一种用于昆虫蛋白质定量和示踪的N15稳定同位素标记方法与流程

技术特征：

1.一种用于昆虫蛋白质定量和示踪的N¹⁵稳定同位素标记方法，其特征在于：首先，利用酵母将N¹⁵无机盐转化成生物蛋白，当酵母培养代数达到6代以上，其提取蛋白98％以上都是N¹⁵的蛋白，再将酵母磨碎，制成含N¹⁵的菌体蛋白粉末，利用含N¹⁵的菌体蛋白粉末取代常规的N¹⁴蛋白，用于培养多种昆虫，为昆虫蛋白质标记定量和示踪提供特异性的N¹⁵同位素标记；其包括以下步骤：

1)按照以下配方配制只含N¹⁵的无机培养基：

在1升的蒸馏水中，包含以下按质量百分比计的组分：

2)使用高压灭菌锅，将步骤1)中的培养基灭菌；

3)待步骤2)中的培养基冷却至室温后，挑取单菌落酵母菌接种在培养基中进行培养；

4)待酵母菌培养代数达到6代以上，取出培养基，室温中静置至酵母菌体完全沉底，倒出液体培养基并舍弃，得到酵母菌体；

5)用已灭菌的生理盐水或缓冲液洗涤酵母菌体，并使用布氏漏斗抽滤；

6)收集到的菌体称重后，与缓冲液以1:1～1.5的比例混合成新的菌液，缓慢加入到液氮中，使得菌液进入液氮中形成小颗粒，将菌体液氮颗粒加入高速破碎机中破碎，得到粉末状的菌体；

7)将菌体粉末倒出，用水浴融化后，再次注入到液氮中，重复步骤6)；

8)将步骤7)中的菌体粉末融化后，放入高速离心机中离心，离心后，上清液含有酵母菌蛋白质，收集上清液，舍弃沉淀；

9)含有蛋白质的液体装入透析袋中，使用流动水透析，洗脱其中的无机盐；

10)透析后的液体先预冻，凝结成固体后，再放入冷冻干燥机中干燥，得到菌体蛋白粉末；

11)N¹⁵昆虫饲料的配制：将步骤10)中制成的菌体蛋白粉末作为饲料的基本蛋白源，取代常规的N¹⁴蛋白用于培养，再加入不含N元素的糖类和其它无机盐物质，制成最终的N¹⁵昆虫饲料。

2.根据权利要求1所述的一种用于昆虫蛋白质定量和示踪的N¹⁵稳定同位素标记方法，其特征在于：在步骤2)中，酵母将培养基中的N¹⁵无机盐转化成生物蛋白，当酵母培养代数达到6代以上，其提取蛋白98％以上都是N¹⁵的蛋白，而实际操作中可以根据最终配制的昆虫饲料选择不同的酵母菌和只含N¹⁵的无机培养基配方。

3.根据权利要求1所述的一种用于昆虫蛋白质定量和示踪的N¹⁵稳定同位素标记方法，其特征在于：在步骤11)中，最终制备的饲料中N元素全部来源于步骤4)至步骤10)中经提取纯化后菌体蛋白粉末的N¹⁵，利用N¹⁵蛋白粉末取代常规的N¹⁴蛋白用于培养昆虫，为昆虫蛋白质标记定量和示踪提供特异性的N¹⁵同位素标记，而无机盐和饲料的具体制作条件要根据昆虫种类的生长特征而定。