本发明涉及食用菌
技术领域：
，尤其是一种冬荪菌种的制备方法。
背景技术：
：冬荪，是一类可食用鬼笔属真菌的统称，主要包括白鬼笔、香鬼笔、重脉鬼笔等，又称为竹下菌、竹菌、无裙荪，属于鬼笔目(phallales)，鬼笔科(phallaceae)，鬼笔属(phallus)。白鬼笔味道鲜美，口感松脆，且具有极高的营养价值。据《全国中草药汇编》和《中华本草》中记载，冬荪菌柄、菌托和子实体均可入药，药性为甘、淡、温，有活血止痛、祛风除湿的功效，可用于治疗风湿痛等疾病，同时还具有抗癌活性。随着大家对冬荪的了解和认识，产品需求量逐步加大，种植面积也随之扩大，因此，菌种成为制约冬荪产业发展的主要因素。菌种制作，灭菌消毒是关键，可采用高压蒸汽灭菌和常压蒸汽灭菌两种方式，高压蒸汽灭菌设备投入和能源销耗大；常压蒸汽灭菌，灭菌时间长，人力成本高，污染率大。针对于冬荪菌种，菌种生产者大多是农业合作社、小型企业、微型企业等，采用多是常压蒸汽灭菌方式。为避免温度过高造成菌种污染率高(特别是链孢霉污染)，企业通常在冬天或温度较低的时节开展菌种生产，并通过增加灭菌时间，添加消毒剂等方式来提升灭菌效果。一方面，菌种污染率高，导致资源浪费，制作成本增加，且灭菌时间较长，能耗较大；另一方面，大量使用药物消毒剂，往往会引起菌种重金属或农残超标，导致菌种不达标，且在较低温度下制备菌种，菌丝生长缓慢，生产周期长，菌种活性也受到影响。因此，改善菌种生产工艺，有效提高菌种成品率，是生产企业亟待解决问题。技术实现要素：为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本发明提供一种冬荪菌种的制备方法，具体是通过以下技术方案得以实现的。一种冬荪菌种的制备方法，包括以下步骤：(1)材料准备：选择适宜的培养基配方，并按配方准备材料；(2)材料堆置：向准备好的材料中加入基质发酵菌剂，加水搅拌均匀，直至培养料含水量达到50-70％，然后建堆，所述建堆是：在选定的场地中央摆放透气木箱，为发酵过程中产生的气体提供排放空间，透气木箱摆放好后，在其上面堆放发酵材料，堆料两侧预留透气木箱两端的透气口，不要覆盖，堆置完成后，对堆料表面覆盖一层塑料薄膜，对堆料进行保温保湿；(3)基质发酵及翻堆：堆置完成后的前2-3天，温度逐渐上升，待温度升至60-70℃时揭开堆料表面的塑料薄膜，换用遮阳网或草垫覆盖，继续发酵10-15天，然后开始翻堆，翻堆的同时进行建堆，方法同步骤(2)，堆置完毕后，覆盖遮阳网或草垫，发酵10-15天，如此翻堆2-3次，直至基质软化，清香，无酸味；(4)接种场地处理：对接种场地进行消毒；(5)装料及接种：基质发酵完毕后，待温度降至20-25℃时，将基质分装后，并向基质中接种菌种，原种培养基通常采用短时灭菌，无菌条件接种，栽培种培养基通常采用短时灭菌或免灭菌方式；(6)养菌管理：将接种好的菌种及基质移入发菌室发菌，温度控制在20-26℃，以25℃最优，发菌期间保持避光，可以采用遮光处理，每隔10-15天翻堆一次，并检查污染情况，持续培养60-70天至菌丝满袋，继续培养15-20天至菌丝致密，移入菌种储藏室保存，即得。所述适宜的培养基配方，是原种培养基配方，具体是含有木屑60-70％，玉米芯15-20％，麦麸10-17％，蔗糖或葡萄糖1-2％，生石灰1-2％。此配方较为适合冬荪原种培养。所述适宜的培养基配方，是栽培种培养基配方，具体是含有木屑70-75％，锯末10-15％，麦麸10-15％，生石灰1-2％。此配方较为适合冬荪栽培种培养。所述添加的发酵菌剂为酵素菌菌种，添加比例为原料的0.25-1％，即每吨原材料添加2.5-1kg菌种。所述透气箱为矩形或梯形透气箱，具体是一梯形或矩形支架，周围覆盖条形板，板间留1-2cm空隙，板上在覆盖一层遮阳网或铁纱网，以防止材料漏入木箱中。所述矩形透气箱，该透气箱尺寸为宽30cm，高10cm，长度≥发酵材料堆放长度。所述梯形透气箱，该透气箱尺寸为上底宽30cm，下底宽40cm，高10cm，长度≥发酵材料堆放长度。所述步骤(2)，在其上面堆放发酵材料，堆放发酵材料的宽1.8-2m，高1-1.5m，长度≤透气箱长度。使发酵材料得到充分的通气量，且发酵过程中产生的气体可快速排出。所述步骤(4)，对接种场地进行消毒，是使接种场地符合无菌环境标准。此条件下环境无菌条件较好，适合冬荪原种接种。所述步骤(4)，对接种场地进行消毒，是保持接种室内部空间、墙壁、天花板、地面整洁、干净，无灰尘，并利用紫外灯、臭氧发生器、消毒剂等对房间进行适当消毒。此条件下环境无菌条件较为一般，但操作简单，较为适合冬荪栽培种接种。所述步骤(5)中的将基质分装，并向基质中接种菌种，具体步骤是：装料至玻璃菌种瓶瓶口，瓶口预留2-3cm空间，培养基内插入接种棒，瓶口用棉塞封口，常压灭菌10-12h，冷却至室温，将培养基移入接种箱内，无菌环境下接入母种。原种及其培养基适宜装瓶接种及培养。所述步骤(5)中的将基质分装，并向基质中接种菌种，具体步骤是：将基质装袋，装至能扎口即可，袋子采用17cm×35cm或17cm×33cm规格，装袋完成后常压灭菌8-10h，待培养基冷却至室温，转移到接种室内，采用打孔接种的方式，在开放的环境中将冬荪原种接入栽培种培养基内，接种量5-15％，接种完毕后套上菌种盖。栽培种及其培养基适宜装袋或装框培养。所述步骤(5)中的将基质分装，并向基质中接种菌种，是采用塑料筐或木筐，并选择打孔和层接两种方式接种。所述打孔方式接种，其具体步骤是：首先框底铺设聚乙烯塑料薄膜，然后铺设基质，厚度15-25cm，利用接种棒在培养基上打孔，孔间距10-15cm，深度10-20cm，在开放的环境中接入冬荪原种，接种量5-15％，接种完毕后，表面覆盖塑料薄膜保温保湿，移入养菌室养菌。所述层接式接种，其具体步骤是：首先框底铺设塑料薄膜，然后平铺一层基质，厚度5-15cm，在开放的环境种将冬荪原种均匀撒在培养料表面，接种量5-15％，再在平铺一层基质，厚度5-15cm，表面撒少许菌种封口，表面覆盖塑料薄膜保温保湿，移入养菌室养菌。栽培种及其培养基适宜装袋或装框培养。与现有技术相比，本发明创造的技术效果体现在：本发明在原种及栽培种栽培料中添加基质发酵菌剂进行原材料的发酵，发酵完成后原种培养基采用短时灭菌，无菌条件接种，栽培种培养基采用短时灭菌或免灭菌方式，开放环境条件下接种，以及后期养菌的管理，其核心在于基质的发酵处理，其原种、栽培种成品率可达到95-99％。本发明的方法简单可行，易于操作，能降低灭菌带来的能源消耗，有效降低污染率，降低劳动强度，提高菌丝生长速度，缩短菌种生产周期，提高原种、栽培种成品率。具体实施方式下面结合具体的实施方式来对本发明的技术方案做进一步的限定，但要求保护的范围不仅局限于所作的描述。实施例1(1)材料准备：称取木屑65kg，玉米芯17.5kg，麦麸14.5kg，蔗糖1.5kg，生石灰1.5kg；(2)材料堆置：向准备好的材料中加入基质发酵菌剂，加水搅拌均匀，直至培养料含水量达到60％，然后建堆，所述建堆是：在选定的场地中央摆放透气木箱，透气木箱摆放好后，在其上面堆放发酵材料，发酵材料的宽1.9m，高1.25m，长度5m，堆料两侧预留透气木箱两端的透气口，不要覆盖，堆置完成后，对堆料表面覆盖一层塑料薄膜，所述透气箱为一矩形支架，周围覆盖条形板，板间留1.5cm空隙，板上在覆盖一层遮阳网，该透气箱尺寸为宽30cm，高10cm，长度5.5m；(3)基质发酵及翻堆：堆置完成后的前2-3天，温度逐渐上升，待温度升至65℃时揭开堆料表面的塑料薄膜，换用遮阳网覆盖，继续发酵12.5天，然后开始翻堆，翻堆的同时进行建堆，方法同步骤(2)，堆置完毕后，覆盖遮阳网，发酵12.5天，如此翻堆2次，直至基质软化，清香，无酸味；(4)接种场地处理：对接种场地进行消毒，使接种场地符合无菌环境标准；(5)装料及接种：基质发酵完毕后，待温度降至22.5℃时，将基质分装，装料至玻璃菌种瓶瓶口，瓶口预留2.5cm空间，培养基内插入接种棒，瓶口用棉塞封口，100℃常压灭菌11h，冷却至室温，将培养基移入接种箱内，无菌环境下接入母种；(6)养菌管理：将接种好的菌种及基质移入发菌室发菌，温度控制在23℃，发菌期间保持避光，每隔12.5天翻堆一次，并检查污染情况，持续培养65天至菌丝满袋，继续培养17.5天至菌丝致密，移入菌种储藏室保存，即得。实施例2(1)材料准备：称取木屑70kg，玉米芯15kg，麦麸11kg，葡萄糖2kg，生石灰2kg；(2)材料堆置：向准备好的材料中加入基质发酵菌剂，加水搅拌均匀，直至培养料含水量达到50％，然后建堆，所述建堆是：在选定的场地中央摆放透气木箱，透气木箱摆放好后，在其上面堆放发酵材料，发酵材料的宽1.8m，高1m，长度3m，堆料两侧预留透气木箱两端的透气口，不要覆盖，堆置完成后，对堆料表面覆盖一层塑料薄膜，所述透气箱为一矩形支架，周围覆盖条形板，板间留1cm空隙，板上在覆盖一层遮阳网或铁纱网，该透气箱尺寸为宽30cm，高10cm，长度3.5m；(3)基质发酵及翻堆：堆置完成后的前2-3天，温度逐渐上升，待温度升至60℃时揭开堆料表面的塑料薄膜，换用草垫覆盖，继续发酵10天，然后开始翻堆，翻堆的同时进行建堆，方法同步骤(2)，堆置完毕后，覆盖草垫，发酵10天，如此翻堆2次，直至基质软化，清香，无酸味；(4)接种场地处理：对接种场地进行消毒，使接种场地符合无菌环境标准；(5)装料及接种：基质发酵完毕后，待温度降至20℃时，将基质分装，装料至玻璃菌种瓶瓶口，瓶口预留2cm空间，培养基内插入接种棒，瓶口用棉塞封口，100℃常压灭菌10h，冷却至室温，将培养基移入接种箱内，无菌环境下接入母种；(6)养菌管理：将接种好的菌种及基质移入发菌室发菌，温度控制在20℃，发菌期间保持避光，每隔10天翻堆一次，并检查污染情况，持续培养60天至菌丝满袋，继续培养15天至菌丝致密，移入菌种储藏室保存，即得。实施例3(1)材料准备：称取木屑61kg，玉米芯20kg，麦麸17kg，蔗糖1kg，生石灰1kg；(2)材料堆置：向准备好的材料中加入基质发酵菌剂，加水搅拌均匀，直至培养料含水量达到70％，然后建堆，所述建堆是：在选定的场地中央摆放透气木箱，透气木箱摆放好后，在其上面堆放发酵材料，发酵材料的宽2m，高1.5m，长度10m，堆料两侧预留透气木箱两端的透气口，不要覆盖，堆置完成后，对堆料表面覆盖一层塑料薄膜，所述透气箱为一矩形支架，周围覆盖条形板，板间留2cm空隙，板上在覆盖一层铁纱网，该透气箱尺寸为宽30cm，高10cm，长度10.5m；(3)基质发酵及翻堆：堆置完成后的前2-3天，温度逐渐上升，待温度升至70℃时揭开堆料表面的塑料薄膜，换用遮阳网覆盖，继续发酵15天，然后开始翻堆，翻堆的同时进行建堆，方法同步骤(2)，堆置完毕后，覆盖遮阳网，发酵15天，如此翻堆3次，直至基质软化，清香，无酸味；(4)接种场地处理：对接种场地进行消毒，使接种场地符合无菌环境标准；(5)装料及接种：基质发酵完毕后，待温度降至25℃时，将基质分装，装料至玻璃菌种瓶瓶口，瓶口预留3cm空间，培养基内插入接种棒，瓶口用棉塞封口，100℃常压灭菌12h，冷却至室温，将培养基移入接种箱内，无菌环境下接入母种；(6)养菌管理：将接种好的菌种及基质移入发菌室发菌，温度控制在26℃，发菌期间保持避光，每隔15天翻堆一次，并检查污染情况，持续培养70天至菌丝满袋，继续培养20天至菌丝致密，移入菌种储藏室保存，即得。实施例4(1)材料准备：称取木屑65kg，玉米芯17.5kg，麦麸14.5kg，蔗糖1.5kg，生石灰1.5kg；(2)材料堆置：向准备好的材料中加入基质发酵菌剂，加水搅拌均匀，直至培养料含水量达到60％，然后建堆，所述建堆是：在选定的场地中央摆放透气木箱，透气木箱摆放好后，在其上面堆放发酵材料，发酵材料的宽1.9m，高1.25m，长度5m，堆料两侧预留透气木箱两端的透气口，不要覆盖，堆置完成后，对堆料表面覆盖一层塑料薄膜，所述透气箱为一梯形支架，周围覆盖条形板，板间留1.5cm空隙，板上在覆盖一层遮阳网，该透气箱尺寸为上底宽30cm，下底宽40cm，高10cm，长度5.5m；(3)基质发酵及翻堆：堆置完成后的前2-3天，温度逐渐上升，待温度升至65℃时揭开堆料表面的塑料薄膜，换用遮阳网覆盖，继续发酵12.5天，然后开始翻堆，翻堆的同时进行建堆，方法同步骤(2)，堆置完毕后，覆盖遮阳网，发酵12.5天，如此翻堆2次，直至基质软化，清香，无酸味；(4)接种场地处理：对接种场地进行消毒，使接种场地符合无菌环境标准；(5)装料及接种：基质发酵完毕后，待温度降至22.5℃时，将基质分装，装料至玻璃菌种瓶瓶口，瓶口预留2.5cm空间，培养基内插入接种棒，瓶口用棉塞封口，100℃常压灭菌11h，冷却至室温，将培养基移入接种箱内，无菌环境下接入母种；(6)养菌管理：将接种好的菌种及基质移入发菌室发菌，温度控制在23℃，发菌期间保持避光，每隔12.5天翻堆一次，并检查污染情况，持续培养65天至菌丝满袋，继续培养17.5天至菌丝致密，移入菌种储藏室保存，即得。实施例5(1)材料准备：称取木屑72.5kg，锯末12.5kg，麦麸13.5kg，生石灰1.5kg；(2)材料堆置：向准备好的材料中加入基质发酵菌剂，加水搅拌均匀，直至培养料含水量达到60％，然后建堆，所述建堆是：在选定的场地中央摆放透气木箱，透气木箱摆放好后，在其上面堆放发酵材料，发酵材料的宽1.9m，高1.25m，长度5m，堆料两侧预留透气木箱两端的透气口，不要覆盖，堆置完成后，对堆料表面覆盖一层塑料薄膜，所述透气箱为一矩形支架，周围覆盖条形板，板间留1.5cm空隙，板上在覆盖一层遮阳网，该透气箱尺寸为宽30cm，高10cm，长度5.5m；(3)基质发酵及翻堆：堆置完成后的前2-3天，温度逐渐上升，待温度升至65℃时揭开堆料表面的塑料薄膜，换用遮阳网覆盖，继续发酵12.5天，然后开始翻堆，翻堆的同时进行建堆，方法同步骤(2)，堆置完毕后，覆盖遮阳网，发酵12.5天，如此翻堆2次，直至基质软化，清香，无酸味；(4)接种场地处理：保持接种室内部空间、墙壁、天花板、地面整洁、干净，无灰尘，并利用紫外灯、臭氧发生器、消毒剂等对房间进行适当消毒；(5)装料及接种：基质发酵完毕后，待温度降至22.5℃时，将基质装袋，装至能扎口即可，袋子采用17cm×35cm规格，装袋完成后100℃常压灭菌8h，待培养基冷却至室温后转移到接种室内，采用打孔接种的方式，在开放的环境中将冬荪原种接入栽培种培养基内，接种量10％，接种完毕后套上菌种盖；(6)养菌管理：将接种好的菌种及基质移入发菌室发菌，温度控制在23℃，发菌期间保持避光，每隔12.5天翻堆一次，并检查污染情况，持续培养65天至菌丝满袋，继续培养17.5天至菌丝致密，移入菌种储藏室保存，即得。实施例6(1)材料准备：称取木屑72.5kg，锯末12.5kg，麦麸13.5kg，生石灰1.5kg；(2)材料堆置：向准备好的材料中加入基质发酵菌剂，加水搅拌均匀，直至培养料含水量达到60％，然后建堆，所述建堆是：在选定的场地中央摆放透气木箱，透气木箱摆放好后，在其上面堆放发酵材料，发酵材料的宽1.9m，高1.25m，长度5m，堆料两侧预留透气木箱两端的透气口，不要覆盖，堆置完成后，对堆料表面覆盖一层塑料薄膜，所述透气箱为一矩形支架，周围覆盖条形板，板间留1.5cm空隙，板上在覆盖一层遮阳网，该透气箱尺寸为宽30cm，高10cm，长度5.5m；(3)基质发酵及翻堆：堆置完成后的前2-3天，温度逐渐上升，待温度升至65℃时揭开堆料表面的塑料薄膜，换用遮阳网覆盖，继续发酵12.5天，然后开始翻堆，翻堆的同时进行建堆，方法同步骤(2)，堆置完毕后，覆盖遮阳网，发酵12.5天，如此翻堆2次，直至基质软化，清香，无酸味；(4)接种场地处理：保持接种室内部空间、墙壁、天花板、地面整洁、干净，无灰尘，并利用紫外灯、臭氧发生器、消毒剂等对房间进行适当消毒；(5)装料及接种：基质发酵完毕后，待温度降至22.5℃时，将基质装袋，装至能扎口即可，袋子采用17cm×33cm规格，装袋完成后100℃常压灭菌8h，待培养基冷却至室温后转移到接种室内，采用打孔接种的方式，在开放的环境中将冬荪原种接入栽培种培养基内，接种量10％，接种完毕后套上菌种盖；(6)养菌管理：将接种好的菌种及基质移入发菌室发菌，温度控制在23℃，发菌期间保持避光，每隔12.5天翻堆一次，并检查污染情况，持续培养65天至菌丝满袋，继续培养17.5天至菌丝致密，移入菌种储藏室保存，即得。实施例7(1)材料准备：称取木屑70kg，锯末14.5kg，麦麸14.5kg，生石灰1kg；(2)材料堆置：向准备好的材料中加入基质发酵菌剂，加水搅拌均匀，直至培养料含水量达到60％，然后建堆，所述建堆是：在选定的场地中央摆放透气木箱，透气木箱摆放好后，在其上面堆放发酵材料，发酵材料的宽1.9m，高1.25m，长度5m，堆料两侧预留透气木箱两端的透气口，不要覆盖，堆置完成后，对堆料表面覆盖一层塑料薄膜，所述透气箱为一矩形支架，周围覆盖条形板，板间留1.5cm空隙，板上在覆盖一层遮阳网，该透气箱尺寸为宽30cm，高10cm，长度5.5m；(3)基质发酵及翻堆：堆置完成后的前2-3天，温度逐渐上升，待温度升至65℃时揭开堆料表面的塑料薄膜，换用遮阳网覆盖，继续发酵12.5天，然后开始翻堆，翻堆的同时进行建堆，方法同步骤(2)，堆置完毕后，覆盖遮阳网，发酵12.5天，如此翻堆2次，直至基质软化，清香，无酸味；(4)接种场地处理：保持接种室内部空间、墙壁、天花板、地面整洁、干净，无灰尘，并利用紫外灯、臭氧发生器、消毒剂等对房间进行适当消毒；(5)装料及接种：基质发酵完毕后，待温度降至22.5℃时，选用塑料筐，在框底铺设聚乙烯塑料薄膜，然后铺设基质，厚度20cm，利用接种棒在培养基上打孔，孔间距12.5cm，深度15cm，在开放的环境中接入冬荪原种，接种量10％，接种完毕后，表面覆盖塑料薄膜保温保湿，移入养菌室养菌；(6)养菌管理：将接种好的菌种及基质移入发菌室发菌，温度控制在23℃，发菌期间保持避光，每隔12.5天翻堆一次，并检查污染情况，持续培养65天至菌丝满袋，继续培养17.5天至菌丝致密，移入菌种储藏室保存，即得。实施例8(1)材料准备：称取木屑75kg，锯末11.5kg，麦麸11.5kg，生石灰2kg；(2)材料堆置：向准备好的材料中加入基质发酵菌剂，加水搅拌均匀，直至培养料含水量达到60％，然后建堆，所述建堆是：在选定的场地中央摆放透气木箱，透气木箱摆放好后，在其上面堆放发酵材料，发酵材料的宽1.9m，高1.25m，长度5m，堆料两侧预留透气木箱两端的透气口，不要覆盖，堆置完成后，对堆料表面覆盖一层塑料薄膜，所述透气箱为一矩形支架，周围覆盖条形板，板间留1.5cm空隙，板上在覆盖一层遮阳网，该透气箱尺寸为宽30cm，高10cm，长度5.5m；(3)基质发酵及翻堆：堆置完成后的前2-3天，温度逐渐上升，待温度升至65℃时揭开堆料表面的塑料薄膜，换用遮阳网覆盖，继续发酵12.5天，然后开始翻堆，翻堆的同时进行建堆，方法同步骤(2)，堆置完毕后，覆盖遮阳网，发酵12.5天，如此翻堆2次，直至基质软化，清香，无酸味；(4)接种场地处理：保持接种室内部空间、墙壁、天花板、地面整洁、干净，无灰尘，并利用紫外灯、臭氧发生器、消毒剂等对房间进行适当消毒；(5)装料及接种：基质发酵完毕后，待温度降至22.5℃时，选用木筐，在框底铺设塑料薄膜，然后平铺一层基质，厚度10cm，在开放的环境种将冬荪原种均匀撒在培养料表面，接种量10％，再在平铺一层基质，厚度10cm，表面撒少许菌种封口，表面覆盖塑料薄膜保温保湿，移入养菌室养菌；(6)养菌管理：将接种好的菌种及基质移入发菌室发菌，温度控制在23℃，发菌期间保持避光，每隔12.5天翻堆一次，并检查污染情况，持续培养65天至菌丝满袋，继续培养17.5天至菌丝致密，移入菌种储藏室保存，即得。使用实施例1-8的制备方法进行菌种的制备，将结果进行对比：污染率(％)生产周期(d)成品率(％)实施例11.56598.5实施例23.36096.7实施例32.97097.1实施例41.26598.8实施例54.36595.7实施例64.96595.1实施例74.26595.8实施例84.76595.3对比可知，本发明的方法能有效降低污染率，提高菌丝生长速度，缩短菌种生产周期，提高原种、栽培种成品率。最后，应当指出，以上实施例仅是本发明较有代表性的例子。显然，本发明的技术方案并不限于上述实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。当前第1页12