本发明涉及植物组培繁育领域，具体涉及一种生产郁金香组培苗的方法。
背景技术：
郁金香为百合科郁金香属的草本植物。多年生球根花卉，花型多样、花色丰富、株型挺拔，深受人们喜爱。郁金香的生长期适温为5-20℃，最佳温度为15-18℃，植株的生育温度应保持在0-25℃，郁金香较喜肥，土壤酸碱度以中性偏碱为好，郁金香自然繁殖速度慢，繁殖系数低，并且其种球病毒易积累使种球退化或逐渐死亡，为了解决这一问题郁金香植物组织培养技术迅速发展。但是组培苗鳞茎小、成活率低成为阻碍郁金香组培快繁的一个难题。
技术实现要素：
针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种生产郁金香组培苗的方法，该种生产方法能获得鳞茎较大、生长迅速、植株健壮的郁金香组培苗，有效地提高组培苗之后的移栽成活率。
为了达到上述目的，本发明通过以下技术方案来实现的：
一种生产郁金香组培苗的方法，按照以下步骤进行：
(1)外植体消毒：选取健康无病的郁金香花种子作为外植体，将种子经流水冲洗2-4min后，在超净工作台上用体积百分数为75％的乙醇溶液表面灭菌1-3min，无菌水冲洗3次，用质量百分数为0.1-0.3％的hgcl2溶液灭菌4-6min，无菌水冲洗4-6次；
(2)郁金香花提取液的制备：取适量新鲜郁金香花瓣加入到开放的提取罐中，加入水加热到煮沸状态煎煮40-60min，叶片与水的料液体积比为1:2-4，之后倒出提取液至液体存储罐中；再向提取罐中加入水加热到煮沸状态煎煮1-2h，且叶片与水的料液体积比为1:3-5，倒出提取液至所述液体存储罐中，最后浓缩液体存储罐中的提取液至原体积的1/5-1/3，得郁金香花提取液；
(3)接种诱导：将步骤(1)消毒后的外植体接种于固体培养基上进行愈伤诱导，促使发芽成苗，其中固体培养基以1/2ms为基本培养基，并添加30-50g/l郁金香花提取液，另外再在固体培养基中添加10-20g/l的nh4hco3调节ph值至7.0-7.5；
(4)增值继代培养：切取步骤(2)中形成的幼苗茎段2-4cm，转入到继代固体培养基中，直至茎段增殖，得丛生芽，其中固体培养基以1/2b5为基本培养基，并添加20-30g/l郁金香花提取液，另外再在固体培养基中添加10-20g/l的nh4hco3调节ph值至7.0-7.5；
(5)生根培养：待所述丛生芽的单芽长至3.0-5.0cm时，将郁金香组培苗移植至生根培养基中，其培养基以1/2ms为基本培养基，并添加30-40g/l郁金香花提取液，另外再在固体培养基中添加10-20g/l的nh4hco3调节ph值至7.0-7.5。
进一步地，所述接种诱导的固体培养基中另外还添加0.4-0.6mg/lnaa、0.2-0.4mg/l6-ba及15-25g/l蔗糖。
进一步地，所述接种诱导培养的环境条件为：室内温度为10±2℃，室内光照强度为1000-1200lx，光照时间设定为12±1h/d。
进一步地，所述增值继代培养的固体培养基中另外还添加0.4-0.6mg/lnaa、0.6-0.8mg/l6-ba、25-35g/l蔗糖及琼脂4.0～6.0g/l。
进一步地，所述增值继代培养的环境条件为：室内温度为15±2℃，室内光照强度为1000-1500lx，光照时间设定为12±1h/d。
进一步地，所述生根培养的固体培养基中还另外添加0.2-0.4mg/liba、0.4-0.6mg/lnaa、20-30g/l甘露醇、30-40g/l蔗糖以及3.0-5.0g/l琼脂。
进一步地，所述生根培养的环境条件为：室内温度为8-15℃，室内光照强度为1000-2000lx，光照时间设定为8-12h/d。
更进一步地，所述生根培养的环境条件为：室内温度为13±1℃，室内光照强度为1200-1400lx，光照时间设定为10±1h/d。
本发明具有如下的有益效果：
(1)本发明大大缩短了郁金香的育苗周期，节省了育苗材料，克服了传统郁金香育苗方法中存在的育苗所需材料多、周期长等问题，大大降低了生产成本，提高了生产效率，解决了目前郁金香种植成活率低、繁殖周期长、品质退化等问题；
(2)本发明以郁金香花提取液作为营养添加剂，科学合理地选择培养基和培养液，使其具有种苗繁殖快、移栽成活率高、能获得鳞茎较大的优点，且种苗繁殖不受季节的影响，一年四季都可培育花卉，同时解决了科学研究选育的良种应用的问题，以往良种生产单纯依赖建设种子园的方法，采用该方法节约了土地、经费以及解决了种子园投产周期长的问题，推广应用前景好；
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的具体实施方式作进一步描述，以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。
实施例1
一种生产郁金香组培苗的方法，按照以下步骤进行：
(1)外植体消毒：先选取健康无病的郁金香花种子作为外植体，将种子经流水冲洗2min后，在超净工作台上用体积百分数为75％的乙醇溶液表面灭菌1min，无菌水冲洗3次，用质量百分数为0.1％的hgcl2溶液灭菌4min，无菌水冲洗4次；
(2)郁金香花提取液的制备：取约200g新鲜郁金香花瓣加入到开放的提取罐中，加入水加热到煮沸状态煎煮40min，叶片与水的料液体积比为1:2，之后倒出提取液至液体存储罐中；再向提取罐中加入水加热到煮沸状态煎煮1h，且叶片与水的料液体积比为1:3，倒出提取液至所述液体存储罐中，最后浓缩液体存储罐中的提取液至原体积的1/5，得郁金香花提取液约27g；
(3)接种诱导：将步骤(1)消毒后的外植体接种于固体培养基上进行愈伤诱导，促使发芽成苗，其中固体培养基以1/2ms为基本培养基，并添加30g/l郁金香花提取液，另外再在固体培养基中添加10g/l的nh4hco3调节ph值至7.0；
该固体培养基中另外还添加0.4mg/lnaa、0.2mg/l6-ba及15g/l蔗糖；且接种诱导培养的环境条件为：室内温度为8℃，室内光照强度为1000lx，光照时间设定为11h/d；
(4)增值继代培养：切取步骤(2)中形成的幼苗茎段2cm，转入到继代固体培养基中，直至茎段增殖，得丛生芽，其中固体培养基以1/2b5为基本培养基，并添加20g/l郁金香花提取液，另外再在固体培养基中添加10g/l的nh4hco3调节ph值至7.0；
该固体培养基中另外还添加0.4mg/lnaa、0.6mg/l6-ba、25g/l蔗糖及琼脂4.0g/l；且增值继代培养的环境条件为：室内温度为13℃，室内光照强度为1000lx，光照时间设定为11h/d；
(5)生根培养：待所述丛生芽的单芽长至3.0cm时，将郁金香组培苗移植至生根培养基中，其培养基以1/2ms为基本培养基，并添加30g/l郁金香花提取液，另外再在固体培养基中添加10g/l的nh4hco3调节ph值至7.0；
该固体培养基中还另外添加0.2mg/liba、0.4mg/lnaa、20g/l甘露醇、30g/l蔗糖以及3.0g/l琼脂；且生根培养的环境条件为：室内温度为8℃，室内光照强度为1000lx，光照时间设定为8h/d。
实施例2
一种生产郁金香组培苗的方法，按照以下步骤进行：
(1)外植体消毒：先选取健康无病的郁金香花种子作为外植体，将种子经流水冲洗3min后，在超净工作台上用体积百分数为75％的乙醇溶液表面灭菌2min，无菌水冲洗3次，用质量百分数为0.2％的hgcl2溶液灭菌5min，无菌水冲洗5次；
(2)郁金香花提取液的制备：取300g新鲜郁金香花瓣加入到开放的提取罐中，加入水加热到煮沸状态煎煮50min，叶片与水的料液体积比为1:3，之后倒出提取液至液体存储罐中；再向提取罐中加入水加热到煮沸状态煎煮1.5h，且叶片与水的料液体积比为1:4，倒出提取液至所述液体存储罐中，最后浓缩液体存储罐中的提取液至原体积的1/4，得郁金香花提取液43g；
(3)接种诱导：将步骤(1)消毒后的外植体接种于固体培养基上进行愈伤诱导，促使发芽成苗，其中固体培养基以1/2ms为基本培养基，并添加40g/l郁金香花提取液，另外再在固体培养基中添加15g/l的nh4hco3调节ph值至7.2；
该固体培养基中另外还添加0.5mg/lnaa、0.3mg/l6-ba及20g/l蔗糖；且接种诱导培养的环境条件为：室内温度为10℃，室内光照强度为1100lx，光照时间设定为12h/d；
(4)增值继代培养：切取步骤(2)中形成的幼苗茎段3cm，转入到继代固体培养基中，直至茎段增殖，得丛生芽，其中固体培养基以1/2b5为基本培养基，并添加25g/l郁金香花提取液，另外再在固体培养基中添加15g/l的nh4hco3调节ph值至7.2；
该固体培养基中另外还添加0.5mg/lnaa、0.7mg/l6-ba、30g/l蔗糖及琼脂5.0g/l；且增值继代培养的环境条件为：室内温度为15℃，室内光照强度为1200lx，光照时间设定为12h/d；
(5)生根培养：待所述丛生芽的单芽长至4.0cm时，将郁金香组培苗移植至生根培养基中，其培养基以1/2ms为基本培养基，并添加35g/l郁金香花提取液，另外再在固体培养基中添加15g/l的nh4hco3调节ph值至7.2；
该固体培养基中还另外添加0.3mg/liba、0.5mg/lnaa、25g/l甘露醇、35g/l蔗糖以及4.0g/l琼脂；且生根培养的环境条件为：室内温度为12℃，室内光照强度为1500lx，光照时间设定为10h/d。
实施例3
一种生产郁金香组培苗的方法，按照以下步骤进行：
(1)外植体消毒：先选取健康无病的郁金香花种子作为外植体，将种子经流水冲洗4min后，在超净工作台上用体积百分数为75％的乙醇溶液表面灭菌3min，无菌水冲洗3次，用质量百分数为0.3％的hgcl2溶液灭菌6min，无菌水冲洗6次；
(2)郁金香花提取液的制备：取400g新鲜郁金香花瓣加入到开放的提取罐中，加入水加热到煮沸状态煎煮60min，叶片与水的料液体积比为1:4，之后倒出提取液至液体存储罐中；再向提取罐中加入水加热到煮沸状态煎煮2h，且叶片与水的料液体积比为1:5，倒出提取液至所述液体存储罐中，最后浓缩液体存储罐中的提取液至原体积的1/3，得郁金香花提取液64g；
(3)接种诱导：将步骤(1)消毒后的外植体接种于固体培养基上进行愈伤诱导，促使发芽成苗，其中固体培养基以1/2ms为基本培养基，并添加50g/l郁金香花提取液，另外再在固体培养基中添加20g/l的nh4hco3调节ph值至7.5；
该固体培养基中另外还添加0.6mg/lnaa、0.4mg/l6-ba及25g/l蔗糖；且接种诱导培养的环境条件为：室内温度为12℃，室内光照强度为1200lx，光照时间设定为13h/d；
(4)增值继代培养：切取步骤(2)中形成的幼苗茎段4cm，转入到继代固体培养基中，直至茎段增殖，得丛生芽，其中固体培养基以1/2b5为基本培养基，并添加30g/l郁金香花提取液，另外再在固体培养基中添加20g/l的nh4hco3调节ph值至7.5；
该固体培养基中另外还添加0.6mg/lnaa、0.8mg/l6-ba、35g/l蔗糖及琼脂6.0g/l；且增值继代培养的环境条件为：室内温度为17℃，室内光照强度为1500lx，光照时间设定为13h/d；
(5)生根培养：待所述丛生芽的单芽长至5.0cm时，将郁金香组培苗移植至生根培养基中，其培养基以1/2ms为基本培养基，并添加40g/l郁金香花提取液，另外再在固体培养基中添加20g/l的nh4hco3调节ph值至7.5；
该固体培养基中还另外添加0.4mg/liba、0.6mg/lnaa、30g/l甘露醇、40g/l蔗糖以及5.0g/l琼脂；且生根培养的环境条件为：室内温度为15℃，室内光照强度为2000lx，光照时间设定为12h/d。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。