一种在液体培养基中培养铁皮石斛的方法
【专利摘要】本发明公开了一种在液体培养基中培养铁皮石斛的方法，包括萌发培养、增殖培养和分化培养，其特征在于，萌发培养、增殖培养和分化培养在液体培养基中进行，在液体培养基中放置棉花，棉花的至少一部分浸入液体培养基中，至少另一部分未浸入液体培养基，在棉花上方放置滤纸，在滤纸上进行萌发培养、增殖培养和分化培养。本发明通过在液体培养基中放入合适的棉花等支持体，将培养物接种在支持体上表面，并使表面保持湿润，即可解决固体培养基存在的代谢物累积与培养基中营养成分难以扩散分布失衡的问题。
【专利说明】-种在液体培养基中培养铁皮石解的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种生物【技术领域】，主要应用于石解属植物的扩繁培育，特别涉及一 种在液体培养基中培养铁皮石解的方法。
【背景技术】
[0002] 石解属植物组织培养过程的培养基主要是固体培养基，即在液体培养基中加入适 量琼脂加热至l〇(TC溶解，4(TC下冷却并凝固成为固体状态。也有一些培养方法中在原球茎 增殖阶段用液体培养基振荡培养。琼脂加营养液制成的固体培养基在培养过程中产生诸多 问题，如固体培养基易造成干化较快，培养体附近代谢产物累积及培养基中的营养成分难 W有效输送，在培养物周边容易累积代谢产物，培养物周边营养物分布不均衡，抑制愈伤组 织生长等问题。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是提供一种液体培养基；
[0004] 本发明的另一目的是提供一种在液体培养基中培养铁皮石解的方法。
[0005] 本发明提供的技术方案为：
[0006] -种在液体培养基中培养铁皮石解的方法，包括萌发培养、增殖培养和分化培养， 所述萌发培养、增殖培养和分化培养在液体培养基中进行，在液体培养基中放置棉花，棉花 的至少一部分浸入液体培养基中，至少另一部分未浸入液体培养基，在棉花上方放置滤纸， 在所述滤纸上进行所述萌发培养、增殖培养和分化培养。将配制好的液体培养基注入培养 瓶中，加入适量棉花，使棉花均匀分布在瓶内，并且不随液体晃动，棉花上表面平整并稍高 于液面W上0. 3cm，将稍小于瓶内径的圆形滤纸平置瓶内，与棉花表面较好的接触。将液体 培养基、棉花和滤纸在高压锅中进行常规消毒。本发明通过在液体培养基中放入合适的棉 花等支持体，将培养物接种在支持体上表面，并使表面保持湿润，即可解决固体培养基存在 的代谢物累积与培养基中营养成分难W扩散分布失衡的问题。
[0007] 优选的是，所述的在液体培养基中培养铁皮石解的方法中，所述萌发培养中，将铁 皮石解种子在温度23?27°C，光周期10?12小时/日和光照度1000?20001X条件下培 养55?70天至其萌发形成淡绿色的团簇状原球茎；
[000引所述萌发培养中的液体培养基包含；1/2MS和20g/L藏糖，其初始抑值为5. 8。
[0009] 优选的是，所述的在液体培养基中培养铁皮石解的方法中，在所述萌发培养之后 进行所述增殖培养，将萌发培养所得的原球茎在温度23?27C，光周期10?12小时/日 和光照度1000?20001X条件下培养45?60天；
[0010] 所述增殖培养中的液体培养基包含；1/2MS，6-BA 0. 5mg/L，NAA 0. 5mg/L，藏糖 20g/L和质量分数为20%的马铃墓提取液，其初始抑值为5. 8。
[0011] 优选的是，所述的在液体培养基中培养铁皮石解的方法中，在所述增值培养之后 进行所述分化培养，将经过增殖培养的原球茎在温度23?27C，光周期10?12小时/日 和光照度1000?20001x条件下，培养45?60天至其分化长成0. 5?1cm高的小苗；
[0012] 所述分化培养中的液体培养基包含；MS，6-BA 0. 5mg/L，NAA 0. Img/L，藏糖20g/L 和质量分数20%的马铃墓提取液，其初始抑值为5. 8。
[0013] 优选的是，所述的在液体培养基中培养铁皮石解的方法中，所述棉花为脱脂棉。脱 脂棉易得，且吸湿性更好，灭菌后更不容易污染。
[0014] 优选的是，所述的在液体培养基中培养铁皮石解的方法中，还包括在所述分化培 养后进行壮苗培养，所述壮苗培养为将分化长成的小苗在温度为23?28C，湿度为65? 75%，光照度为1500?25001X和光照时间为12小时/日的条件下培养60?70天，至小 苗高度达5?8cm ;
[0015] 所述壮苗培养中的液体培养基包含；1/215，歴4 0.5111肖/1，质量分数10%的马铃 墓提取液，质量分数10 %的香蕉汁提取液，藏糖20g/L和琼脂6. 8g/l，其初始抑值为5. 8。
[0016] 优选的是，所述的在液体培养基中培养铁皮石解的方法中，在所述壮苗培养后还 包括将所述小苗进行炼苗，之后再进行栽植。
[0017] 本发明通过在液体培养基中放入合适的棉花等支持体，将培养物接种在支持体上 表面，并使表面保持湿润，即可解决固体培养基存在的代谢物累积与培养基中营养成分难 W扩散分布失衡的问题。
[0018] 本发明是在瓶装液体培养基中加入适量脱脂棉后在上表面平置滤纸作为支持体。 使填充的脱脂棉在瓶内不致随液体而晃动并略高于液面，将种子或外植体等接种在滤纸表 面进行培养。培养液的配方可W根据外植体、培养阶段及培养目标不同而调整。
[0019] 本发明通过采用简便易得的材料解决了使用固体培养基培养铁皮石解中的诸多 问题，使用液体培养基培养铁皮石解，培养体附近代谢产物累积及培养基中的营养成分能 有效输送，培养基周边不易累积代谢产物，培养物周边营养物分布均衡，愈伤组织生长良 好。
【具体实施方式】
[0020] 下面对本发明做进一步的详细说明，W令本领域技术人员参照说明书文字能够据 W实施。
[0021] 本发明中使用的滤纸为"双圈"牌，购买自杭州沃华滤纸有限公司；
[0022] 本发明中的脱脂棉为"徐卫"牌，购买自徐州市徐卫卫生材料有限责任公司。
[002引本发明中的MS培养基的配方组成如下：
[0024] MS培养基
[00 巧]
[0026]
【权利要求】
1. 一种在液体培养基中培养铁皮石斛的方法，包括萌发培养、增殖培养和分化培养，其 特征在于，所述萌发培养、增殖培养和分化培养在液体培养基中进行，在液体培养基中放置 棉花，棉花的至少一部分浸入液体培养基中，至少另一部分未浸入液体培养基，在棉花上方 放置滤纸，在所述滤纸上进行所述萌发培养、增殖培养和分化培养。
2. 如权利要求1所述的在液体培养基中培养铁皮石斛的方法，其特征在于，所述萌 发培养中，将铁皮石斛种子在温度23?27°C，光周期10?12小时/日和光照度1000? 20001x条件下培养55?70天至其萌发形成淡绿色的团簇状原球茎； 所述萌发培养中的液体培养基包含：1/2MS和20g/L蔗糖，其初始pH值为5.8。
3. 如权利要求1所述的在液体培养基中培养铁皮石斛的方法，其特征在于，在所述萌 发培养之后进行所述增殖培养，将萌发培养所得的原球茎在温度23?27°C，光周期10? 12小时/日和光照度1000?20001x条件下培养45?60天； 所述增殖培养中的液体培养基包含：1/2MS，6-BA 0. 5mg/L，NAA 0. 5mg/L，蔗糖20g/L 和质量分数为20%的马铃薯提取液，其初始pH值为5. 8。
4. 如权利要求1?3任一项所述的在液体培养基中培养铁皮石斛的方法，其特征在于， 在所述增值培养之后进行所述分化培养，将经过增殖培养的原球茎在温度23?27°C，光周 期10?12小时/日和光照度1000?20001x条件下，培养45?60天至其分化长成0. 5? lcm高的小苗； 所述分化培养中的液体培养基包含：MS，6-BA 0. 5mg/L，NAA 0. lmg/L，蔗糖20g/L和质 量分数20 %的马铃薯提取液，其初始pH值为5.8。
5. 如权利要求1所述的在液体培养基中培养铁皮石斛的方法，其特征在于，所述棉花 为脱脂棉。
6. 如权利要求1所述的在液体培养基中培养铁皮石斛的方法，其特征在于，还包括在 所述分化培养后进行壮苗培养，所述壮苗培养为将分化长成的小苗在温度为23?28°C，湿 度为65?75 %，光照度为1500?25001x和光照时间为12小时/日的条件下培养60? 70天，至小苗高度达5?8cm ; 所述壮苗培养中的液体培养基包含：1/21^，嫩4 0.511^/1，质量分数10%的马铃薯提 取液，质量分数10 %的香蕉汁提取液，蔗糖20g/L和琼脂6. 8g/L，其初始pH值为5. 8。
7. 如权利要求6所述的在液体培养基中培养铁皮石斛的方法，其特征在于，在所述壮 苗培养后还包括将所述小苗进行炼苗，之后再进行栽植。
【文档编号】A01H4/00GK104396751SQ201410662524
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年11月19日 优先权日:2014年11月19日
【发明者】杨林森, 王静, 黄芳, 袁莉 申请人:湖北神农架国家级自然保护区管理局