技术领域：
本发明涉及的是一种农作物对壳寡糖的吸收量的确定方法。
背景技术：
：壳寡糖(chitosanoligosaccharide，缩写为COS)或称为甲壳低聚糖是壳聚糖(chitosan，聚1,4-β-葡萄糖胺)的降阶产物，其化学式为(C6H11O4N)n，结构式为：其中n<30，平均分子量<6000。壳寡糖已广泛应用于医药保健品等领域，在植物生长过程中，也有很好的作用。壳寡糖对农作物的作用机制不同于传统肥料或化肥，它通过诱导植物产生抗性蛋白植物抗毒素、几丁质酶、壳聚糖酶等，有效的防止真菌、细菌、病毒引起的病，还能激活植物生长的生理生化功能，提高出芽出苗率，促进植物生长改善瓜果蔬菜品味。因此壳寡糖作为生物农药和生物肥料，有抑菌、促生长和提升品质等作用。中国发明专利ZL201410065507.5“甲壳低聚糖在农作物栽培上的使用方法”就介绍了一种将一种“先将甲壳低聚糖以水溶解为溶液，再布施于农作物用作叶面肥；……在使用叶面肥前先将甲壳低聚糖进行固态或液态稀释后布施于农作物用作基肥”的方法。壳寡糖经农作物的叶面或根系吸收，再在农作物组织内参与各种生物反应，生成了多种结构形式的产物。而且在实际应用中，农作物所吸收的壳寡糖量很少，在植物体内含量仅为百万分之几。以上种种使人们难以测定农作物对壳寡糖的吸收量，对壳寡糖在农作物上的应用和研究带来困难。技术实现要素：针对上述不足，本发明所要解决的技术问题是在对农作物组织进行壳寡糖含量测定时，如何跟踪这些微量壳寡糖并予以定量，从而提供一种农作物对壳聚糖的吸收量的确定方法。本发明提供的农作物对壳寡糖的吸收量的确定方法，先在壳寡糖水溶液中按一个与壳寡糖质量确定比例的量加入示踪物质，所述示踪物质的加入量小于或等于与壳寡糖进行完全的配位反应所需要的量；在壳寡糖与示踪物质完成配位反应后，将所得含示踪物质壳寡糖水溶液布施于农作物；在农作物对壳寡糖的吸收完成后，对布施过含示踪物质壳寡糖的农作物作示踪物质的定量测定，同时对布施过未含示踪物质壳寡糖的对比农作物作示踪物质的定量测定；最后计算农作物对壳寡糖的吸收量，其计算方法是先计算农作物与对比农作物中示踪物质的含量差，再按示踪物质加入量与壳寡糖质量的比例计算农作物吸收壳寡糖的量。所述示踪物质是可以与壳寡糖中胺基以配位键结合生成配合物的物质，或者是包含于可以与壳寡糖中胺基以配位键结合生成配合物的化合物中的物质；同时该物质是检测时的目标物。所述物质或者化合物符合食品添加剂标准，并且该物质容易被定量检测。本发明提供的农作物对壳寡糖的吸收量的确定方法，利用壳寡糖的胺基可以与示踪物质进行配位反应的特性，在所施加的壳寡糖中定量加入示踪物质，通过对农作物中示踪物质的定量检测而确定其所吸收壳寡糖的量，从而不论壳寡糖被吸收的过程发生了什么样的反应、生成了什么样的物质，都可以准确地确定农作物吸收壳寡糖的量。与现有技术相比，本发明能够准确确定农作物对壳寡糖的吸收量，从而确定吸收率，有利于为将壳寡糖布施于农作物的相关研究和应用提供指引。所述示踪物质是Se，以亚硒酸形式与壳寡糖混合，经配位反应所得配合物为壳寡糖亚硒酸盐，表达式为COS-H2SeO3或COS-HSeO3。所述示踪物质是Zn，以氯化锌形式与壳寡糖混合，经配位反应所得配合物为壳寡糖Zn，表达式为COS-ZnCl2。所述示踪物质是Fe，以硫酸亚铁形式与壳寡糖混合，经配位反应所得配合物为壳寡糖Fe2+，表达式为COS-FeSO4。所述示踪物质是Cu，以硫酸铜形式与壳寡糖混合，经配位反应所得配合物为壳寡糖Cu2+，表达式为COS-CuSO4。将所得含示踪物质壳寡糖水溶液布施于农作物时以定量布施，用以计算农作物对壳寡糖的吸收率。具体实施方式1、施加壳寡糖的农作物是水稻壳寡糖喷雾液浓度以质量体积比为0.1%。试验田喷雾液配方：壳寡糖15gSeO20.5g水15L在水稻收割前1个月喷叶1次。收割后对大米中硒含量的检测（检测方法：GB5009.93-2010）结果是：试验田大米中硒含量为0.21mg/kg。对比田（即等量喷施未含硒壳寡糖溶液的种植田）大米中硒含量为0.03mg/kg。试验田大米中通过吸收壳寡糖获得的硒含量=0.21-0.03=0.18mg/kg。换算成SeO2含量=M（SeO2）÷M（Se）×0.18＝111÷79×0.18＝0.25mg/kg，式中M：分子量。相当于测出壳寡糖含量＝W（COS）÷W（SeO2）×0.25＝15÷0.5×0.25＝7.5mg/kg，式中W：质量。检测结果表明水稻喷施壳寡糖生物肥料后，每千克大米吸收了7.5毫克壳寡糖。农作物中吸收的壳寡糖量的计算通式为：农作物中吸收的壳寡糖量＝[W（COS）÷W（CPR）]×[M（CPR）÷M（R）]×（D﹣D0）式中：W（COS）：施加溶液中壳寡糖的含量，W（CPR）：施加溶液中示踪物质化合物的含量，M（CPR）：示踪物质化合物的分子量，M（R）：示踪物质的分子量，D：试验田收获的农作物中测出的示踪物质含量，D0：对比田收获的农作物中测出的示踪物质含量。2、施加壳寡糖的农作物是茶叶壳寡糖喷雾液浓度以质量体积比为0.2%。试验田喷雾液配方：壳寡糖30gSeO20.2g水15L在茶叶采摘前20天分别对试验田和对比田喷施加硒壳寡糖液和未加硒壳寡糖液。采摘后对茶叶成品检测Se含量（检测方法：GB/T21729-2008）结果分别是：试验田：0.06mg/kg对比田：0.32mg/kg计算：茶叶成品中中吸收的壳寡糖量＝[W（COS）÷W（CPR）]×[M（CPR）÷M（R）]×（D﹣D0）＝（30÷0.2）×（111÷79）×（0.32﹣0.06）＝54.8mg/kg。3、施加壳寡糖的农作物是青菜：壳寡糖喷雾液浓度以质量体积比为0.1％。试验田喷雾液配方：壳寡糖15gZnCl20.15g水15L在青菜收割前15天分别对试验田和对比田喷施加锌壳寡糖液和未加锌壳寡糖液。对收获的青菜检测Zn含量（GB/5009.14—2003），结果分别是：种植田：0.07mg/kg。检测田：0.41mg/kg。计算：青菜中壳寡糖含量＝[W（COS）÷W（CPR）]×[M（CPR）÷M（R）]×（D﹣D0）＝（15÷0.15）×（136÷65）×（0.41-0.07）＝21.34mg/kg。4、施加壳寡糖的农作物是青瓜：壳寡糖溶液浓度以质量体积比为0.2％。试验田溶液配方：壳寡糖30gCuSO40.15g水15L在青瓜收摘前20天分别对试验田和对比田浇施加铜壳寡糖液和未加铜壳寡糖液。对采摘的青瓜检测Cu含量（GB/T5009.13—2003），结果分别是：种植田：0.09mg/kg。检测田：0.41mg/kg。计算：青瓜中壳寡糖含量＝[W（COS）÷W（CPR）]×[M（CPR）÷M（R）]×（D﹣D0）＝（30÷0.15）×（160÷64）×（0.41-0.09）＝160mg/kg。5、施加壳寡糖的农作物是西红柿：壳寡糖溶液浓度以质量体积比为0.1％。试验田喷雾液配方：壳寡糖15gFeSO40.12g水15L对收获的西红柿检测Fe含量（GB/T5009.90—2003），结果分别是：种植田：0.04mg/kg。检测田：0.25mg/kg。计算：西红柿中壳寡糖含量＝[W（COS）÷W（CPR）]×[M（CPR）÷M（R）]×（D﹣D0）＝（15÷0.12）×（152÷56）×（0.25﹣0.04）＝50.81mg/kg。当前第1页1 2 3