专利名称：一种畜牧养殖用高活性益生菌制剂的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种畜牧养殖用高活性益生菌制剂的制备方法，属于益生菌制剂的制备方法技术领域。
背景技术：
二十世纪五十年代人们发现在饲料中添加低浓度的抗生素可明显地促进畜禽生长，从此，抗生素作为饲料添加剂的使用就占据了十分重要的地位。随着人们对抗生素的认识不断加深，抗生素添加剂带来的巨大经济效益背后所隐藏的弊端逐渐被发现长期使用抗生素会导致细菌产生抗药性，同时也会造成畜禽机体免疫力下降，引起畜禽内源性感染和二重感染；抗生素会在畜产品中造成残留直接威胁人类的健康。滥用甚至有可能使动物 产生基因突变、畸形、癌变。一些性质稳定的抗生素排出动物体外很可能造成环境污。欧洲及许多地区和国家已经或正在禁止抗生素在饲料中的使用。动物营养学家正在积极寻求无毒副作用、无残留、安全的抗生素替代品用以取代其作为动物生产中促生长剂的身份。益生菌制剂主要通过维持动物肠道内的正常微生态平衡，利用微生物在肠道内的竞争排斥原理，形成优势益生菌群，起到促进畜禽生长、增强机体免疫力及防治疾病等作用。用它替代抗生素作为新型的饲料添加剂是目前世界各国研究和应用的热点。然而，现有的益生菌添加剂在规模化、产业化生产时，还存在产品实际含菌量低、活性差、作用单一、稳定性差、保存时间短的问题
发明内容
本发明的目的是为了解决现有的益生菌添加剂在规模化、产业化生产时，还存在产品实际含菌量低、活性差、作用单一、稳定性差、保存时间短的问题，进而提供一种畜牧养殖用高活性益生菌制剂的制备方法。本发明的目的是通过以下技术方案实现的—种畜牧养殖用高活性益生菌制剂的制备方法，步骤如下一、活化分别挑取斜面保存枯草芽孢杆菌、啤酒酵母，接种到枯草芽孢杆菌、啤酒酵母种子培养基中，于3(T37°C条件下、15(Tl70rpm摇床、12 24h活化；挑取乳酸杆菌保存菌种接种到乳酸杆菌培养基中，于3(T36°C条件下静止培养24 36h活化；挑取双歧杆菌保存菌种接种到双歧杆菌培养基中，于32 36°C条件下静止培养2(T30h活化；挑取光合细菌保存菌种接种到光合细菌培养基中，于3(T34°C条件下静止培养34 48h活化；二、培养枯草芽孢杆菌、啤酒酵母活化培养物以O. 19Γ0. 5%接种量分别接种于种子罐中，3(T37°C条件下、间歇通气培养48 72h ;乳酸杆菌培养物以O. 1°/Γθ. 5%接种量接种于种子罐中，3(T37°C条件下、静置培养6(T72h ;双歧杆菌培养物以O. 1°/Γθ. 5%接种量接种于种子罐中，3(T37°C条件下、静止培养48飞Oh ;光合细菌培养物以O. 19Γ0. 5%接种量接种于种子罐中，30 37°C条件下、静置培养60 72h ；三、兑制混合液发酵用菌种为上述五种菌扩繁纯培养物按枯草芽孢杆菌35 45%，双歧杆菌15 25%，啤酒酵母菌20 30%，乳酸杆菌3 9%，光合细菌6 12%的质量百分t匕，发酵前2h兑成菌种混合液备用；
四、发酵按米糠30 38%、麦麸25 32%、豆柏6 10%、糖蜜2 5%、水23 29%、糖化酶
O.07、. 13%和菌种混合液O. 8^1. 2%的质量百分比，投入混合接种机械混合均匀，接种后的发酵基础料按厚度100cm，起始温度控制在2(T25°C，pH值7，均匀摊铺在独立封闭的可调温的发酵槽中进行发酵；五、发酵物料6 8h后启动升温，温度升到50°C 55°C、pH值彡6.0，48h后第一阶段结束；六、进行机械翻料补氧后，继续发酵，时间为24h，温度达到45°C 50°C，pH值(4. 2，进行实验室脲酶活性检测合格，发酵过程结束；七、发酵后的产物全部移入低温烘干机中进行烘干，烘干温度控制在42°C ；八、烘干后的产物输送到逆流冷却器降温，粉碎、过60目筛；即成为高活性复合益生囷制剂成品。本发明具有以下优点本发明创造了三段式的菌种扩繁技术，即活化、液体扩繁和固体发酵生产。不但最大限度地增加了活菌总数量，而且还提高了益生菌的活力。发酵过程中产生的各种消化酶、有机酸、中小分子蛋白(功能肽)、氨基酸、维生素和微生物代谢物等得到提闻，也大大提闻了益生菌制剂的生物功能性价值，提闻了益生菌制剂广品的稳定性，延长了产品的保存时间，常温条件下可保存扩12个月。本发明可实现规模化、产业化生产。
具体实施例方式下面将对本发明做进一步的详细说明本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式，但本发明的保护范围不限于下述实施例。本实施例所涉及的一种畜牧养殖用高活性益生菌制剂的制备方法，步骤如下I、活化分别挑取斜面保存枯草芽孢杆菌、啤酒酵母，接种到枯草芽孢杆菌、啤酒酵母种子培养基中，于3(T37°C条件下、15(Tl70rpm摇床、12 24h活化。挑取乳酸杆菌保存菌种接种到乳酸杆菌培养基中，于3(T36°C条件下静止培养24 36h活化。挑取双歧杆菌保存菌种接种到双歧杆菌培养基中，于32 36°C条件下静止培养2(T30h活化。挑取光合细菌保存菌种接种到光合细菌培养基中，于3(T34°C条件下静止培养34 48h活化。2、培养枯草芽孢杆菌、啤酒酵母活化培养物以O. 19Γ0. 5%接种量分别接种于种子罐中，3(T37°C条件下、间歇通气培养48 72h。乳酸杆菌培养物以O. 1%、. 5%接种量接种于种子罐中，3(T37°C条件下、静置培养6(T72h。双歧杆菌培养物以O. 1°/Γθ. 5%接种量接种于种子罐中，3(T37°C条件下、静止培养48飞Oh。光合细菌培养物以O. 19Γ0. 5%接种量接种于种子罐中，30 37°C条件下、静置培养60 72h。3、兑制混合液发酵用菌种为上述五种菌扩繁纯培养物按枯草芽孢杆菌40%，双歧杆菌20%，啤酒酵母菌25%，乳酸杆菌6%，光合细菌9%的质量百分比。发酵前2h兑成菌种混合液备用。4、发酵按米糠34%、麦麸28%、豆柏8%、糖蜜3%、水26%、糖化酶O. 1%和菌种混合液O. 9%的质量百分比，投入混合接种机械混合均匀，接种后的发酵基础料按厚度100cm，起始温度控制在2(T25°C，pH值7，均匀摊铺在独立封闭的可调温的发酵槽中进行发酵。
5、发酵物料6 8h后启动升温，温度升到50°C 55°C、pH值彡6. 0，48h后第一阶段结束。6、进行机械翻料补氧后，继续发酵，时间为24h，温度达到45°C 50°C，pH值彡4. 2，进行实验室脲酶活性检测合格，发酵过程结束。7、发酵后的产物全部移入低温烘干机中进行烘干。烘干温度控制在42°C。8、烘干后的产物输送到逆流冷却器降温。粉碎，过60目筛。即成为高活性复合益生囷制剂成品。9、高活性复合益生菌制剂成品经称量、包装后放于阴凉干燥处，在室温下可存放9 12个月。10、高活性复合益生菌制剂可作为畜禽、水产、经济动物及宠物等的饲料添加剂。 本发明涉及的菌种有枯草芽孢杆菌3株、乳酸杆菌I株、光合细菌I株，啤酒酵母I株，双歧杆囷I株。均购自中国农科院囷种保减中心。本发明创造了三段式的菌种扩繁技术，即活化、液体扩繁和固体发酵生产。不但最大限度地增加了活菌总数量[经检验，活菌总数量> 2X10ncfU/g (含乳酸菌2X IOltlCfu/g，枯草芽孢杆菌彡lX10ncfu/g，啤酒酵母菌彡5X109cfu/g，双歧杆菌彡8X101QCfu/g，光合细菌> 4X101(lCfU/g)]，而且还提高了益生菌的活力。发酵过程中产生的各种消化酶、有机酸(pH ( 4. 3)、中小分子蛋白(功能肽> 8g/100g)、氨基酸(蛋氨酸> O. 55g/100g,赖氨酸> I. 20g/100g)、维生素(Va 彡 1600IU/100g, Vd 彡 1500IU/100g, Vbi 彡 O. 5mg/100g，Vb2 彡 lmg/100g, Vb6 彡 O. 5mg/100g, Vb12 彡 2. 5mg/100g, Ve 彡 5mg/100g)和微生物代谢物等也大大提高了益生菌制剂的生物功能性价值。本发明制备的益生菌制剂作为饲料添加剂有如下作用I、调节动物肠胃平衡，促进营养吸收，提高饲料利用率。2、提闻肉蛋奶等动物广品量,改善畜广品品质。3、提高机体非特异性免疫力，提高成活率及整齐度。4、提高机体适应能力，降低因转群、疫苗接种、气温剧变等造成的生产损失。5、对发酵粗饲料、饼柏及糟渣类原料，降低其毒素含量，降低成本，改善适应性。6、提高饲料消化吸收利用率，提高生产性能，含有多种有益微生物活菌，建立动物肠道内微生态平衡，动物对其中的饲料营养成份完全吸收利用，可使蛋白质、能量、矿物质的利用率达95%，极大提高粗饲料吸收利用率，因此可降低饲料成本，长期使用能节省10% 15%饲料。7、适用于家畜、家禽类养殖领域。(I)仔猪①提高乳猪断奶后采食量，促消化吸收、促进断奶仔猪的增重。②促进肠绒毛发育，减少断奶仔猪营养性、细菌性下痢发生。③提高仔猪的免疫力与抗病能力。(2)母猪①提闻母猪健康状况，减少流广和死胎、提闻仔猪出生时的体重。②改善妊娠母猪健康状况，延长使用年限。③提高母猪泌乳量，改善奶水品质。
(3)种公猪①保证公猪体格健壮，延长种公猪的使用年限。②激发公猪性欲，提高精子活力。③增强抗应激能力。(4)肥育猪①改善生长猪的健康状况和生长速度。②提高采食量，增强机体免疫力及抗应激能力。③改善肉质，无药残，是绿色生态猪养殖的首选添加剂。·
(5)应用于禽类①防治禽类细菌性消化道疾病，增强免疫力，提高成活率。②促消化、助吸收，提高饲料转化率5%以上。③提高蛋重，降低蛋壳破损率。④改善蛋品品质、蛋黄颜色。⑤改善禽舍内的环境卫生，减少呼吸道疾病的发生。(6)应用于反刍类动物能激活瘤胃的细菌活性，增强有益菌的繁殖速度，稳定瘤胃的pH值，从而调控瘤胃内环境，加快饲料蛋白质的水解，促进瘤胃肽的吸收，增加菌体蛋白的产量，提高饲料利用率，最终提高营养物质的消化率。①有效防治消化系统疾病，产奶量提高5% 10%以上。②提高育肥牛生长速度3%增加净肉率。③维持瘤胃PH值稳定，显著降低瘤胃酸中毒。④提高反刍动物抗热应激能力，提高免疫力和抗病力。⑤降低乳房炎发生率，延长产奶高峰期。8、提高动物肉的品质，动物在垫料上，显得十分舒适，活动量较大。生长发育健康，几乎没有疾病发生，几乎不用抗生药物，提高动物肉的品质，生产出真正意义上的有机肉类。9、用于水产养殖行业改善水质，减少鱼类疾病的发生。实验表明，在奶牛中应用，可使奶牛产奶量提高5% 10%，乳蛋白含量提高
O.I O. 2个单位，乳脂率提高O. I O. 3个单位。应用在养鸡生产上可提高蛋鸡产蛋率
9.4%，提高蛋鸡成活率5. 6%，且能显著降低耗料量。在鸡饲料中添加O. 5%，鸡血液球蛋白水平提高，血氨减少，鸡的抗病力增强，死亡率降低。饲喂黄羽肉鸡能够改善肉鸡胴体品质和消除产品中的药物残留。将其应用于断奶仔猪饲喂，在日粮中添加1%组与添加土霉素、喹乙醇的试验组比较，其断奶仔猪的平均日增重分别为597. 3g，564. 6g和522. 6g。说明断奶仔猪应用效果优于使用抗生素。生长育肥猪日粮中添加，可使日增重提高9.5%。按lmg/kg用量投入虾苗放养I月后虾池中，每星期投入I次，共3次，结果试验组对虾发生病毒病的时间较对照组延迟10d，产量增加40%。喂鱼，鱼生长速度明显提高，吃食性鱼类增重30%以上，滤食性鱼类增重20% ^25%,饲养密度提高30%以上。以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式
，这些具体实施方式
都是基于本发明整体构思下的不同实现方式，而且本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖 在本发明的保护范围之内。
权利要求
1.一种畜牧养殖用高活性益生菌制剂的制备方法，其特征在于，步骤如下 一、活化分别挑取斜面保存枯草芽孢杆菌、啤酒酵母，接种到枯草芽孢杆菌、啤酒酵母种子培养基中，于3(T37°C条件下、15(Tl70rpm摇床、12 24h活化；挑取乳酸杆菌保存菌种接种到乳酸杆菌培养基中，于3(T36°C条件下静止培养24 36h活化；挑取双歧杆菌保存菌种接种到双歧杆菌培养基中，于32 36°C条件下静止培养2(T30h活化；挑取光合细菌保存菌种接种到光合细菌培养基中，于3(T34°C条件下静止培养34 48h活化； 二、培养枯草芽孢杆菌、啤酒酵母活化培养物以O.19Γ0. 5%接种量分别接种于种子罐中，3(T37°C条件下、间歇通气培养48 72h ;乳酸杆菌培养物以O. 1°/Γθ. 5%接种量接种于种子罐中，3(T37°C条件下、静置培养6(T72h ;双歧杆菌培养物以O. 1°/Γθ. 5%接种量接种于种子罐中，3(T37°C条件下、静止培养48飞Oh ;光合细菌培养物以O. 19Γ0. 5%接种量接种于种子罐中，30 37°C条件下、静置培养60 72h ； 三、兑制混合液发酵用菌种为上述五种菌扩繁纯培养物按枯草芽孢杆菌35 45%，双歧杆菌15 25%，啤酒酵母菌2(Γ30%，乳酸杆菌3、％，光合细菌6 12%的质量百分比，发酵前2h兑成菌种混合液备用； 四、发酵按米糠30 38%、麦麸25 32%、豆柏6 10%、糖蜜2 5%、水23 29%、糖化酶O.07、. 13%和菌种混合液O. 8^1. 2%的质量百分比，投入混合接种机械混合均匀，接种后的发酵基础料按厚度100cm，起始温度控制在2(T25°C，pH值7，均匀摊铺在独立封闭的可调温的发酵槽中进行发酵； 五、发酵物料6 8h后启动升温，温度升到50°C 55°C、pH值彡6.0，48h后第一阶段结束； 六、进行机械翻料补氧后，继续发酵，时间为24h，温度达到45°C 50°C，pH值彡4.2，进行实验室脲酶活性检测合格，发酵过程结束； 七、发酵后的产物全部移入低温烘干机中进行烘干，烘干温度控制在42°C； 八、烘干后的产物输送到逆流冷却器降温至室温，粉碎、过60目筛；即成为高活性复合￡fL生囷制剂成品。
2.根据权利要求I所述的畜牧养殖用高活性益生菌制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤三中五种菌扩繁纯培养物按枯草芽孢杆菌40%，双歧杆菌20%,啤酒酵母菌25%，乳酸杆菌6%，光合细菌9%的质量百分比，发酵前2h兑成菌种混合液。
3.根据权利要求I所述的畜牧养殖用高活性益生菌制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤四中按米糠34%、麦麸28%、豆柏8%、糖蜜3%、水26%、糖化酶O. 1%和菌种混合液O. 9%的质量百分比进行发酵。
4.一种权利要求1、2或3所述畜牧养殖用高活性益生菌制剂的制备方法得到的产品。
全文摘要
本发明提供了一种畜牧养殖用高活性益生菌制剂的制备方法，所述五种菌扩繁纯培养物按枯草芽孢杆菌35~45%，双歧杆菌15~25%，啤酒酵母菌20~30%，乳酸杆菌3~9%，光合细菌6~12%的质量百分比，发酵前2h兑成菌种混合液；按米糠30~38%、麦麸25~32%、豆粕6~10%、糖蜜2~5%、水23~29%、糖化酶0.07~0.13%和菌种混合液0.8~1.2%的质量百分比，均匀摊铺在独立封闭的可调温的发酵槽中进行发酵。本发明创造了三段式的菌种扩繁技术，即活化、液体扩繁和固体发酵生产。最大限度地增加了活菌总数量，提高了益生菌制剂产品的稳定性，常温条件下可保存9~12个月。
文档编号A23K1/16GK102907563SQ201210444010
公开日2013年2月6日 申请日期2012年11月8日 优先权日2012年11月8日
发明者张刘运, 全立群, 曹健滨, 张日阔, 沈广月 申请人:哈尔滨立群生物科技服务有限公司