本发明公开了一种用于治理薇甘菊微生物制剂的制备方法，属于外来入侵有害生物综合防控的技术领域。
背景技术：
薇甘菊又名小花假泽兰，菊科假泽兰属植物，多年生草质或稍木质藤本，具蔓生茎，原产中、南美洲，现广泛分布于东南亚，是危害经济作物和森林植被的主要害草。薇甘菊生命力强，生长快，无性繁殖能力强，种子产量高且传播速度快，种子数量多而小，借助风力、动物、昆虫以及人类活动进行远距离传播，茎比叶具有更强的强光适应能力和光合能力，但茎的这些光合作用的具体作用仍不清楚，茎节和节间都能生根，每个节的叶腋都可长出一对新枝，形成新植株；薇甘菊生长能快速覆盖生境，遇草覆盖，遇树则攀援，不仅能使其他植物失去光合作用导致死亡，且可以通过释放化感物质，抑制和危害其他植物生长，并能降低土壤肥力有效性。
目前薇甘菊的防治方法有人工清除法、化学药剂防治等，人工清除法是利用人工清除使短期内薇甘菊的覆盖度减少，对野外大面积的森林，人工清除不但不能减轻危害，反而会加重，如果不能每年清理2～3次以上，人工清除就会造成薇甘菊生长更加旺盛，危害更大，人工清除薇甘菊在3个月后恢复生长了80%，6个月后恢复生长100%。化学药剂防治主要是利用25%森泰和森草净（70%嘧磺隆粉剂）按一定量对薇甘菊施药进行防治，但是施药很难被薇甘菊充分吸收，效果缓慢、成本高、防治效率低且易对其他植物产生危害。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题：针对化学药剂效果缓慢、成本高，防治效率低且易对其他植物产生危害的问题，本发明以牛粪、沼液、废弃香菇菌棒作为菌源，以泥煤作为营养物，通过发酵扩大种群，利用n-甲基-n-亚硝基脲作为诱导剂，以新鲜薇甘菊茎的榨汁液作为筛选营养物，获得目标混合菌，再通过富集培养，获得以新鲜薇甘菊茎为营养物的菌种，随后使用煅烧后葡萄糖浸泡过的蛭石作为载体，吸附微生物，使用海藻酸钠进行包裹，从而制得用于治理薇甘菊微生物制剂，本发明制得的微生物制剂中的微生物以薇甘菊的茎作为营养物，切断薇甘菊的无性繁殖及种子的产生，治理薇甘菊效果好，有效解决了化学药剂效果缓慢、成本高，防治效率低且易对其他植物产生危害的问题。
为解决上述技术问题，本发明采用如下所述的技术方案是：
（1）按重量份数计，取50～60份牛粪、40～50份泥煤、14～16份沼液及6～9份废弃香菇菌棒，放入混合机中，以180r/min搅拌30～40min，再将搅拌混合物铺撒于水泥池中，铺洒厚度为8～13cm，使用稻草覆盖混合物，覆盖厚度为2～4cm，覆盖2～3天；
（2）按质量比1:50:200～1:50:300，取n-甲基-n-亚硝基脲、新鲜薇甘菊茎和质量分数为2％葡萄糖溶液放入榨汁机中进行榨汁，收集榨汁液；在上述稻草覆盖混合物结束后，撤去稻草，自然通风13～19天，在自然通风的时间段内隔32～34h以120r/min搅拌撤去稻草后的混合物10～15min，同时隔4～6天向撤除稻草后的混合物中加入与步骤（1）混合物中沼液等质量的榨汁液；
（3）在上述自然通风结束后，按质量比1:5，取上述通风后的混合物与无菌水放入搅拌机中，以150r/min搅拌30～50min，再使用纱布对搅拌混合物进行过滤，收集过滤液；
（4）按重量份数计，取40～45份酵母浸膏、33～35份牛肉膏、24～26份琼脂、13～15份无菌水、12～14份葡萄糖、6～8份甘露醇、1～2份磷酸氢二钾及0.8～1.6份磷酸二氢钾，搅拌均匀，并杀菌消毒，得培养基，按质量比1:6～1:8，将上述过滤液与培养基混合均匀，并将培养基置于恒温培养箱中，控制温度为28～35℃，培养23～26h，培养结束后将培养基取出，使用无菌水以10ml/s淋洗培养基表面至其表面无菌丝，收集淋洗液，备用；
（5）取蛭石放入煅烧炉中，设定温度为800℃，煅烧1～2h，自然冷却至室温，收集煅烧物，将煅烧物浸泡于质量分数为5％葡萄糖溶液中浸泡2～4h，再进行过滤，收集滤渣放入风干机中风干，将风干后的滤渣放入粉碎机中粉碎，过200目筛，收集过筛粉末，得载体；
（6）按质量比1:8，将上述载体与步骤（4）备用的淋洗液混合均匀，静置14～16h，再加入上述载体质量2～4％的海藻酸钠，以140r/min搅拌50～70min，随后过滤，将过滤物放入冷冻干燥机中冷冻干燥，收集冷冻干燥物，即可得用于治理薇甘菊微生物制剂。
本发明的应用方法是：将本发明所得的微生物制剂与水按1:1000～1:1500的比例混合5～8分钟，得到的药剂装入喷桶中，均匀将药剂喷洒在薇甘菊上，喷洒量为30～50l/亩，喷洒后即可。经检验，本发明所得的微生物制剂能有效的灭除薇甘菊，喷洒7～12天后，薇甘菊的去除率为95％～100％，10～13个月薇甘菊恢复率≦2％，同时，还增加了原区域的植被覆盖率，改造了受危害的区域。
本发明与其他方法相比，有益技术效果是：
（1）本发明所得的微生物制剂对灭除薇甘菊的效率高，减低用药量及防治成本，方便简单易于推广；
（2）本发明所得的微生物制剂无刺激性气味，且不易对其他植物产生危害，对使用人员无危害。
具体实施方式
按重量份数计，取50～60份牛粪、40～50份泥煤、14～16份沼液及6～9份废弃香菇菌棒，放入混合机中，以180r/min搅拌30～40min，再将搅拌混合物铺撒于水泥池中，铺洒厚度为8～13cm，使用稻草覆盖混合物，覆盖厚度为2～4cm，覆盖2～3天；按质量比1:50:200～1:50:300，取n-甲基-n-亚硝基脲、新鲜薇甘菊茎和质量分数为2％葡萄糖溶液放入榨汁机中进行榨汁，收集榨汁液；在上述稻草覆盖混合物结束后，撤去稻草，自然通风13～19天，在自然通风的时间段内隔32～34h以120r/min搅拌撤去稻草后的混合物10～15min，同时隔4～6天向撤除稻草后的混合物中加入与混合物中沼液等质量的榨汁液；在上述自然通风结束后，按质量比1:5，取上述通风后的混合物与无菌水放入搅拌机中，以150r/min搅拌30～50min，再使用纱布对搅拌混合物进行过滤，收集过滤液；按重量份数计，取40～45份酵母浸膏、33～35份牛肉膏、24～26份琼脂、13～15份无菌水、12～14份葡萄糖、6～8份甘露醇、1～2份磷酸氢二钾及0.8～1.6份磷酸二氢钾，搅拌均匀，并杀菌消毒，得培养基，按质量比1:6～1:8，将上述过滤液与培养基混合均匀，并将培养基置于恒温培养箱中，控制温度为28～35℃，培养23～26h，培养结束后将培养基取出，使用无菌水以10ml/s淋洗培养基表面至其表面无菌丝，收集淋洗液，备用；取蛭石放入煅烧炉中，设定温度为800℃，煅烧1～2h，自然冷却至室温，收集煅烧物，将煅烧物浸泡于质量分数为5％葡萄糖溶液中浸泡2～4h，再进行过滤，收集滤渣放入风干机中风干，将风干后的滤渣放入粉碎机中粉碎，过200目筛，收集过筛粉末，得载体；按质量比1:8，将上述载体与备用的淋洗液混合均匀，静置14～16h，再加入上述载体质量2～4％的海藻酸钠，以140r/min搅拌50～70min，随后过滤，将过滤物放入冷冻干燥机中冷冻干燥，收集冷冻干燥物，即可得用于治理薇甘菊微生物制剂。
实例1
按重量份数计，取50份牛粪、40份泥煤、14份沼液及6份废弃香菇菌棒，放入混合机中，以180r/min搅拌30min，再将搅拌混合物铺撒于水泥池中，铺洒厚度为8cm，使用稻草覆盖混合物，覆盖厚度为2m，覆盖2天；按质量比1:50:200，取n-甲基-n-亚硝基脲、新鲜薇甘菊茎和质量分数为2％葡萄糖溶液放入榨汁机中进行榨汁，收集榨汁液；在上述稻草覆盖混合物结束后，撤去稻草，自然通风13天，在自然通风的时间段内隔32h以120r/min搅拌撤去稻草后的混合物10min，同时隔4天向撤除稻草后的混合物中加入与混合物中沼液等质量的榨汁液；在上述自然通风结束后，按质量比1:5，取上述通风后的混合物与无菌水放入搅拌机中，以150r/min搅拌30min，再使用纱布对搅拌混合物进行过滤，收集过滤液；按重量份数计，取40份酵母浸膏、33份牛肉膏、24份琼脂、13份无菌水、12份葡萄糖、6份甘露醇、1份磷酸氢二钾及0.8份磷酸二氢钾，搅拌均匀，并杀菌消毒，得培养基，按质量比1:6，将上述过滤液与培养基混合均匀，并将培养基置于恒温培养箱中，控制温度为28℃，培养23h，培养结束后将培养基取出，使用无菌水以10ml/s淋洗培养基表面至其表面无菌丝，收集淋洗液，备用；取蛭石放入煅烧炉中，设定温度为800℃，煅烧1h，自然冷却至室温，收集煅烧物，将煅烧物浸泡于质量分数为5％葡萄糖溶液中浸泡2h，再进行过滤，收集滤渣放入风干机中风干，将风干后的滤渣放入粉碎机中粉碎，过200目筛，收集过筛粉末，得载体；按质量比1:8，将上述载体与备用的淋洗液混合均匀，静置14h，再加入上述载体质量2％的海藻酸钠，以140r/min搅拌50min，随后过滤，将过滤物放入冷冻干燥机中冷冻干燥，收集冷冻干燥物，即可得用于治理薇甘菊微生物制剂。
本发明的应用方法是：将本发明所得的微生物制剂与水按1:1000的比例混合5分钟，得到的药剂装入喷桶中，均匀将药剂喷洒在薇甘菊上，喷洒量为30l/亩，喷洒后即可。经检验，本发明所得的微生物制剂能有效的灭除薇甘菊，喷洒7天后，薇甘菊的去除率为95％，10个月薇甘菊恢复率为2％，同时，还增加了原区域的植被覆盖率，改造了受危害的区域。
实例2
按重量份数计，取60份牛粪、50份泥煤、16份沼液及9份废弃香菇菌棒，放入混合机中，以180r/min搅拌40min，再将搅拌混合物铺撒于水泥池中，铺洒厚度为13cm，使用稻草覆盖混合物，覆盖厚度为4cm，覆盖3天；按质量比1:50:300，取n-甲基-n-亚硝基脲、新鲜薇甘菊茎和质量分数为2％葡萄糖溶液放入榨汁机中进行榨汁，收集榨汁液；在上述稻草覆盖混合物结束后，撤去稻草，自然通风19天，在自然通风的时间段内隔34h以120r/min搅拌撤去稻草后的混合物15min，同时隔6天向撤除稻草后的混合物中加入与混合物中沼液等质量的榨汁液；在上述自然通风结束后，按质量比1:5，取上述通风后的混合物与无菌水放入搅拌机中，以150r/min搅拌50min，再使用纱布对搅拌混合物进行过滤，收集过滤液；按重量份数计，取45份酵母浸膏、35份牛肉膏、26份琼脂、15份无菌水、14份葡萄糖、8份甘露醇、2份磷酸氢二钾及1.6份磷酸二氢钾，搅拌均匀，并杀菌消毒，得培养基，按质量比1:8，将上述过滤液与培养基混合均匀，并将培养基置于恒温培养箱中，控制温度为35℃，培养26h，培养结束后将培养基取出，使用无菌水以10ml/s淋洗培养基表面至其表面无菌丝，收集淋洗液，备用；取蛭石放入煅烧炉中，设定温度为800℃，煅烧2h，自然冷却至室温，收集煅烧物，将煅烧物浸泡于质量分数为5％葡萄糖溶液中浸泡4h，再进行过滤，收集滤渣放入风干机中风干，将风干后的滤渣放入粉碎机中粉碎，过200目筛，收集过筛粉末，得载体；按质量比1:8，将上述载体与备用的淋洗液混合均匀，静置16h，再加入上述载体质量4％的海藻酸钠，以140r/min搅拌70min，随后过滤，将过滤物放入冷冻干燥机中冷冻干燥，收集冷冻干燥物，即可得用于治理薇甘菊微生物制剂。
本发明的应用方法是：将本发明所得的微生物制剂与水按1:1500的比例混合8分钟，得到的药剂装入喷桶中，均匀将药剂喷洒在薇甘菊上，喷洒量为50l/亩，喷洒后即可。经检验，本发明所得的微生物制剂能有效的灭除薇甘菊，喷洒12天后，薇甘菊的去除率为100％，13个月薇甘菊恢复率为0％，同时，还增加了原区域的植被覆盖率，改造了受危害的区域。
实例3
按重量份数计，取55份牛粪、45份泥煤、15份沼液及7份废弃香菇菌棒，放入混合机中，以180r/min搅拌35min，再将搅拌混合物铺撒于水泥池中，铺洒厚度为10cm，使用稻草覆盖混合物，覆盖厚度为3cm，覆盖3天；按质量比1:50:250，取n-甲基-n-亚硝基脲、新鲜薇甘菊茎和质量分数为2％葡萄糖溶液放入榨汁机中进行榨汁，收集榨汁液；在上述稻草覆盖混合物结束后，撤去稻草，自然通风15天，在自然通风的时间段内隔33h以120r/min搅拌撤去稻草后的混合物14min，同时隔5天向撤除稻草后的混合物中加入与混合物中沼液等质量的榨汁液；在上述自然通风结束后，按质量比1:5，取上述通风后的混合物与无菌水放入搅拌机中，以150r/min搅拌35min，再使用纱布对搅拌混合物进行过滤，收集过滤液；按重量份数计，取42份酵母浸膏、34份牛肉膏、25份琼脂、14份无菌水、13份葡萄糖、7份甘露醇、1份磷酸氢二钾及1.2份磷酸二氢钾，搅拌均匀，并杀菌消毒，得培养基，按质量比1:7，将上述过滤液与培养基混合均匀，并将培养基置于恒温培养箱中，控制温度为30℃，培养25h，培养结束后将培养基取出，使用无菌水以10ml/s淋洗培养基表面至其表面无菌丝，收集淋洗液，备用；取蛭石放入煅烧炉中，设定温度为800℃，煅烧2h，自然冷却至室温，收集煅烧物，将煅烧物浸泡于质量分数为5％葡萄糖溶液中浸泡3h，再进行过滤，收集滤渣放入风干机中风干，将风干后的滤渣放入粉碎机中粉碎，过200目筛，收集过筛粉末，得载体；按质量比1:8，将上述载体与备用的淋洗液混合均匀，静置15h，再加入上述载体质量3％的海藻酸钠，以140r/min搅拌60min，随后过滤，将过滤物放入冷冻干燥机中冷冻干燥，收集冷冻干燥物，即可得用于治理薇甘菊微生物制剂。
本发明的应用方法是：将本发明所得的微生物制剂与水按1:1250的比例混合6.5分钟，得到的药剂装入喷桶中，均匀将药剂喷洒在薇甘菊上，喷洒量为40l/亩，喷洒后即可。经检验，本发明所得的微生物制剂能有效的灭除薇甘菊，喷洒9.5天后，薇甘菊的去除率为97.5％，12个月薇甘菊恢复率为0.2％，同时，还增加了原区域的植被覆盖率，改造了受危害的区域。