专利名称：一种铁皮石斛组织培养植物激素控制方法
技术领域：
本发明属种苗组织培养技术领域，尤其是指一种铁皮石斛组织培养植物激素控制的方法。
背景技术：
铁皮石斛，为兰科多年生附生草本植物。生于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石上，喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境，不耐寒。石斛可分为黄草、金钗、马鞭等数十种，铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名。铁皮石斛具有独特的药用价值， 以其茎入药，中药名石斛，属补益药中的补阴药，《中国药典》益胃生津，滋阴清热，取之嫩茎，扭成螺旋状或弹簧状，晒干，商品称为耳环石斛，又名枫斗。它是我国最珍贵的中药材，被尊为“中华九大仙草”之一。石斛是濒危植物，对生长环境要求苛刻，不能栽培于普通的土壤中，多附生于大树干上和石壁石缝间。石斛开花多，结果少，种子细如粉尘，每粒重约0. 3-0. 4Pg。由于种胚的发育不能超过球形阶段，又缺乏胚乳组织，需与真菌共生 (symbiotical)才能萌发，有性繁殖困难，加之生长发育较为缓慢，叶面积小，光合强度低， 对温暖、湿润的气候条件要求十分严格。近年来过量的索取和生态环境遭到破坏，使石斛濒于灭绝，是世界二类保护植物，被列为濒危野生动植物种国际贸易公约附录II，也是我国列为濒于绝灭的受保护的动植物药材品种之一。目前石斛种植已初步形成产业化趋势，但由于技术缺乏，石斛资源的濒危问题并未得到解决，其种苗繁殖成为最大的技术难题之一，故有必要寻找一种较为成熟、有效、经济的方法，快速提高种苗的品质和数量。
发明内容
本发明主要是为提高铁皮石斛组织培养的质量，确保其优质种源，缩短种苗组织培养时间，解决目前铁皮石斛分化率低，增殖缓慢，不能满足大规模种植的问题。本发明是通过如下技术方案实现的。一种铁皮石斛组织培养植物激素控制方法，本发明在湿度为70%_80%，温度23 — 28°C，1800-2200LX 光照培养 8 小时 / 天；23 — 29°C，1000-1400LX 培养 8 小时 / 天；23 — 25°C，400-800LX培养8小时/天的条件下；将铁皮石斛经过常规的消毒程序后依序经以下三个阶段进行培养
1)愈伤组织培养将铁皮石斛放入MS基本培养基+6-苄基腺嘌呤(6BA) 0.25 mg/L +萘乙酸(NNA)O. 5 mg/L+蔗糖3%+琼脂0. 8%,PH值为5. 0-6. 5的培养基里培养35-45天， 形成原球茎；
2)不定芽诱导培养将原球茎经1/2MS基本培养基+6-苄基腺嘌呤(6BA) 0. 05 mg/L +萘乙酸(NNA) 2. 0 mg/L +蔗糖2%+琼脂0. 8%+香蕉汁20%，PH值为5. 0-6. 5的培养基里培养35-45天，形成小苗；
3)生根种苗培养将小苗经MS基本培养基+6-苄基腺嘌呤(6BA) 0. 05 mg/L +萘乙酸(NNA) 0. 1 mg/L +吲哚乙酸(IAA) 0. 2 mg/L +蔗糖2%+琼脂0. 8%+香蕉汁20%, PH值为5. 0-6. 5的培养基里培养55-65天，形成种苗。本发明的有益效果是，较大提高铁皮石斛组织培养效率，优化种苗品质，缩短培养周期，为铁皮石斛产业化发展提供先决条件。下面结合实施例对本发明作进一步阐述。
具体实施例方式实施例一
一种铁皮石斛组织培养植物激素控制方法，本发明在湿度为70%-80%，温度23 °C， 1800LX光照培养8小时/天；23°C，1000LX培养8小时/天；23°C，400LX培养8小时/天的条件下；将铁皮石斛经过常规的消毒程序后依序经以下三个阶段进行培养
1)愈伤组织培养将铁皮石斛放入MS基本培养基+6-苄基腺嘌呤(6BA)0. 25 mg/L + 萘乙酸(NNA) 0. 5 mg/L+蔗糖3%+琼脂0. 8%，PH值为5. 0-6. 5的培养基里培养45天，形成原球茎；
2)不定芽诱导培养将原球茎经V2MS基本培养基+6-苄基腺嘌呤(6BA) 0. 05 mg/L +萘乙酸(NNA) 2. 0 mg/L +蔗糖2%+琼脂0. 8%+香蕉汁20%，PH值为5. 0-6. 5的培养基里培养45天，形成小苗；
3)生根种苗培养将小苗经MS基本培养基+6-苄基腺嘌呤(6BA) 0. 05 mg/L +萘乙酸(NNA) 0. 1 mg/L +吲哚乙酸(IAA) 0. 2 mg/L +蔗糖2%+琼脂0. 8%+香蕉汁20%, PH值为 5. 0-6. 5的培养基里培养65天，形成种苗。MS培养基是常规组织培养基，采用常规组织培养基配置过程。实施例二
一种铁皮石斛组织培养植物激素控制方法，本发明在湿度为70%-80%，温度28 °C， 2200LX光照培养8小时/天；29°C，1400LX培养8小时/天；25°C，800LX培养8小时/天的条件下；将铁皮石斛经过常规的消毒程序后依序经以下三个阶段进行培养
1)愈伤组织培养将铁皮石斛放入MS基本培养基+6-苄基腺嘌呤(6BA)0. 25 mg/L + 萘乙酸(NNA) 0. 5 mg/L+蔗糖3%+琼脂0. 8%，PH值为5. 0-6. 5的培养基里培养35天，形成原球茎；
2)不定芽诱导培养将原球茎经1/2MS基本培养基+6-苄基腺嘌呤(6BA) 0. 05 mg/L +萘乙酸(NNA) 2. 0 mg/L +蔗糖2%+琼脂0. 8%+香蕉汁20%，PH值为5. 0-6. 5的培养基里培养35天，形成小苗；
3)生根种苗培养将小苗经MS基本培养基+6-苄基腺嘌呤(6BA) 0. 05 mg/L +萘乙酸(NNA) 0. 1 mg/L +吲哚乙酸(IAA) 0. 2 mg/L +蔗糖2%+琼脂0. 8%+香蕉汁20%, PH值为 5. 0-6. 5的培养基里培养55天，形成种苗。MS培养基是常规组织培养基，采用常规组织培养基配置过程。实施例三
一种铁皮石斛组织培养植物激素控制方法，本发明在湿度为70%-80%，温度25°C， 2000LX光照培养8小时/天；26°C，1200LX培养8小时/天；24°C，600LX培养8小时/天的条件下；将铁皮石斛经过常规的消毒程序后依序经以下三个阶段进行培养
1)愈伤组织培养将铁皮石斛放入MS基本培养基+ 6-苄基腺嘌呤(6BA)0. 25 mg/L +萘乙酸(NNA) 0. 5 mg/L+蔗糖3%+琼脂0. 8%，PH值为5. 0-6. 5的培养基里培养40天，形成原球茎；
2)不定芽诱导培养将原球茎经1/2MS基本培养基+6-苄基腺嘌呤(6BA) 0. 05 mg/L +萘乙酸(NNA) 2. 0 mg/L +蔗糖2%+琼脂0. 8%+香蕉汁20%，PH值为5. 0-6. 5的培养基里培养40天，形成小苗；
3)生根种苗培养将小苗经MS基本培养基+6-苄基腺嘌呤(6BA) 0. 05 mg/L +萘乙酸(NNA) 0. 1 mg/L +吲哚乙酸(IAA) 0. 2 mg/L +蔗糖2%+琼脂0. 8%+香蕉汁20%, PH值为 5. 0-6. 5的培养基里培养60天，形成种苗。MS培养基是常规组织培养基，采用常规组织培养基配置过程。实施例四
一种铁皮石斛组织培养植物激素控制方法，本发明在湿度为70%-80%，温度M°C， 1900LX光照培养8小时/天；25°C，1100LX培养8小时/天，500LX培养8小时/天的条件下；将铁皮石斛经过常规的消毒程序后依序经以下三个阶段进行培养
1)愈伤组织培养将铁皮石斛放入MS基本培养基+6-苄基腺嘌呤(6BA)0. 25 mg/L + 萘乙酸(NNA) 0. 5 mg/L+蔗糖3%+琼脂0. 8%，PH值为5. 0-6. 5的培养基里培养37天，形成原球茎；
2)不定芽诱导培养将原球茎经1/2MS基本培养基+6-苄基腺嘌呤(6BA) 0. 05 mg/L +萘乙酸(NNA) 2. 0 mg/L +蔗糖2%+琼脂0. 8%+香蕉汁20%，PH值为5. 0-6. 5的培养基里培养37天，形成小苗；
3)生根种苗培养将小苗经MS基本培养基+6-苄基腺嘌呤(6BA) 0. 05 mg/L +萘乙酸(NNA) 0. 1 mg/L +吲哚乙酸(IAA) 0. 2 mg/L +蔗糖2%+琼脂0. 8%+香蕉汁20%, PH值为 5. 0-6. 5的培养基里培养57天，形成种苗。MS培养基是常规组织培养基，采用常规组织培养基配置过程。实施例五
一种铁皮石斛组织培养植物激素控制方法，本发明在湿度为70%-80%，温度27 °C， 2100LX光照培养8小时/天J8°C，1300LX培养8小时/天；25°C，700LX培养8小时/天的条件下；将铁皮石斛经过常规的消毒程序后依序经以下三个阶段进行培养
1)愈伤组织培养将铁皮石斛放入MS基本培养基+6-苄基腺嘌呤(6BA)0. 25 mg/L + 萘乙酸(NNA) 0. 5 mg/L+蔗糖3%+琼脂0. 8%，PH值为5. 0-6. 5的培养基里培养43天，形成原球茎；
2)不定芽诱导培养将原球茎经V2MS基本培养基+6-苄基腺嘌呤(6BA) 0. 05 mg/L +萘乙酸(NNA) 2. 0 mg/L +蔗糖2%+琼脂0. 8%+香蕉汁20%，PH值为5. 0-6. 5的培养基里培养43天，形成小苗；
3)生根种苗培养将小苗经MS基本培养基+6-苄基腺嘌呤(6BA) 0. 05 mg/L +萘乙酸(NNA) 0. 1 mg/L +吲哚乙酸(IAA) 0. 2 mg/L +蔗糖2%+琼脂0. 8%+香蕉汁20%, PH值为 5. 0-6. 5的培养基里培养63天，形成种苗。MS培养基是常规组织培养基，采用常规组织培养基配置过程。通过上述三个阶段培养的方法可以在较短时间内生产出大量健康的铁皮石斛种苗，可以有效地满足石斛生产厂家的需求。
权利要求
1. 一种铁皮石斛组织培养植物激素控制方法，其特征在于，在湿度为70%-80%，温度 23 - 28°C,1800-2200LX 光照培养 8 小时 / 天；23 — 29°C, 1000-1400LX 培养 8 小时 / 天； 23 - 25°C，400-800LX培养8小时/天的条件下；将铁皮石斛经过常规的消毒程序后依序经以下三个阶段进行培养1)愈伤组织培养将铁皮石斛放入MS基本培养基+6-苄基腺嘌呤0. 25 mg/L +萘乙酸0. 5 mg/L+蔗糖3%+琼脂0. 8%，PH值为5. 0-6. 5的培养基里培养35-45天，形成原球茎；2)不定芽诱导培养将原球茎经1/2MS基本培养基+6-苄基腺嘌呤0. 05 mg/L +萘乙酸2. 0 mg/L +蔗糖2%+琼脂0. 8%+香蕉汁20%，PH值为5. 0-6. 5的培养基里培养35-45 天，形成小苗；3)生根种苗培养将小苗经MS基本培养基+6-苄基腺嘌呤0. 05 mg/L +萘乙酸0. 1 mg/L +吲哚乙酸0. 2 mg/L +蔗糖2%+琼脂0. 8%+香蕉汁20%, PH值为5. 0-6. 5的培养基里培养55-65天，形成种苗。
全文摘要
一种铁皮石斛组织培养植物激素控制方法，本发明在湿度为70%-80%，温度23－28℃，1800-2200LX光照培养8小时/天；23－29℃，1000-1400LX培养8小时/天；23－25℃，400-800LX培养8小时/天的条件下；将铁皮石斛经过常规的消毒程序后依序经以下三个阶段进行培养1)愈伤组织培养；2)不定芽诱导培养；3)生根种苗培养。本发明的有益效果是，较大提高铁皮石斛组织培养效率，优化种苗品质，缩短培养周期，为铁皮石斛产业化发展提供先决条件。
文档编号A01H4/00GK102318561SQ20111031103
公开日2012年1月18日 申请日期2011年10月14日 优先权日2011年10月14日
发明者滕正平 申请人:姚安农哈哈食用菌开发有限公司