. 5份、牛胆盐O. I份、甘露醇2份，亚碲酸钾O. 0003份，pH值7. 2。用于沙门氏菌、志贺氏菌及金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基的制备方法，包括如下步骤(I)按照原料配方，将胰蛋白胨、蛋白胨、葡萄糖、磷酸二氢钾、甘露醇、氯化锂、氯化钠、牛胆盐加入到蒸馏水中，加热至溶解,冷却至室温后,用lmol/L的NaOH进行酸度矫正pH 值至 I. 1-7. 3 ；
(2)混匀，121-125°c灭菌 15_18min ；(3)按原料配方，称取亚碲酸钾加入到已灭菌的蒸馏水中，得到亚碲酸钾溶液；控制蒸馏水的总量为1000质量份；(4)在无菌条件下，加入步骤3中配制的亚碲酸钾溶液；分装存于4_6°C下备用。所述步骤(I)的蒸馏水优选为985-990份。所述步骤(3)的已灭菌的蒸馏水优选为10-15份。本发明通过选择合适的组分，并进行合理混配，经加热、溶解、混合、高温灭菌等步骤而获得一种使沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌及金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基。本发明培养基含有抑制剂氯化锂、牛胆盐和亚碲酸钾。其中氯化锂沙门氏菌和金黄色葡萄球菌没有明显的没有抑制作用，对志贺氏菌有一定抑制作用，但能够抑制绿脓杆菌、小肠耶 尔森氏菌等食源性致病菌。牛胆盐能够抑制大部分的革兰氏阳性菌，但较低浓度时金黄色葡萄球菌也能够生长。沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌都具有亚碲酸钾抗性，添加有压低酸盐的培养基可以作为志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的选择培养基。亚碲酸钾对0157、普通肠杆菌、霍乱弧菌和白喉杆菌的抑制作用使得其成为此共增菌培养基的成分之一。志贺氏菌和沙门氏菌对氯化钠有一定的耐受作用，金黄色葡萄球菌本身就耐盐，故选择添加较高浓度的氯化钠。磷酸二氢钾用于调节pH。胰蛋白胨、蛋白胨、葡萄糖、是培养基中基本的营养和支持成分。选择甘露醇作为促进剂。相比较沙门氏菌和金黄色葡萄球菌，甘露醇对志贺氏菌的促进情况更为明显，能够一定程度上减弱氯化锂对志贺氏菌的抑制作用。标本接种后，在37°C培养，增菌24小时后，划线到三种目标菌各自的选择性培养基上，分离鉴别。相对于现有技术，本发明具有以下优点本培养基可融合致病菌的前增菌及选择性增菌两个步骤，缩短增菌时间至18小时；使得三种常见的致病菌同时增菌而其他的致病微生物生长受到一定的抑制；本发明的培养物可以直接做目标菌的分离培养及生物鉴定实验，也可以直接用于多重PCR检测，作出诊断报告。
具体实施例方式为更好理解本发明，下面结合实施例对本发明做进一步地详细说明，但是本发明要求保护的范围并不局限于实施例表示的范围。实施例I称取胰蛋白胨15g、大豆蛋白胨5g、磷酸二氢钠2. 5g、葡萄糖2. 5g、氯化钠35g、氯化锂O. 5g、牛胆盐O. lg、甘露醇2g，蒸馏水加至990ml，加热溶解，冷却到室温后用lmol/L的NaOH进行酸度矫正，调整pH值至7. 2 ;混匀，121°C灭菌15min ;称取O. 3mg亚碲酸钾加入到IOmL已灭菌的蒸馏水中，配成亚碲酸钾溶液。在无菌条件下，加入亚碲酸钾溶液IOmL ；分装存于4°C下备用，制得用于沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基。将菌浓度都为109cfu/mL的沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌及杂菌(具体见表I的十种)培养液分别稀释IO5倍，然后分别取O. OlmL接入IOmL制备好的用于沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基，使培养基中菌浓度为10cfu/mL，37°C培养18h。用分光光度计在600nm下测定其OD值。以营养肉汤为空白对照。结果见表I。
表I目标菌及杂菌单独在培养基中的生长情况
权利要求
1.用于沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基，其特征在于，以质量份数计，其原料配方组成为胰蛋白胨13-16份、大豆蛋白胨4-7份、磷酸二氢钠2-3份、葡萄糖2-3份、蒸馏水1000份、牛胆盐O. 07-0. 13份、氯化钠25-40份、氯化锂O. 4-1份、甘露醇 I. 5-3. 5 份和亚碲酸钾 O. 0002-0. 0004 份，pH 值为 7. 1-7. 3。
2.根据权利要求I所述的培养基，其特征在于以质量份数计，所述培养基的的配方为胰蛋白胨15份、大豆蛋白胨5份、磷酸二氢钠2. 5份、葡萄糖2. 5份、蒸馏水1000份、氯化钠35. O份、氯化锂O. 5份、牛胆盐O. I份、甘露醇2份，亚碲酸钾O. 0003份，pH值7. 2。
3.权利要求I所述用于沙门氏菌、志贺氏菌及金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基的制备方法，其特征在于包括如下步骤 (1)按照原料配方，将胰蛋白胨、蛋白胨、葡萄糖、磷酸二氢钾、甘露醇、氯化锂、氯化钠、牛胆盐加入到蒸馏水中，加热至溶解，冷却至室温后，用lmol/L的NaOH进行酸度矫正pH值至 7. 1-7. 3 ； (2)混匀，121-125°C灭菌15-18min ； (3)按原料配方，称取亚碲酸钾加入到已灭菌的蒸馏水中，得到亚碲酸钾溶液；控制蒸馏水的总量为1000质量份； (4)在无菌条件下，加入步骤3中配制的亚碲酸钾溶液；分装存于4-6°C下备用。
4.根据权利要求3所述的用于沙门氏菌、志贺氏菌及金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基的制备方法，其特征在于所述步骤(I)的蒸馏水为985-990份。
5.根据权利要求3所述的用于沙门氏菌、志贺氏菌及金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基的制备方法，其特征在于所述步骤(3)的已灭菌的蒸馏水为10-15份。
全文摘要
本发明公开了用于沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基及制备方法，该培养基包括胰蛋白胨13-16份、大豆蛋白胨4-7份、磷酸二氢钠2-3份、葡萄糖2-3份、蒸馏水1000份、牛胆盐0.07-0.13份、氯化钠25-40份、氯化锂0.4-1份、甘露醇1.5-3.5份、亚碲酸钾0.0002-0.0004份，pH值为7.1-7.3。本培养基在使得三种目标致病菌同时增菌的同时，抑制其它的致病微生物生长，可直接做目标菌的分离培养及生物鉴定实验，也可以直接用于多重PCR等基于一个检测平台的多个致病菌的检测技术中，做出诊断报告。
文档编号C12R1/01GK102827795SQ20121031346
公开日2012年12月19日 申请日期2012年8月29日 优先权日2012年8月29日
发明者余以刚, 肖性龙, 王永志, 吴晖 申请人:华南理工大学