本发明涉及一种切花保鲜试剂，具体涉及一种银杏提取液的康乃馨切花保鲜试剂的制作工艺。
背景技术：
香石竹即康乃馨，又名狮头石竹、麝香石竹、大花石竹、荷兰石竹，为石竹科、石竹属植物，一般分布于欧洲温带以及中国大陆的福建、湖北等地，原产于地中海地区，是世界上应用最普遍的花卉之一。香石竹包括许多变种与杂交种，在温室里几乎可以连续不断开花。1907年起，开始以粉红色康乃馨作为母亲节的象征，故今常被作为献给母亲的花。香石竹为多年生宿根草本。因花瓣具繸缘及香郁气味，而广受栽培。一般分为花坛香石竹与花店香石竹；茎丛生，质地坚硬，呈灰绿色，节膨大，高度大约为50㎝。花叶较厚，呈线形，对生。茎叶与石竹相似，但较粗壮，被有白粉。花朵较大，具有芳香性气味，单生、2－3朵簇生或成聚伞花序；花萼下有菱状的卵形小苞片四枚，先端短而尖，长约萼筒的四分之一；萼筒为绿色，五裂；花瓣不规则，边缘有齿，单瓣或着重瓣，有红色、粉色、黄色等花色。花期4月至9月，保护地栽培四季开花，鲜切花属于极娇嫩、易腐烂的产品，鲜切花采后流通要经过采收、整理、分级、包装和运输等环节。康乃馨切花的保鲜途径很多。关于康乃馨切花的保鲜的研究报道很多，运用冷藏技术，对已开花的康乃馨，暂时不能出售的，可置于3～5℃冷藏，温度不能过低，否则会使花瓣受到伤害，花蕾期的花枝抗冻力强，可在0～1℃贮藏。乙烯与切花衰老关系密切，是切花的研究里最广泛、最深入的植物激素。康乃馨是对乙烯高度敏感的切花之一，表现为花蕾不开放和衰老加快，同时植物组织衰老过程会促进乙烯生成，产生的乙烯又进一步促进衰老，导致花卉最后凋谢枯萎死亡。乙烯可在转录或翻译水平调节切花衰老相关基因的表达，所以控制乙烯合成与作用一直是切花保鲜的主要途径。目前在商业上应用较为广泛的切花保鲜剂是硫代硫酸银(sts)、硝酸银(agno3)、agac等。银离子比铜离子更具活性，通过竞争抑制机制，硫代硫酸银释放的银离子取代乙烯作用位点的铜离子，使乙烯不能结合到其他受体上起作用。但是现有的一些保鲜方法在措施应用环境上、在环保上有其一定的局限性，物提取物中富含植酸，植酸能增强切花的抗氧化性、降低切花的呼吸代谢、延缓其体内能源物质的消耗，植酸的强螯合性使它能与切花辅酶中的金属离子螯合来抑制或减缓酶促反应的发生和进行，从而延长鲜切花的寿命，但不同浓度保鲜效果也会不尽相同，所以要选择适当提取法、适当浓度的天然植物提取液才最有利于鲜切花保鲜，而且价格便宜、化学成分含量少、对人体无害、无毒性且对环境无污染。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种银杏提取液的康乃馨切花保鲜试剂的制作工艺方，以解决用环境上、在环保上有其一定的局限性且的难题。
为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：
本发明提供了一种银杏提取液的康乃馨切花保鲜试剂的制作工艺方，保鲜方法如下：
步骤一：银杏预处理，银杏叶采集后，铺平，置于阴凉处自然风干，将干燥箱调至35-40℃，烘12小时，用打粉机将材料粉碎，过20目筛，分别装入自封袋，4℃保存备用；
步骤二：银杏乙醇浸提液制备，采用三次浸渍提取法，具体操作如下：
第一次：称取粉碎的功能植物银杏样品50g，加入定量的95％乙醇，标准是根据样品体积浸过银杏样品4cm以上，浸泡，放入摇床里震荡48h。过滤，得滤液和残渣；
第二次：在第一次提过的残渣中加入适量95％乙醇，刚好浸没银杏样品1cm，浸泡，放入摇床里震荡24h。过滤，得滤液和残渣；
第三次：在上述的残渣中加入适量95％乙醇，刚好浸没银杏样品，浸泡放入摇床里震荡12h。过滤，得滤液，残渣弃去；
浓缩：合并三次滤液，进行减压浓缩，水浴温度为25℃左右；
定容：用95％乙醇把浓缩液定容到20ml刻度试管中，质量浓度为1g/ml(即1ml提取物中含有1g干植物样品的物质)，密封后放入冰箱4℃保存，备用；
步骤三：康乃馨切花预处理，将康乃馨放入水中，选取初开的花蕾期切花，其开放程度基本一致，花茎粗壮挺直，无病虫害和机械损伤，然后依次取出并按每株花枝长30cm的要求，用刀片将长于茎部30cm的部分切除掉(注意以斜45o的方向迅速切下)，处理完后备用；
步骤四：银杏乙醇浸提液入瓶，总瓶插液为300ml，取银杏乙醇浸提液与水混合配置5.0ml/l，即配制成的每1l溶液中含有5.0ml银杏乙醇浸提液，在插瓶中放置3％的蔗糖；
步骤五：康乃馨切花入瓶，在插瓶中放置3％的蔗糖，插瓶中插入3枝已处理好的切花，在插入切花过程中注意下剪口处不要有气泡出现，并且保持各花瓶之间的距离，不能让其相互挤压，各株花枝间成120度,置于室温环境下，通风无阳光直射，瓶与瓶之间约10cm。
作为本发明的一种优选技术方案，所述制备工艺使用的工具包括：插瓶，摇床，三角瓶，水浴箱，冰箱，电子天平，滤纸，量杯，烧杯，玻璃棒，漏斗，容量瓶，刻度试管和干燥箱等。
作为本发明的一种优选技术方案，所述康乃馨的花朵为未开放的花苞，叶片形状基本整齐一致、无病虫害现象，花色大红。
作为本发明的一种优选技术方案，所述银杏叶采自健康银杏树上。
本发明所达到的有益效果是：该发明是一种银杏提取液的康乃馨切花保鲜试剂的制作工艺方，银杏乙醇浸提液浓度为5.0ml/l的瓶插液可以有效延缓了康乃馨切花的衰老，延长了瓶插寿命，其中保鲜效果最好，杏乙醇浸提液浓度为5.0ml/l的瓶插液在测定的各项生理指标中，tds、电导率、盐度的变化均较为平缓、均匀，银杏乙醇浸提液浓度为5.0ml/l的瓶插液处理的康乃馨pod活性较为稳定，保鲜效果最佳，且植物提取物中富含植酸，植酸能增强切花的抗氧化性、降低切花的呼吸代谢、延缓其体内能源物质的消耗，植酸的强螯合性使它能与切花辅酶中的金属离子螯合来抑制或减缓酶促反应的发生和进行，从而延长鲜切花的寿命，植物组织内大量存在抗坏血酸，它是一种具有保鲜作用的物质，它通过影响植物生长调节剂例如乙烯等的生物合成和植物分子信号的传导，降低鲜切花的各项代谢活动强度，减缓衰老，具有而且价格便宜、化学成分含量少、对人体无害、无毒性且对环境无污染的特点。
除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本发明还有其它的目的、特征和优点。下面通过实施例对本发明作进一步详细的说明。
具体实施方式
实施例1
本发明提供一种银杏提取液的康乃馨切花保鲜试剂的制作工艺方，试验方法如下：
步骤一：银杏预处理，银杏叶采集后，铺平，置于阴凉处自然风干，将干燥箱调至35-40℃，烘12小时，用打粉机将材料粉碎，过20目筛，分别装入自封袋，4℃保存备用；
步骤二：银杏乙醇浸提液制备，采用三次浸渍提取法，具体操作如下：
第一次：称取粉碎的功能植物银杏样品50g，加入定量的95％乙醇，标准是根据样品体积浸过银杏样品4cm以上，浸泡，放入摇床里震荡48h。过滤，得滤液和残渣；
第二次：在第一次提过的残渣中加入适量95％乙醇，刚好浸没银杏样品1cm，浸泡，放入摇床里震荡24h。过滤，得滤液和残渣；
第三次：在上述的残渣中加入适量95％乙醇，刚好浸没银杏样品，浸泡放入摇床里震荡12h。过滤，得滤液，残渣弃去；
浓缩：合并三次滤液，进行减压浓缩，水浴温度为25℃左右；
定容：用95％乙醇把浓缩液定容到20ml刻度试管中，质量浓度为1g/ml(即1ml提取物中含有1g干植物样品的物质)，密封后放入冰箱4℃保存，备用；
步骤三：康乃馨切花预处理，将康乃馨放入水中，选取初开的花蕾期切花，其开放程度基本一致，花茎粗壮挺直，无病虫害和机械损伤，然后依次取出并按每株花枝长30cm的要求，用刀片将长于茎部30cm的部分切除掉(注意以斜45o的方向迅速切下)，处理完后备用；
步骤四：银杏乙醇浸提液入瓶，总瓶插液为300ml，配置2.5ml/l、5.0ml/l和7.5ml/l3个梯度，每个梯度设3个重复，即配制成的每1l溶液中含有2.5ml/l、5.0ml和7.5ml/l银杏乙醇浸提液插瓶中，然后在每个瓶中加入蒸馏水配成总容积为300ml的瓶插液，在插瓶中放置3％的蔗糖，以自来水与可利鲜为对照，重复3组，分别标记为水a、水b、水c与klxa、klxb、klxc；给有银杏乙醇浸提液插瓶分别编号为：yxy2.5a、yxy2.5b、yxy2.5c，yxy5.0a、yxy5.0b、yxy5.0c，yxy7.5a、yxy7.5b、yxy7.5c；
步骤五：康乃馨切花入瓶，每个插瓶中插入3枝已处理好的切花，在插入切花过程中注意下剪口处不要有气泡出现，并且保持各花瓶之间的距离，不能让其相互挤压。各株花枝间成120o,置于室温环境下，通风无阳光直射，瓶与瓶之间约10cm。
实施例2
本发明提供一种银杏提取液的康乃馨切花保鲜试剂的制作工艺方，配置方法如下：
步骤一：银杏预处理，银杏叶采集后，铺平，置于阴凉处自然风干，将干燥箱调至35-40℃，烘12小时，用打粉机将材料粉碎，过20目筛，分别装入自封袋，4℃保存备用；
步骤二：银杏水浸提液的制备，取功能植物银杏的粉碎样品20g放入1000ml大烧杯中，然后加入1000ml蒸馏水，放入50℃温水浴中浸泡12h后在煮沸30min，冷却，取锥形瓶、玻璃漏斗、玻璃棒、滤纸，将其组合成简易过滤装置，借助于玻璃棒的引流将冷却后的待过滤溶液中的上层浑浊液过滤，取上层清液，定容成1000ml溶液，得到功能植物银杏浸提液原液，放入试剂瓶中，于4℃条件下保存；
步骤三：康乃馨切花预处理，将康乃馨放入水中，选取初开的花蕾期切花，其开放程度基本一致，花茎粗壮挺直，无病虫害和机械损伤，然后依次取出并按每株花枝长30cm的要求，用刀片将长于茎部30cm的部分切除掉(注意以斜45o的方向迅速切下)，处理完后备用；
步骤四：银杏水浸提液入瓶，总瓶插液为300ml，分别取原提取液与水混合配成20％、40％、60％和80％4个梯度，每个梯度设3个重复。取银杏水浸提液各60ml、120ml、180ml、240ml于插瓶中，然后在每个瓶中加入蒸馏水配成总容积为300ml的瓶插液，在插瓶中放置3％的蔗糖，以自来水与可利鲜为对照。重复3组，分别标记为水a、水b、水c与klxa、klxb、klxc，给银杏水浸提液插瓶分别编号为：yxs20a、yxs20b、yxs20c，yxs40a、yxs40b、yxs40c，yxs60a、yxs60b、yxs60c，yxs80a、yxs80b、yxs80c；
步骤五：康乃馨切花入瓶，每个插瓶中插入3枝已处理好的切花，在插入切花过程中注意下剪口处不要有气泡出现，并且保持各花瓶之间的距离，不能让其相互挤压。各株花枝间成120o,置于室温环境下，通风无阳光直射，瓶与瓶之间约10cm。
综合实施例1和实施例2进行康乃馨切花观察，根据历次所观察的结果做好相应的记录。每两天观察一次，主要观察花开时间和花瓣脱落时间、花茎是否弯曲以及时间，根据历次所观察的结果做好相应的记录。开花率即为瓶插期间开放的花朵数占开放花朵数与未开花蕾数总和的百分比，以能看见花蕊为花朵开放标志，瓶插寿命判断：瓶插寿命以康乃馨切花以外层花瓣严重失水萎蔫、焦枯或者折茎、弯茎角度大于90°，失去观赏价值为标准；
其中观察步骤包括：
用ph计对瓶插液进行ph的测定，每隔两天测定一次，本实验对银杏不同提取法、不同浓度处理的a组中的瓶插液ph测定。
具体操作步骤如下：接电源开仪器，取下探测笔上的保养液小瓶，将探测笔插入编号为a的瓶插液中，等待显示屏数值稳定后读取记录。每测完一个，先将探测笔放入蒸馏水中清洗干净，再放入ph探测笔保养液中过一次才能进行下一次测量。
香石竹瓶插液电导率、盐度及tds的测定：
用电导仪对插瓶保鲜液进行tds、电导率以及盐度测定，每两天测一次，用电导仪分别对不同浓度中的瓶插液进行测量，对银杏不同提取法、不同浓度处理的a组中的瓶插液tds等测定。
具体测量步骤如下：先将仪器电接好，然后插上电源，将探笔插入被测编号为a的瓶插液中，然后打开仪器开关，以防探笔通电被空气氧化，按模式按钮切换并依次读取三个指标值并记录。测试中应该注意探笔，不要接触瓶的内壁及下底，测试中保持固定。每测完一个，将探笔放入蒸馏水中清洗干净，再用纸将其擦干后，才能进行下一次测量。
瓶插香石竹花瓣pod活性的测定：
在过氧化物酶(peroxidase)催化下，h2o2将愈创木酚氧化成棕褐色产物，此产物在470nm处有最大吸收峰。故可通过测470nm下的吸光值变化测定过氧化物酶的活性，每两天测一次，摘取各个浓度不同重复瓶插切花上4～5片相对较好的花瓣放入相对应的袋子中，放入冷藏箱中备用。待常规指标测定完毕后，将其取出，称取1g花瓣于研钵中，加入液氮，迅速研磨，研磨完全后加入5mlph＝7.8的pbs提取液混合均匀后装入离心管中，将其置于离心机内离心10分钟后取出，将离心清液装入与之相对应的离心管中冷藏，备用。
花瓣pod活性的测定：用移液枪先提取pod反应混合液3.0ml注入比色皿中，然后将冷藏后的离心液取出，待其融化后用移液枪取其上层清液约0.1ml注入同一比色皿中，盖上盖子将其摇匀后放入分光光度计中进行酶反应速率的测定，每个浓度每个重复测定三次，记录后求其平均值。对照以不加酶液作为参照(用提取缓冲液代替)
结果计算：过氧化物酶活性＝(△a470*vt)*(wf*vs*t)-1
上式中：△a470代表反应时间内吸光值的变化；
wf代表花瓣重量(g)；
t代表反应时间(min)；
vt代表提取酶液总体积(ml)；
vs代表测定时取用酶液体积(ml)[10]。
不同处理的香石竹外观形态变化比较表格：
表格1
每两天记录花开程度与花开完好程度作表如上，由表1可以看出，在康乃馨切花瓶插期间，七个处理中有六个处理的效果优于对照，证明银杏提取液对康乃馨切花保鲜发生了作用。切花的开花率是切花观赏品种很重要的一个指标，而瓶插液的优劣对促进花蕾开放也有极大的影响，从瓶插开始到瓶插结束，银杏乙醇浸提液浓度为2.5与7.5的效果是最好的，各种瓶插液处理与对照处理水比较效果也均好于或者不差于对照处理水，由此可见各瓶插液处理均不同程度的延长了切花瓶插寿命从而提高了观赏品质。在5月21日的时候，对照处理水与银杏有机溶剂乙醇浸提液浓度为7.5ml/l的率先死亡，银杏乙醇浸提液浓度5.0ml/l与2.5ml/l的花瓣与花开情况都比水浸提液处理的要好。通过比较不同处理康乃馨切花的花开时间和花瓣脱落时间、花茎是否弯曲以及时间和花的最后死亡时间可以看出总的保鲜效果乙醇浸提法>水浸提法>可利鲜>水。进一步分析两种不同提取法、不同浓度的保鲜效果发现银杏乙醇浸提液5.0ml/l效果最好，银杏水浸提液浓度60％效果次之，银杏乙醇浸提液7.5ml/l效果最差。两种浓度最高的都于23日之前死亡，得出康乃馨切花不适合高浓度，随着浓度的增加，保鲜时间在缩短。
瓶插液ph值反映的是瓶插液的酸碱度，鲜切花在高酸性和高碱性溶液中都不利于切花吸收水分，低ph环境下(非高酸性)可以抑制微生物的生长，以免吸收水分的花茎茎维管束组织被微生物堵塞，可以更好的吸收插瓶液中的各种养分，由试验得出各种处理的ph值都是逐渐变小的，说明康乃馨切花在逐渐死亡的过程中代谢作用产物使得溶液变酸。水浸提液处理中浓度60％、80％初始ph值低于对照处理水，其中浓度60％ph值比浓度80％ph值更低，具体原因有待进一步分析；乙醇浸提液处理初始ph值均高于对照处理水，并都在7的附近，进一步分析其变化过程发现其中浓度为2.5ml/l、5.0ml/l变化幅度为所有处理中最大的，说明乙醇浸提液处理在初始阶段能中和掉一些酸性，而在过程中，康乃馨切花代谢作用旺盛，使瓶插液ph值逐步降低，在各种处理之中保鲜效果最好，浓度为7.5ml/l的保鲜效果最差，可能是因为乙醇浓度过高，超过了康乃馨的承受范围，高浓度的ph值使切花吸水困难对照处理可利鲜(可利鲜)的初始ph值最低，说明可利鲜成分里含有能维持ph值稳定的成分存在。
tds(totaldissolvedsolids，溶解总固体)是一个测试试剂净度的综合指标，tds数值的大小，说明溶液浓度的大小，它可以近似的认为是综合了电导率、微生物数量和溶液杂质的一个总值。tds值反映的是溶解在液体中的总固体含量。若液体被污染或已经溶进许多其他电解物质后，其总固体含量增多。康乃馨切花在各种代谢活动中会从瓶插液中吸收物质(同化作用)，也会释放出一些物质(异化作用)，当异化作用大于同化作用时，瓶插液tds值变高，说明切花在衰老。由试验得出各种处理瓶插液初始tds值处于40～160之间，其水质可以表述为：矿化水、净化水。各种处理瓶插液的tds值总变化趋势都为上升，其中水浸提液浓度为60％的瓶插液tds值在15日到17日之间降低了，说明这段过程没有在衰老。银杏水浸提液处理的各种浓度与对照处理可利鲜瓶插液的tds值均高于对照处理水的tds值，而乙醇浸提液处理的各种浓度的tds值均低于对照处理水的tds值，进一步比较银杏水浸提液处理的各种浓度发现，浓度越大其初始tds值越大，说明银杏水浸提液有电解物质或其他物质的存在，而银杏乙醇浸提液处理的各种浓度发现，浓度越大其初始tds值越小，说明银杏乙醇浸提液中含有某种物质能减少液体中的总固体含量。因此我们比较tds值的变化幅度，当tds值变化幅度越大，切花衰老速度越快。通过比较分析发现乙醇浸提液2.5ml/l与5.0ml/l变化较为平缓，说明这两种浓度的处理能有效延缓康乃馨切花的衰老速度。
电导率的大小反映了溶液中离子浓度的大小，离子浓度的大小间接的说明了细胞膜的破坏程度。由试验得出各种瓶插液处理其初始电导率是不一样的，水浸提液处理的各种浓度与对照处理可利鲜瓶插液的初始电导率值都大于对照处理水瓶插液的电导率，而乙醇浸提液处理的各种浓度均低于水，进一步比较银杏水浸提液处理的各种浓度发现，浓度越大其初始电导率越大，说明银杏水浸提液有化学离子的存在，而比较乙醇浸提液处理的各种浓度发现，浓度越大其初始电导率越小，说明乙醇浸提液中含有某种物质能降低瓶插液化学离子的浓度。因此我们只能分析电导率的变化量来近似衡量细胞膜被破坏的程度。电导率变化越大说明康乃馨切花细胞膜被破坏的程度越大，细胞膜透性越大，细胞内物质外流，细胞间的分室作用被打破，代谢紊乱，细胞的正常生命活动受阻，加快切花衰老过程。通过比较发现乙醇浸提液5.0ml/l与2.5ml/l的变化较为平缓，变化幅度非常小，与对照处理水比较分析说明这两个浓度的处理可以有效降低活性氧对细胞膜的伤害，维持膜的稳定性、完整性，延缓切花衰老。
盐度反映出瓶插液中溶解的无机盐的多少，适量无机盐浓度能增加溶液的渗透势和花瓣细胞的膨压，抑制瓶插液中微生物的活动，有利于花枝水分平衡的保持，延长瓶插寿命，而浓度过大时，过大的渗透势会让细胞吸水困难甚至失水死亡。而瓶插液中的无机盐与植物体内的无机盐之和是可以近似看做一个固定值，瓶插液中的盐度增加，无机盐的唯一来源便是康乃馨切花，无机盐损失过多、过快则是切花衰老甚至死亡的预兆。由试验得出，乙醇浸提液处理浓度为2.5ml/l与5.0ml/l的瓶插液盐度增加相对较少、较慢。
过氧化物酶作为植物组织老化的一种生理指标，其主要功能是清除自由基，抗氧化，延缓衰老，康乃馨花瓣pod酶活性值时而很大，时而很小，起伏不定是一种健康的象征，不利于保鲜效果。由试验得出银杏乙醇浸提液浓度为2.5ml/l、5.0ml/l的变化较平缓，说明pod活性基本保持平衡，有利于康乃馨切花保鲜，延缓衰老速度。
通过实施例1和实施例2发现：银杏两种浸提液均延缓了康乃馨切花的衰老，延长了瓶插寿命，其中银杏乙醇浸提液处理的保鲜效果最好，在测定的各项生理指标中，tds、电导率、盐度的变化基本一致，试验得出银杏乙醇浸提液的变化均较为平缓、均匀，而银杏水浸提液的次之，由此得出银杏乙醇浸提液处理对康乃馨切花的保鲜效果优于银杏水浸提液，不同处理的康乃馨花瓣pod活性与康乃馨切花的保鲜也有密切关系，银杏乙醇浸提液处理的pod活性较为稳定，其中银杏乙醇浸提液浓度为5.0ml/l的保鲜效果最佳，合外观形态分析得出银杏乙醇浸提液浓度为5.0ml/l的保鲜效果最佳，浓度为2.5ml/l效果次之，第三为乙醇水浸提液，第四为保鲜剂可利鲜，水与银杏乙醇浸提液浓度为7.5ml/l的效果最差。
本发明所达到的有益效果是：该发明是一种银杏提取液的康乃馨切花保鲜试剂的制作工艺方，银杏乙醇浸提液浓度为5.0ml/l的瓶插液可以有效延缓了康乃馨切花的衰老，延长了瓶插寿命，其中保鲜效果最好，杏乙醇浸提液浓度为5.0ml/l的瓶插液在测定的各项生理指标中，tds、电导率、盐度的变化均较为平缓、均匀，银杏乙醇浸提液浓度为5.0ml/l的瓶插液处理的康乃馨pod活性较为稳定，保鲜效果最佳，且植物提取物中富含植酸，植酸能增强切花的抗氧化性、降低切花的呼吸代谢、延缓其体内能源物质的消耗，植酸的强螯合性使它能与切花辅酶中的金属离子螯合来抑制或减缓酶促反应的发生和进行，从而延长鲜切花的寿命，植物组织内大量存在抗坏血酸，它是一种具有保鲜作用的物质，它通过影响植物生长调节剂例如乙烯等的生物合成和植物分子信号的传导，降低鲜切花的各项代谢活动强度，减缓衰老，具有而且价格便宜、化学成分含量少、对人体无害、无毒性且对环境无污染的特点。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。