本发明涉及甘薯试管苗低温保存领域，尤其涉及一种甘薯茎尖分生组织培养及试管苗低温保存的方法。
背景技术：
随着现代科学技术的发展和高产优质品种的广泛推广，作物品种日趋单一化并导致了基因资源的迅速缩小和衰竭。广泛收集种质资源，并加以妥善保存和利用，已成为种质资源工作的当务之急，也是一项十分重要的基础工作。
甘薯顶端分生组织经过组织培养脱毒处理之后，如何延长试管苗的寿命，解决无性繁殖作物的保种问题成为研究热点，开发出这样的保存条件和保存技术可以为建立甘薯无毒试管苗贮存提供技术依据。
技术实现要素：
本发明旨在解决现有技术的不足，而提供一种甘薯茎尖分生组织培养及试管苗低温保存的方法。
本发明为实现上述目的，采用以下技术方案：
一种甘薯茎尖分生组织培养及试管苗低温保存的方法，具体步骤为：
(1)甘薯茎尖分生组织处理
剪取甘薯苗顶芽，去掉叶片，用0.1％洗衣粉水浸泡15-20min，接着置于自来水龙头下冲洗50min，随后在超净工作台上用70％乙醇浸泡20s，用5％安替福尼溶液消毒8-9min，最后用无菌水冲洗5-10次；
(2)接种培养成苗
在体视显微镜下，剥出甘薯分生组织细胞圆锥体并附带1-2个叶原基，切取芽的长度为0.3-0.35mm，放在ms+kt2mg/l+iaa0.5mg/l+0.5％琼脂固化的培养基上培养10-12天，然后将发绿后的芽转移到不加激素的ms培养基上培养成苗；
(3)获取种质保存材料
接种培养后的苗培养2-3个月，茎尖苗成株后，经过切段繁殖，作为种质保存材料；
(4)试管苗低温保存
将种质保存材料上的茎尖苗切成单一节段，接种在加入生长延缓剂并且经过灭菌处理好的基本培养基ms上培养，基本培养基的ph为5.7-5.8，培养温度为28℃，光照强度为3000-4000lx，光照时长为14-15h/d；然后当幼苗长成3-4片叶，2-3cm高时，转移到温度为17-18℃，光照强度为1500lx，光照时长为8h/d的条件下作为种质长期保存。
试管苗低温保存过程中，加入生长延缓剂的基本培养基的处理方法是将10ml培养基装入18×150mm的圆底试管中，用厚度为0.01mm的铝箔二层封口，经高压灭菌备用。
试管苗低温保存过程中，生长延缓剂为脱落酸、膦甘酸和矮壮素中的一种。
本发明的有益效果是：本发明提供了一种甘薯茎尖分生组织培养及试管苗低温保存的方法，通过在培养基上加入生长延缓剂，可以将甘薯试管苗保存时间延长，存活率提高，为建立甘薯无毒试管苗贮存提供了技术依据。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明：
实施例1：
一种甘薯茎尖分生组织培养及试管苗低温保存的方法，具体步骤为：
(1)甘薯茎尖分生组织处理
剪取甘薯苗顶芽，去掉叶片，用0.1％洗衣粉水浸泡15min，接着置于自来水龙头下冲洗50min，随后在超净工作台上用70％乙醇浸泡20s，用5％安替福尼溶液消毒8min，最后用无菌水冲洗5次；
(2)接种培养成苗
在体视显微镜下，剥出甘薯分生组织细胞圆锥体并附带1个叶原基，切取芽的长度为0.3mm，放在ms+kt2mg/l+iaa0.5mg/l+0.5％琼脂固化的培养基上培养10天，然后将发绿后的芽转移到不加激素的ms培养基上培养成苗；
(3)获取种质保存材料
接种培养后的苗培养2个月，茎尖苗成株后，经过切段繁殖，作为种质保存材料；
(4)试管苗低温保存
将种质保存材料上的茎尖苗切成单一节段，接种在加入脱落酸并且经过灭菌处理好的基本培养基ms上培养，基本培养基的ph为5.7，培养温度为28℃，光照强度为3000lx，光照时长为14h/d；然后当幼苗长成3片叶，2cm高时，转移到温度为17℃，光照强度为1500lx，光照时长为8h/d的条件下作为种质长期保存。
试管苗低温保存过程中，加入脱落酸的基本培养基的处理方法是将10ml培养基装入18×150mm的圆底试管中，用厚度为0.01mm的铝箔二层封口，经高压灭菌备用。
实施例2：
一种甘薯茎尖分生组织培养及试管苗低温保存的方法，具体步骤为：
(1)甘薯茎尖分生组织处理
剪取甘薯苗顶芽，去掉叶片，用0.1％洗衣粉水浸泡20min，接着置于自来水龙头下冲洗50min，随后在超净工作台上用70％乙醇浸泡20s，用5％安替福尼溶液消毒9min，最后用无菌水冲洗10次；
(2)接种培养成苗
在体视显微镜下，剥出甘薯分生组织细胞圆锥体并附带2个叶原基，切取芽的长度为0.35mm，放在ms+kt2mg/l+iaa0.5mg/l+0.5％琼脂固化的培养基上培养12天，然后将发绿后的芽转移到不加激素的ms培养基上培养成苗；
(3)获取种质保存材料
接种培养后的苗培养3个月，茎尖苗成株后，经过切段繁殖，作为种质保存材料；
(4)试管苗低温保存
将种质保存材料上的茎尖苗切成单一节段，接种在加入膦甘酸并且经过灭菌处理好的基本培养基ms上培养，基本培养基的ph为5.8，培养温度为28℃，光照强度为4000lx，光照时长为15h/d；然后当幼苗长成4片叶，3cm高时，转移到温度为18℃，光照强度为1500lx，光照时长为8h/d的条件下作为种质长期保存。
试管苗低温保存过程中，加入膦甘酸的基本培养基的处理方法是将10ml培养基装入18×150mm的圆底试管中，用厚度为0.01mm的铝箔二层封口，经高压灭菌备用。
实施例3：
一种甘薯茎尖分生组织培养及试管苗低温保存的方法，具体步骤为：
(1)甘薯茎尖分生组织处理
剪取甘薯苗顶芽，去掉叶片，用0.1％洗衣粉水浸泡18min，接着置于自来水龙头下冲洗50min，随后在超净工作台上用70％乙醇浸泡20s，用5％安替福尼溶液消毒9min，最后用无菌水冲洗8次；
(2)接种培养成苗
在体视显微镜下，剥出甘薯分生组织细胞圆锥体并附带2个叶原基，切取芽的长度为0.3mm，放在ms+kt2mg/l+iaa0.5mg/l+0.5％琼脂固化的培养基上培养11天，然后将发绿后的芽转移到不加激素的ms培养基上培养成苗；
(3)获取种质保存材料
接种培养后的苗培养3个月，茎尖苗成株后，经过切段繁殖，作为种质保存材料；
(4)试管苗低温保存
将种质保存材料上的茎尖苗切成单一节段，接种在加入矮壮素并且经过灭菌处理好的基本培养基ms上培养，基本培养基的ph为5.8，培养温度为28℃，光照强度为3500lx，光照时长为15h/d；然后当幼苗长成3片叶，3cm高时，转移到温度为18℃，光照强度为1500lx，光照时长为8h/d的条件下作为种质长期保存。
试管苗低温保存过程中，加入矮壮素的基本培养基的处理方法是将10ml培养基装入18×150mm的圆底试管中，用厚度为0.01mm的铝箔二层封口，经高压灭菌备用。
本发明提供了一种甘薯茎尖分生组织培养及试管苗低温保存的方法，通过在培养基上加入生长延缓剂，可以将甘薯试管苗保存时间延长，存活率提高，为建立甘薯无毒试管苗贮存提供了技术依据。
上面结合具体实施例对本发明进行了示例性描述，显然本发明具体实现并不受上述方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种改进，或未经改进直接应用于其它场合的，均在本发明的保护范围之内。