一种龙爪柳未生根组培苗的生根方法
【专利摘要】本发明提供了一种龙爪柳未生根组培苗的生根方法，通过包括MS、0.01～1mg/L萘乙酸（NAA）、0.01～1mg/L6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)、30g/L蔗糖、6.5g/L琼脂粉和0.5～3g/L活性炭制备得到的培养基对龙爪柳未生根组培苗进行生根培养，根据本发明提供的方法未生根组培苗生根快，生根率高，并且在组织培养过程中无需更换培养基配方，简化组织培养操作，具有较高的科学价值、经济价值及实用价值。
【专利说明】一种龙爪柳未生根组培苗的生根方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及林木培育领域，尤其涉及植物组织培养。
【背景技术】
[0002]龙爪柳，又名龙须柳，拉丁名:Salix matsudana var.tortuosa,科名:杨柳科Salicaceae柳属，是生长在东北、华北、西北、华东等地的杨柳科柳属落叶灌木或小乔木，湿地、旱地皆能生长，生长快，其有阳性，耐寒等特点，春至夏季为适期，其枝条卷曲，姿态别致，在园林中广泛应用栽培。但其数量有限，并且自身繁殖不易，因此在园林应用中受到一定的限制，目前尚无良好的繁殖方法对其进行大规模繁殖。
[0003]龙爪柳的繁殖方法有播种法或扦插法繁殖。其中，播种法即是在适宜萌芽的条件下在土壤中播撒龙爪柳种子，等待龙爪柳自然萌芽。这种方法受气候、土壤、水源等自然条件限制严重，选种、播种工作繁重，劳动强度大，出芽率低，因此播种法逐渐被淘汰。
[0004]相对于播种法扦插法具有操作简单、繁殖速度快等特点。传统的龙爪柳扦插技术的生根方法主要有以下两种:
[0005]一种为自然生根法，即在不做任何处理的情况下，让扦插苗在土壤中自然生根，该方法成活率低，生根慢，会受限于土壤、天气、气候等自然条件；另一种方法为，在扦插前，用中国林业科学研究院生产的ATB生根粉对扦插苗进行处理，然后再使扦插苗在土壤中生根，该方法相对于不作处理的方法提高了生根率，但操作复杂，而且重复性不高。
[0006]以上两种扦插方法均会受到季节限制及数量限制，同时需要优选种条，种条用量大，在扦插过程中不便运输携带。
[0007]然而，植物组织培养则具有繁育速度快、组培苗成活率高、培养条件人为可控、不受自然环境影响等诸多优势，目前，存在大量通过组织培养的方法进行植物繁殖及所用培养基的报道，如中国专利CN102860261A中公开了一种花叶玉簪植物组织培养基配制方法，其分化培养基配方为:基本培养基MS、6-苄氨基嘌呤1.2~1.8毫克/升、1-萘乙酸0.08~0.12毫克/升、蔗糖25000~35000毫克/升、琼脂粉4000~6000毫克/升，该培养基主要用于多年生宿根草本花卉玉簪的组织分化培养，并未用于其组培苗的生根培养。再如中国专利CN101953307A中公开了一种通过植物组织培养生产福建道地金线莲的方法，将经过无菌处理后的福建道地金线莲小段组织在诱导培养基中进行组织诱导培养丛生芽，培养周期:10~60天，培养温度:10~35°C，光照培养时间:0~24小时/天，光照强度:0~20001ux ;所述的诱导培养基为旧3培养基+蔗糖10~5(^/1+琼脂6~88/1+活性炭2.0~
3.0g/L+萘乙酸0.1~3.0mg/L+6-苄氨基腺嘌呤0.1~5.0mg/L, PH值为5.0~7.0,该培养基适用于草本植物金线莲，并且在大规模使用时需要额外添加硝酸钙、香蕉泥等物质，并需降低培养环境的PH，在实际生产中存在较大的成本及能耗，并且操作繁琐，需要大量劳动，其是否适用于木本植物尚未可知。
[0008]因此，可以寻求通过植物组织培养的方法对龙爪柳进行大量快速的繁殖。然而，目前尚无对龙爪柳进行组织培养的相关报道。
【发明内容】
[0009]为了解决上述问题，本发明人经锐意研究，结果发现:龙爪柳未生根组培苗在包括MS、萘乙酸(NAA)、6-苄氨基腺嘌呤出-BA)、蔗糖、琼脂粉和活性炭的培养基中生根率高，且生根后根生长迅速，成活率高。其中，萘乙酸和6-苄氨基腺嘌呤均为常用的植物生长激素，其不同浓度对植物生根生长所起的作用不同，浓度过高时会抑制植物生根，当浓度过小时对植物生根又不能起到足够的促进作用。本发明人经不断探索，确定该两种激素促进龙爪柳生根的最佳浓度，经多次试验证明，该两种激素在此浓度下能够有效诱导龙爪柳未生根组培苗生根。同时，本发明人在培养基中加入一定浓度的活性炭，一是可以吸附植物生长中产生的次生代谢物质，促进生根；二是其仅对根部提供黑暗环境，有利于龙爪柳根的生长。 [0010]因此，本发明以MS、萘乙酸(NAA)、6-苄氨基腺嘌呤(6_BA)、蔗糖、琼脂粉、活性炭制备培养基，并在此培养基中培养龙爪柳未生根组培苗使其生根，从而完成本发明。
[0011]本发明的目的在于提供以下几方面:
[0012]第一方面，本发明提供一种龙爪柳未生根组培苗的生根方法，其特征在于，包括以下步骤:
[0013]将龙爪柳未生根组培苗叶片的形态学上端剪去，保留0.5~1cm，将剪叶后的龙爪柳未生根组培苗的形态学下端插入培养基中，每个培养基中接种I个龙爪柳未生根组培苗，置于组织培养室中在以下培养条件下培养:
[0014]温度27°C，光照30001x，10小时光周期；
[0015]其中，
[0016]所述培养基包括:
[0017]
MS;
萘乙酸(NAA ):0.01-1 mg/L;
6-苄氨基腺嘌呤(6-BA):0.01~lmg/L;
篇糖:3 Og/L;
[0018]
琮脂粉:6.5g/L; 活性炭:0.5~3g/L;
[0019]其中，所述g/L是基于每升培养基所述成分的重量。
[0020]第二方面，本发明提供上述龙爪柳未生根组培苗的生根方法，其特征在于，所述培养基包括:
[0021]MS;
萘乙酸(NAA ):0.05~0.5mg/L;
6-苄氨基腺嘌呤(6-BA):0.1~I mg/L;
蔗糖:30 g/L;
琼脂粉:6.5 g/L;
活性炭:0.7-2 g/L;
[0022]其中，所述g/L是基于每升培养基所述成分的重量。
[0023]第三方面，本发明提供上述龙爪柳未生根组培苗的生根方法，其特征在于，所述培养基包括:
[0024]
MS；
萘乙酸(NAA ):0.1 5-0.3 mg/L;
6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)’.0.5~I mg/L;
蔗糖:30 g/L;
琼脂粉:6.5 g/L;
活性炭:0.8~1.2 g/L;
[0025]其中，所述g/L是基于每升培养基所述成分的重量。
[0026]第四方面，本发明提供上述龙爪柳未生根组培苗的生根方法，其特征在于，所述培养基由以下步骤制得:
[0027](I)调节MS培养基pH至5.8~6.0，加入琼脂粉，后于121 °C下高温蒸汽灭菌20~30min，冷却至50~60°C待用；
[0028](2)萘乙酸和6-苄氨基腺嘌呤灭菌待用；
[0029](3)将活性炭、步骤(2)中灭菌后的萘乙酸和6-苄氨基腺嘌呤加入步骤(1)中制备的琼脂_MS中,凝固制备完成。
[0030]第五方面，本发明提供上述龙爪柳未生根组培苗的生根方法，其特征在于，所述灭菌方式为通过滤膜过滤灭菌，其中，滤膜孔径为0.22 μ m。
[0031]第六方面，本发明还提供一种用于龙爪柳未生根组培苗生根的培养基，其特征在于，其包括:
[0032]
【权利要求】
1.一种龙爪柳未生根组培苗的生根方法，其特征在于，包括以下步骤: 将龙爪柳未生根组培苗叶片的形态学上端剪去，保留0.5~1cm，将剪叶后的龙爪柳未生根组培苗的形态学下端插入培养基中，每个培养基中接种I个龙爪柳未生根组培苗，置于组织培养室中在以下培养条件下培养: 温度27°C，光照30001x，10小时光周期； 其中， 所述培养基包括:
MS；蔡乙酸(NAA ):0.01-1 mg/L;6-苄氨基腺嘌呤(6-BA):0.01-1 mg/L; 蔗糖:30 g/L; 琼脂粉:6.5 g/L；活性炭:0.5-3 g/L; 其中，所述g/L是基于每升培养基所述成分的重量。
2.根据 权利要求1所述的一种龙爪柳未生根组培苗的生根方法，其特征在于，所述培养基包括:
MS;萘乙酸(NAA):0.05~0.5mg/L; 6-苄氨基腺嘌呤(6-BA):0.1~I mg/L; 蔗糖:30 g/L; 琼脂粉:6.5 g/L; 活性炭:0.7-2 g/L; 其中，所述g/L是基于每升培养基所述成分的重量。
3.根据权利要求1所述的一种龙爪柳未生根组培苗的生根方法，其特征在于，所述培养基包括:
MS；萘乙酸(NAA):0.15~0.3mg/L;
6-苄氨基腺嘌呤(6-BA):0.5~I mg/L 蔗糖..30 g/L; 琼脂粉:6.5 g/L; 活性炭:0,8~1,2 g/L;其中，所述g/L是基于每升培养基所述成分的重量。
4.根据权利要求1所述的一种龙爪柳未生根组培苗的生根方法，其特征在于，所述培养基由以下步骤制得: (1)调节MS培养基pH至5.8~6.0，加入琼脂粉和活性炭后于121°C下高温蒸汽灭菌20~30min，冷却至50~60°C待用； (2)萘乙酸和6-苄氨基腺嘌呤灭菌待用； (3)将步骤(2)中灭菌后的萘乙酸和6-苄氨基腺嘌呤加入步骤(1)中制备的琼脂-MS中，凝固制备完成。
5.根据权利要求1所述的一种龙爪柳未生根组培苗的生根方法，其特征在于，所述灭菌方式为通过滤膜过滤灭菌，其中，滤膜孔径为0.22 μ m。
6.一种用于龙爪柳未生根组培苗生根的培养基，其特征在于，其包括:
7.根据权利要求6所述的一种用于龙爪柳未生根组培苗生根的培养基,其特征在于，其包括:
8.根据权利要求6所述的一种用于龙爪柳未生根组培苗生根的培养基,其特征在于，其包括:MS;萘乙酸(NAA ):0.1 5-0.3 mg/L; 6-苄氨基腺嘌呤(6-BA):0.5-1 mg/L; 蔗糖:30 g/L; 琼脂粉:6.5 g/L;活性炭:0.8~1.2 g/L; 其中，所述g/L是基于每升培养基所述成分的重量。
9.根据权利要求6所述的一种用于龙爪柳未生根组培苗生根的培养基,其特征在于，所述培养基由以下步骤制得: (1)调节MS培养基pH至5.8~6.0,加入琼脂粉，后于1211:下高温蒸汽灭菌20~30min，冷却至50~60°C待用； (2)萘乙酸和6-苄氨基腺嘌呤灭菌待用； (3)将活性炭、步骤(2)中灭菌后的萘乙酸和6-苄氨基腺嘌呤加入步骤(1)中制备的琼脂_MS中，凝固制备完成。
10.根据权利要求6所述的一种用于龙爪柳未生根组培苗生根的培养基,其特征在于，所述灭菌方式为通过滤膜过滤灭菌，其中，滤膜孔径为0.22 μ m。
【文档编号】A01H4/00GK103535279SQ201310495800
【公开日】2014年1月29日 申请日期:2013年10月21日 优先权日:2013年10月21日
【发明者】张建国, 饶国栋, 睢金凯 申请人:中国林业科学研究院林业研究所