专利名称：一种蛹虫草及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明属于生物工程领域，具体而言，本发明涉及一种蛹虫草及其制备方法和用途。
背景技术：
蛹虫草属于真菌门(Eumycota)子囊菌纲(Ascomycetes)肉座菌目(Hypocreales)麦角菌科(Clavicipitaceae)虫草属(Cordyceps),学名为 Cordyceps miltaris (L) Link,是一种野生资源稀少的名贵药用真菌。蛹虫草菌粉和蛹虫草菌粉胶囊是两个一类国家中药新药，均于2003年4月获得正式生产批件(2003B00975、2003B00976)，产品生产批准文号为国药准字Z20030034、国药准字Z20030035。·
目前，在蛹虫草培育和菌粉应用方面存在原材料(茧种和菌种)的选择和蛹虫草菌粉加工等方面的问题。其中，工业化培育蛹虫草有两种原料最为重要，缺一不可，一是寄主昆虫，二是蛹虫草菌种。中国专利申请87106987. 3和中国专利申请00130381. 3公开了蚕蛹虫草的人工培育方法及蚕蛹虫草工业化生产方法。但是，中国专利申请00130381. 3仅注重蛹虫草菌种的选育，没有注重对寄主昆虫蚕蛹的选育，产品寄生率仅为61. 18%;所用的菌种在产前只进行了菌种的激活培养，导致成品率低；用罐头瓶进行培养蚕蛹虫草，工作效率低，不利于产业化生产；在冷藏室内存放干燥的蛹虫草,成本高。此外,现有的蛹虫草产品中的菌粉目数为6(Γ80目，影响了产品的质量和吸收性。在生产和应用方面的这些问题急需解决，但迄今为止，尚未见有相关报道。
发明内容
针对上述技术缺陷，本发明的目的之一是提供一种蛹虫草的制备方法。本发明的另一个目的是提供采用该制备方法制得的蛹虫草。本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的一种蛹虫草的制备方法，该制备方法包括下述步骤(I)将蛹虫草菌液注入柞蚕生物茧的蚕蛹，16 18°C下培养7 10天获得僵蛹；(2)僵蛹经无光照培养5 7天，蛹体表面形成子实体原基；(3)僵蚕再经光照培养1(Γ15天，光照强度为80(Γ1000勒克斯；之后白天自然光光照培养，晚上光照培养、光照强度为80(Γ1000勒克斯，直至子实体长出子囊壳。 就上述制备方法而言，在所述步骤(I)中，优选地，所述柞蚕生物茧为以卵量母种获得的柞蚕生物茧。所述卵量母种是指直接用于继代繁育柞蚕的柞蚕种。柞蚕生物茧是指按一定程序繁育，并以其活体为原料用于医药保健、食品、化工等生产行业的优质柞蚕茧(除去丝茧)。优选地，所述柞蚕生物茧的蚕蛹出蛹率为85%以上，健蛹率为94、8%。优选地，所述柞蚕生物茧的蚕蛹在注入蛹虫草菌液前经过消毒。就上述制备方法而言，在所述步骤(I)中，优选地，所述蛹虫草菌液是由以下方法制备的
a.将冻干保藏的野生蛹虫草菌种接种至脱脂牛乳，25°C下培养7天后分别接种至斜面复壮培养基和液体复壮培养基，25°C下培养7天，其中按重量份数计，所述斜面复壮培养基的组成为蚕蛹粉10份、蛋白胨10份、全脂奶粉10份、生物素O. 01份、琼脂20份、水1000份、pH 5. 8 ;所述液体复壮培养基的组成为蚕蛹粉10份、蛋白胨10份、全脂奶粉10份、生物素O. 01份、水1000份、pH 5. 8 ；b.将经液体复壮培养基培养得到的蛹虫草菌液注入柞蚕生物茧的蚕蛹，16 18°C下培养10天后，22°C下光照培养30天，确认能否长出子实体；c.将能够长出子实体的野生蛹虫草菌种从斜面复壮培养基接种至扩增菌种液体培养基，25°C下培养24小时后振荡培养72小时；其中，按重量份数计，所述扩增菌种液体培养基的组成为蚕蛹粉8份、蔗糖8份、奶粉10份、维生素液20份、磷酸二氢钾I. 5份、磷酸二氢钠I. O份、水1000份、pH 5. O ;按重量份数计,所述维生素液的组成为盐酸硫胺素O. I份，核黄素O. 025份，吡哆醇O. 025份，泛酸钙O. I份，对氨基苯甲酸O. 025份， 氯化胆碱O. I份，肌醇O. I份，叶酸O. 0025份，生物素O. 001份，以及蒸馏水1000份。就上述制备方法而言，在所述步骤(I)中，优选地，所述蚕蛹置于培养盘中培养；优选地，所述蚕蛹置于培养盘中培养且培养时相互不重叠。就上述制备方法而言，在所述步骤(2)中，优选地，所述僵蚕在无光照培养前经过消毒；更优选地，所述僵蚕在无光照培养前经过消毒并被覆盖塑料薄膜。优选地，上述制备方法还包括以下步骤(4)干燥得到的蛹虫草。在所述步骤(4)中，更优选地，所述干燥条件为在频率2450±50MH的微波中、5(T60°C下干燥至含水量为5 8%。优选地，上述制备方法还包括以下步骤(5)粉碎得到的蛹虫草。在所述步骤(5)中，更优选地，所述粉碎为先将蛹虫草粗粉碎至2(Γ80目，再经球磨粉碎至150-300目。更优选地，所述球磨粉碎的条件为粉碎时间为3小时，球磨转速为600转/min，罐体温度为15°C，球体温度为20°C。本发明还提供了根据上述制备方法制备的蛹虫草。另一方面，本发明还提供了根据上述制备方法制备的蛹虫草在制备药品、保健品、食品或化妆品中的用途。本发明选择柞蚕生物茧和经过复壮的蛹虫草菌种培育出成品率高(从61. 18%提高至90%以上)和质量优质的蛹虫草，并通过采用超微粉碎技术，使产品的分散性、溶解性、吸收性得到根本的改善，大大提高了原料的利用率，以及产品的生物活性、营养成份含量和吸收性，从而提高了其抗疲劳和抗氧化功能。本发明得到的产品的内在质量得到充分改善，从而更具有营养，易于消化吸收，原有的自然风味也得以进一步保留。与已有的蛹虫草菌粉相比，本发明的蛹虫草菌粉主要具有以下特征(I)淡淡的香味；(2)颜色较深，呈“黄褐色”；(3)手感细腻、光滑、易吸潮，抹在手背皮肤上用指搓即可被皮肤吸收。本发明的制备方法包括获得生物茧种、储存、取蛹消毒、蛹虫草菌种复壮、出草试验、扩制、接种蚕蛹、上盘培养、上架培养、下架干制、超微粉碎、包装储存等，详见附图
I。与现有技术相比，本发明对茧种进行了选育，对蛹虫草菌种进行复壮和出草试验，选用出草率达100%的菌种进行生产，培育出的蛹虫草成品率达到90%以上，比采用其他大茧或种茧高出2(Γ30%;本发明采用培养盘直接进行上架立体培养，省去了洗瓶上瓶工序，提高工作效率20% (一培养盘相当于20罐头瓶)；本发明得到的蛹虫草于干燥后直接进行超微粉碎，粉碎粒径为15(Γ300目，以菌粉形态储存，省去冷藏和采收等工序，节省空间，降低成本，适于产业化生产。
以下结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中图I显示了本发明的制备方法的工艺步骤；图2为本发明的超微粉碎(粒径为300目)蛹虫草粉溶解于水中的照片；图3表示现有普通方法粉碎(粒径为100目)蛹虫草粉溶解于水中的照片。
具体实施例方式以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为常规商购得到。实施例I柞蚕生物茧种于当年11月中下旬入库储存，储存温度为-广2°C、储存湿度为50 60%，储存厚度为30cm。蛹期标准出蛹率90%，健蛹率94%。I.蚕蛹的处理在生产前f 2天，将柞蚕生物茧放入割茧机孔内距离切割刀尖下约O. Γ0. 5mm处，然后开始向同一方向旋转割茧器，切割刀快速将茧层切开，蚕蛹自然从茧壳脱落到盛蛹器内，每盘200个蛹，不准重叠，然后将蚕蛹用传送机传入到消毒室内，先通过自动喷雾器向蛹体表面喷淋水2分钟，后用传送机传入消毒液喷淋2分钟，最后用纯净水喷淋2分钟，进入接种室待用。2.蛹虫草菌种的处理菌种为冻干法保藏的野生蛹虫草菌种，于生产前2个月开始进行菌种激活。2-1菌种激活培养基为脱脂牛乳1000ml，分装至容量为IOOml的三角瓶中，每瓶25ml，灭菌，冷却；取出5支冻干保藏的菌种，编号，在无菌条件下，将冻干保藏的菌瓶盖取下，用接种针将菌种块移入激活培养基中，每个菌号5瓶，接完种后放入25°C温度培养室中培养7天。2-2蛹虫草菌种的复壮按常规方法制备斜面复壮培养基，其配方为蚕蛹粉10g，蛋白胨10g，全脂奶粉10g，生物素10毫克，水1000ml，琼脂20g，pH 5.8。按常规方法制备液体复壮培养基，其配方为蚕蛹粉10g，蛋白胨10g，全脂奶粉10g，生物素 10 毫克，水 1000ml，pH 5.8。于无菌室内的洁净工作台上，每个菌号接入50支斜面固体菌种和3瓶激活的液体菌种，放入培养室培养，温度为25°C，培养7天。出草试验用注射器吸取得到的蛹虫草菌液，将蛹虫草菌液注入体表经消毒的蚕蛹，每瓶菌液注入100个蚕蛹；前10天在16 18°C温度下培养，后30天提高温度至2(T22°C并增加光照，光照强度为1000勒克斯，培养至长出子实体，选择能够100%出子实体的菌种进行菌种扩制。2-3制备菌种扩增液体培养基，其配方为蚕蛹粉Sg、蔗糖Sg、奶粉10g、维生素液20ml、磷酸二氢钾I. 5g、磷酸二氢钠I. 0g、硫酸镁O. 5g、水1000ml, pH 5。所述维生素液按下列配方组成盐酸硫胺素100毫克，核黄素25毫克，吡哆醇25毫克，泛酸钙100毫克，对氨基苯甲酸25毫克，氯化胆碱100毫克，肌醇100毫克，叶酸2. 5毫克，生物素I毫克，力口蒸馏水1000毫升。按配方精确称取配方的各成分配制培养基，其中将蚕蛹粉加水煮沸、过滤后，在将滤液加入其余培养基成分的混合物中，定容，充分搅拌，分装在培养容器中，装量为容器的3/10 ;然后在I. 2公斤/每平方米压力下进行灭菌，时间为30分钟；灭菌后，经冷却，在培养基内接入经验证长出子实体的菌种(来自斜面复壮培养基)，在25°C温度下培养24小时，然后放入液体菌种振荡器中，振荡培养72小时。2-4菌种检验·
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2-4-1外观形态检查菌球大小均匀，直径在O. 5 Imm之间，菌液透明，培养前后无明显变化，无酸味或其它异味；2-4-2 pH值检查培养后的pH值在5. 8左右；2-4-3显微镜检查一般是细菌、酵母菌和放线菌，细菌多数运动活跃，在镜下呈现杆状；酵母菌的个体较大，为圆形，有的能产芽孢；放线菌的特征为菌丝较纤细，呈现分枝状，菌丝内无横隔。3.培养僵蛹3-1接种蚕蛹在接种车间内，于洁净工作台上，无菌条件下，将经检验合格的菌液注入连续接种器内，然后按上针头(型号为12号)，启动机器注入蛹体，每个蛹为O. 5 Imm03-2上盘培养将接种后的蚕蛹放入培养盘内，每盘为200个左右，以不出现重叠为佳；然后放入僵蛹室内培养僵蛹，温度为16 18°C，培养时间为10天；4天后开始检查，及时检出烂蛹。4.僵蛹上盘培养将盘内僵蛹进行消毒，消毒过程为将僵蛹用传送机传入到消毒室内，先通过自动喷雾器向蛹体表面喷淋自来水2分钟，后用传送机传入消毒液喷淋2分钟，最后用纯净水喷淋2分钟。经消毒的僵蛹摆入无菌盘中，盘上表面用细钢架支成拱形，然后覆盖塑料薄膜。将经覆盖塑料薄膜的僵蛹盘分别摆放在培养室内的培养架上，无光照培养7天，直至蛹体表面出现子实体原基。上架出草将得到的蛹体进行增光培养，前15天每天24小时，其光照强度为1000勒克斯；之后白天采用自然光光照培养，晚上光照培养、光照强度为80(Γ1000勒克斯，直至子实体长出子囊壳，之后及时干燥。5.干燥将得到的蛹虫草，放置在波长频率为2450MHz、温度为50°C 60°C的微波隧道中干燥，至含水率为5% 8%时完成。6.超微粉碎先将经干燥的蛹虫草体粉碎至粒径为2(Γ80目，后采用摇摆式球磨机一次粉碎至粒径为15(Γ300目，粉碎时间为3小时，转数为600转/min，罐体温度为15°C，球体温度为20°C ;摇摆式球磨机的撞击球为错球。
7.包装储存将得到的蛹虫草粉在无菌室内，分装入为容量为500克的包装瓶内，置于阴凉干燥处保存。实施例2表I :不同制备方法获得的蛹虫草的对比试验
权利要求
1.一种蛹虫草的制备方法，该制备方法包括下述步骤 (1)将蛹虫草菌液注入柞蚕生物茧的蚕蛹，16 18°C下培养7 10天获得僵蛹； (2)僵蛹经无光照培养7 10天，蛹体表面形成子实体原基； (3)僵蚕再经光照培养1(Γ15天，光照强度为80(Γ1000勒克斯；之后白天自然光光照培养，晚上光照培养、光照强度为80(Γ1000勒克斯，直至子实体长出子囊壳。
2.根据权利要求I的制备方法，其特征在于，所述柞蚕生物茧为以卵量母种获得的柞蚕生物茧。
3.根据权利要求I或2的制备方法，其特征在于，所述柞蚕生物茧的蚕蛹出蛹率为85%以上，健蛹率为94、8% ;优选地，所述柞蚕生物茧的蚕蛹在注入蛹虫草菌液前经过消毒。
4.根据权利要求I至3中任一项的制备方法，其特征在于，所述蛹虫草菌液是由以下方法制备的 a.将冻干保藏的野生蛹虫草菌种接种至脱脂牛乳，25°C下培养7天后分别接种至斜面复壮培养基和液体复壮培养基，25°C下培养7天，其中按重量份数计，所述斜面复壮培养基的组成为蚕蛹粉10份、蛋白胨10份、全脂奶粉10份、生物素O. 01份、琼脂20份、水1000份、pH 5.8 ;所述液体复壮培养基的组成为蚕蛹粉10份、蛋白胨10份、全脂奶粉10份、生物素 O. 01 份、水 1000 份、pH 5.8 b.将经液体复壮培养基培养得到的蛹虫草菌液注入柞蚕生物茧的蚕蛹，16 18°C下培养10天后，2(T22°C下光照培养30天，确认能否长出子实体； c.将能够长出子实体的野生蛹虫草菌种从斜面复壮培养基接种至扩增菌种液体培养基，25°C下培养24小时后振荡培养72小时；其中，按重量份数计，所述扩增菌种液体培养基的组成为蚕蛹粉8份、蔗糖8份、奶粉10份、维生素液20份、磷酸二氢钾I. 5份、磷酸二氢钠I. O份、水1000份、pH 5. O ;按重量份数计,所述维生素液的组成为盐酸硫胺素O. I份，核黄素O. 025份，吡哆醇O. 025份，泛酸钙O. I份，对氨基苯甲酸O. 025份，氯化胆碱O. I份，肌醇O. I份，叶酸O. 0025份，生物素O. 001份，以及蒸馏水1000份。
5.根据权利要求I至4中任一项的制备方法，其特征在于，在所述步骤(I)中，所述蚕蛹置于培养盘中培养；优选地，所述蚕蛹置于培养盘中培养且培养时互相不重叠。
6.根据权利要求I至5中任一项的制备方法，其特征在于，在所述步骤(2)中，所述僵蚕在无光照培养前经过消毒；更优选地，所述僵蚕在无光照培养前经过消毒并被覆盖塑料薄膜。
7.根据权利要求I至6中任一项的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括以下步骤 (4)干燥得到的蛹虫草；优选地，所述干燥条件为在频率2450±50MHz的微波中、5(T60°C下干燥至含水量为5 8%。
8.根据权利要求I至7中任一项的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括以下步骤 (5)粉碎得到的蛹虫草；优选地，所述粉碎为先将蛹虫草粗粉碎至2(Γ80目，再经球磨粉碎至15(Γ300目；更优选地，所述球磨粉碎的条件为粉碎时间为3小时，球磨转速600转/min，罐体温度15°C，球体温度为20°C。
9.根据权利要求I至8中任一项的制备方法制备的蛹虫草。
10.根据权利要求I至8中任一项的制备方法制备的蛹虫草在制备药品、保健品、食品或化妆品中的用途。
全文摘要
本发明提供了一种蛹虫草及其制备方法和用途，该制备方法包括下述步骤(1)将蛹虫草菌液注入柞蚕生物茧的蚕蛹，16~18℃下培养7~10天获得僵蛹；(2)僵蛹经无光照培养7~10天，蛹体表面形成子实体原基；(3)僵蚕再经光照培养10~15天，光照强度为800~1000勒克斯；之后白天自然光光照培养，晚上光照培养、光照强度为800~1000勒克斯，直至子实体长出子囊壳。本发明选择柞蚕生物茧和经过复壮的蛹虫草菌种培育出成品率高和质量优质的蛹虫草，并通过采用超微粉碎技术使产品的分散性、溶解性、吸收性得到根本的改善，保持了产品原有的生物活性和营养成分，大大提高了原料的利用率。
文档编号C05G3/00GK102893807SQ20121037658
公开日2013年1月30日 申请日期2012年9月29日 优先权日2012年9月29日
发明者陈文展, 苑桂华 申请人:广州大光制药有限公司