1.一种牛大力悬浮细胞培养的快速繁殖方法,其特征在于,以开花后50~60天的牛大力果荚中取出的幼嫩子叶为培养材料,经诱导培养和继代培养获得继代愈伤组织,再经悬浮细胞培养获得稳定的牛大力悬浮细胞培养液。
2.如权利要求1所述的牛大力悬浮细胞培养的快速繁殖方法,其特征在于,培养材料的获得方法如下:选取开花后50~60d的牛大力果荚,在超净工作台上用棉花蘸取体积浓度为75%乙醇擦拭果荚,对果荚进行表面灭菌,然后小心剥开果荚,用灭菌的镊子夹取果荚里面的未成熟种子,置于无菌碟子或无菌滤纸上,再用无菌解剖刀切开种皮,用无菌镊子夹取子叶即得培养材料。
3.如权利要求1所述的牛大力悬浮细胞培养的快速繁殖方法,其特征在于,所述诱导培养的方法如下:将培养材料接种至诱导培养基上于黑暗条件、24-28℃下诱导培养20-30天得到诱导愈伤组织;
所述诱导培养基的配方为:MS+20mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT+0.5mg/L TDZ+0.2mg/LNAA+300mg/L PVP+500mg/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+5g/L琼脂。
4.如权利要求3所述的牛大力悬浮细胞培养的快速繁殖方法,其特征在于,所述继代培养的方法如下:将诱导愈伤组织转接至增殖培养基上于黑暗条件下进行继代培养2-4次,至获得继代愈伤组织,每次继代培养的时间为7-10天,培养温度为24-28℃;
所述增殖培养基的配方为:MS+1.0mg/L TDZ+0.5mg/L KT+0.2mg/L NAA+300mg/LPVP+200mg/L芦荟汁+30g/L蔗糖+5g/L琼脂。
5.如权利要求4所述的牛大力悬浮细胞培养的快速繁殖方法,其特征在于,所述悬浮细胞培养的方法如下:将2-5g继代愈伤组织接种至含有100-150ml液体培养基的三角瓶中,将三角瓶置于转动频率为90-100r/min、温度为28℃的恒温摇床上进行悬浮细胞培养,每10-15天转接培养一次,转接培养3-6次后,得到稳定的牛大力悬浮细胞培养液;
所述转接培养即将三角瓶中的悬浮液用灭菌后的150目尼龙网过滤,将滤液转接至含有100-150ml新的液体培养基的三角瓶中置于恒温摇床上继续培养;
所述液体培养基为MS培养基调整得到,其将MS培养基中的硝酸铵、硝酸钾、无水氯化钙、七水硫酸镁和四水硫酸锰的含量调整为硝酸铵300~500mg/L、硝酸钾2000~2500mg/L、无水氯化钙50~80mg/L、七水硫酸镁400~500mg/L、四水硫酸锰10~25mg/L,将磷酸二氢钾更换为磷酸氢二钠150~200mg/L,其余组分不变,然后再添加2,4-D 1~5mg/L、KT 0.5~0.75mg/L、TDZ 0.5~1mg/L、NAA0.2~0.5mg/L、PVP 200~300mg/L、葡萄糖25~30g/L、椰子汁100~150mg/L、茉莉酸甲酯10~200μmol/L,pH 5.8。
6.如权利要求5所述的牛大力悬浮细胞培养的快速繁殖方法,其特征在于,将得到的稳定的牛大力悬浮细胞培养液取2ml置于100-150ml新的液体培养基中培养10-15天进行扩繁培养,获得增殖后的悬浮细胞培养液。
7.如权利要求5所述的牛大力悬浮细胞培养的快速繁殖方法,其特征在于,所述液体培养基中茉莉酸甲酯的浓度为80-100μmol/L。
8.如权利要求5所述的牛大力悬浮细胞培养的快速繁殖方法,其特征在于,培养材料经诱导培养之前,先经过如下前处理:将培养材料采用经剪裁的玉米苞叶全包覆,并用细线固定,将玉米苞叶连同培养材料一起采用灭菌过的针扎2-4个孔,再将其置入装有前处理溶液的玻璃容器中,置于200-300高斯磁场中磁化处理2h,且在磁化处理的同时,播放轻音乐,且每播放30min之后暂停10min,播放音量控制在30-90db之间,磁化处理之后取出培养材料,用厨房纸擦干备用;
所述前处理溶液以磁化水为溶剂,配方为:0.5mg/L纳米氧化锌+0.1mg/L油菜素内酯+5g/L奶粉+1.5g/Lβ-葡聚糖+10mg/L生姜提取物。