一种激素诱导快速繁殖蓖齿眼子菜工程苗的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种植物培育领域，尤其涉及一种激素诱导快速繁殖蓖齿眼子菜工程苗的方法。
【背景技术】
[0002]目前湖泊污染严重，大多数水体呈现富营养化，蓝藻水华爆发，水体透明度明显下降，对水生植被造成毁灭性的破坏。但沉水植物作为湖泊生态系统的初级生产者，在湖泊营养盐循环、藻类抑制等方面发挥重要作用。因此湖泊水生植被恢复迫在眉睫。
[0003]蓖齿眼子菜是世界广布种，生态幅较宽，在寡营养至超富营养水体中都能生长，并在淡水和海水中均有生长。因此蓖齿眼子菜能耐受较高的营养盐，同时对蓝藻的耐受性也较强。蓖齿眼子菜能适应各种各样的水环境，因此适宜作为湖泊修复的关键物种。但蓖齿眼子菜的种子萌发性低，使其群落恢复存在一定的弊端，因此我们研宄了蓖齿眼子菜利用营养体进行快速繁殖的方法，可以在短期内建立较大规模的群落，使其快速成为湖泊修复的重要种群。
[0004]蓖齿眼子菜又称龙须眼子菜，具有有性繁殖和无性繁殖两种方式，其中有性繁殖方式的种子萌发率低，不到6%，因此无性繁殖成为蓖齿眼子菜的主要繁殖方式。无性繁殖主要通过断株、根状茎、块茎、地上茎节等进行繁殖。植物离体快速繁殖利用植物细胞的全能性对茎尖、嫩芽等组织，通过离体培养诱导生芽生根，从而形成新的植株。具有全年可繁殖，不受季节和气候的限制。因此可以利用蓖齿眼子菜的茎进行快速繁殖，生成更多的植株。
【发明内容】
[0005]发明目的:为了提高蓖齿眼子菜的繁殖速率，我们利用植物外植体快速繁殖方式，以蓖齿眼子菜的茎段作为研宄对象，采用激素诱导的方式促进其快速生芽、生根。提供一种促进蓖齿眼子菜快速繁殖的方法，有利于弥补其有性繁殖能力差的弊端。
[0006]为了达到上述目的，采用以下技术方案，本发明包括以下步骤:
[0007](I)植物体的消毒
[0008]采集生长良好、健壮的蓖齿眼子菜植株，用清水清洗3?4遍，清除表面附着物，将叶子去除。然后对植物茎段消毒，先用75%的酒精浸泡5分钟，然后用5%的次氯酸钠溶液浸泡10分钟，最后用无菌水冲洗4?5次，每次2?3分钟，最后截取0.5?0.8cm带节间的茎段。
[0009](2)诱导培养
[0010]将消毒后的植物茎段移入添加了 0.5?2mg/L的6-BA和0.lmg/L的IBA的MS培养基，设置20?25°C，光照强度2000?3000Lux，光照12h/d，培养10?15天，诱导生芽。
[0011]每升MS培养基含:硝酸铵1650mg，硝酸钾1900mg，氯化钙440mg，硫酸镁370mg，磷酸二氢钾170mg，碘化钾0.83mg，硼酸6.2mg，硫酸镁22.3mg，硫酸锌8.6mg，钼酸钠0.25mg，硫酸铜0.025mg，氯化钴0.025mg，硫酸亚铁27.8mg，乙二胺四乙酸二钠37.3mg，肌醇lOOmg，烟酸0.5mg，盐酸P比卩多醇(维生素B6) 0.5mg，盐酸硫胺素(维生素BI) 0.1mg,甘氨酸2.0mg0
[0012]⑶增殖培养
[0013]将经步骤(2)得到的培养物接入分化与增殖培养基中培养20?25天，以获得更多的蓖齿眼子菜的芽。分化与增殖培养基为每升MS培养基中加入1.0mg的6-BA和0.1mg/L 的 IBAo
[0014]⑷生根培养
[0015]将步骤(3)获得的蓖齿眼子菜芽转接于生根培养液中诱导生根，培养10?15天即可得到蓖齿眼子菜苗，生根培养液为添加了 0.5?2mg/L的NAA和0.02mg/L的6-BA的霍格兰营养液。
[0016]霍格兰营养液的配方:
[0017]每升营养液中含:四水硝酸妈945mg、硝酸钱80mg、磷酸二氢钾136mg、硫酸镁493mg，七水硫酸亚铁2.78g，乙二胺四乙酸二钠3.73g ;微量元素:碘化钾0.00415mg，硼酸0.031mg，硫酸锰 0.1115mg，硫酸锌 0.043mg，钼酸钠 0.00125mg，硫酸铜 0.000125mg，氯化钴0.000125mgo
[0018](5)炼苗
[0019]将步骤(4)获得的蓖齿眼子菜苗，转接到育苗箱中自然条件下培养，待植株长至20?30cm即可移栽到自然水体。
【具体实施方式】
[0020]通过激素诱导蓖齿眼子菜快速繁殖的方法，其具体实施措施如下:
[0021]从自然水体中采集生长良好、健壮的蓖齿眼子菜植株。
[0022]然后用清水浸泡、清洗3?4遍，清除表面附着物，叶子去除后，用75%酒精和5%的次氯酸钠对茎段进行消毒处理，将茎段切成0.5?0.8cm带节间的小段。
[0023]将上述茎段放入添加了 0.5?2mg/L的6_苄基腺嘌呤(6-BA)和0.lmg/L的吲哚丁酸(IBA)的MS培养基中培养，控制温度在20?25°C，光照2000?3000Lux，光照周期为12h/d，条件下培养10?15天，长出新的芽；
[0024]待新生的芽长到2cm，转接到继代增殖培养基中，继代培养产生更多的芽；
[0025]将生芽的新株放入添加了 0.5?2mg/L萘乙酸(NAA)和0.02mg/L 6-苄基腺嘌呤(6-BA)的霍格兰营养液中培养15天左右，长出新的根；
[0026]将生根生芽的新植株移入铺有砂石的育苗箱中炼苗，当蓖齿眼子菜植株高过30cm时向目标水体移栽。
[0027]一种激素诱导快速繁殖蓖齿眼子菜工程苗的方法，包括如下步骤:
[0028](I)植物体的消毒
[0029]采集生长良好、健壮的蓖齿眼子菜植株，用清水清洗3?4遍，清除表面附着物，将叶子去除；然后对植物茎段消毒，先用75%的酒精浸泡5分钟，然后用5%的次氯酸钠溶液浸泡10分钟，最后用无菌水冲洗4?5次，每次2?3分钟，最后截取0.5?0.8cm带节间的茎段；
[0030](2)诱导培养
[0031]将消毒后的植物茎段移入添加了 0.5?2mg/L的6-BA和0.lmg/L的IBA的MS培养基，设置20?25°C，光照强度2000?3000Lux，光照12h/d，培养10?15天，诱导生芽；
[0032]每升MS培养基含:硝酸铵1650mg，硝酸钾1900mg，氯化钙440mg，硫酸镁370mg，磷酸二氢钾170mg，碘化钾0.83mg，硼酸6.2mg，硫酸镁22.3mg，硫酸锌8.6mg，钼酸钠0.25mg，硫酸铜0.025mg，氯化钴0.025mg，硫酸亚铁27.8mg，乙二胺四乙酸二钠37.3mg，肌醇lOOmg，烟酸0.5mg，盐酸P比卩多醇(维生素B6) 0.5mg，盐酸硫胺素(维生素BI) 0.1mg,甘氨酸2.0mg0
[0033](3)增殖培养
[0034]将经步骤(2)得到的培养物接入分化与增殖培养基中培养20?25天，以获得更多的蓖齿眼子菜的芽。分化与增殖培养基为每升MS培养基中加入1.0mg的6-BA和0.1mg/L 的 IBAo
[0035](4)生根培养
[0036]将步骤(3)获得的蓖齿眼子菜芽转接于生根培养液中诱导生根，培养10?15天即可得到蓖齿眼子菜苗，生根培养液为添加了 0.5?2mg/L的NAA和0.02mg/L的6-BA的霍格兰营养液；
[0037]霍格兰营养液的配方:
[0038]每升营养液中含:四水硝酸妈945mg、硝酸钱80mg、磷酸二氢钾136mg、硫酸镁493mg，七水硫酸亚铁2.78g，乙二胺四乙酸二钠3.73g ;微量元素:碘化钾0.00415mg，硼酸0.031mg，硫酸锰 0.1115mg，硫酸锌 0.043mg，钼酸钠 0.00125mg，硫酸铜 0.000125mg，氯化钴0.000125mgo
[0039](5)炼苗
[0040]将步骤(4)获得的蓖齿眼子菜苗，转接到育苗箱中自然条件下培养，待植株长至20?30cm即可移栽到自然水体。
[0041]所述的蓖齿眼子菜快速繁殖的方法，是生芽培养过程中添加0.5?2mg/L的6-BA和 0.lmg/L 的 IBAo
[0042]所述的蓖齿眼子菜快速繁殖的方法，生根培养过程中添加0.5?2mg/L的NAA和0.02mg/L 的 6-BA。
[0043]所述的蓖齿眼子菜快速繁殖方法，外植体的培养需要光照2000?3000Lux，光照周期为12h/d。
[0044]利用所培育的种苗应用于水生植被种植和水体污染治理修复工程。
[0045]由此可见，实施本发明短期内可以培育大量蓖齿眼子菜种苗。
[0046]以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
【主权项】
1.一种激素诱导快速繁殖蓖齿眼子菜工程苗的方法，其特征是，包括如下步骤: (1)植物体的消毒 采集生长良好、健壮的蓖齿眼子菜植株，用清水清洗3?4遍，清除表面附着物，将叶子去除；然后对植物茎段消毒，先用75%的酒精浸泡5分钟，然后用5%的次氯酸钠溶液浸泡10分钟，最后用无菌水冲洗4?5次，每次2?3分钟，最后截取0.5?0.8cm带节间的莖段； (2)诱导培养 将消毒后的植物茎段移入添加了 0.5?2mg/L的6-BA和0.lmg/L的IBA的MS培养基，设置20?25°C，光照强度2000?3000Lux，光照12h/d，培养10?15天，诱导生芽； 每升MS培养基含:硝酸铵1650mg，硝酸钾1900mg，氯化钙440mg，硫酸镁370mg，磷酸二氢钾170mg，碘化钾0.83mg，硼酸6.2mg，硫酸镁22.3mg，硫酸锌8.6mg，钼酸钠0.25mg，硫酸铜0.025mg，氯化钴0.025mg，硫酸亚铁27.8mg，乙二胺四乙酸二钠37.3mg，肌醇lOOmg，烟酸0.5mg，盐酸P比卩多醇(维生素B6) 0.5mg，盐酸硫胺素(维生素BI) 0.1mg,甘氨酸2.0mg0 (3)增殖培养 将经步骤(2)得到的培养物接入分化与增殖培养基中培养20?25天，以获得更多的蓖齿眼子菜的芽。分化与增殖培养基为每升MS培养基中加入1.0mg的6-BA和0.lmg/L的IBA0 (4)生根培养 将步骤(3)获得的蓖齿眼子菜芽转接于生根培养液中诱导生根，培养10?15天即可得到蓖齿眼子菜苗，生根培养液为添加了 0.5?2mg/L的NAA和0.02mg/L的6-BA的霍格兰营养液； 霍格兰营养液的配方: 每升营养液中含:四水硝酸I? 945mg、硝酸钱80mg、磷酸二氢钾136mg、硫酸镁493mg，七水硫酸亚铁2.78g，乙二胺四乙酸二钠3.73g ;微量元素:碘化钾0.00415mg，硼酸0.031mg，硫酸锰 0.1115mg，硫酸锌 0.043mg，钼酸钠 0.00125mg，硫酸铜 0.000125mg，氯化钴0.000125mgo (5)炼苗 将步骤(4)获得的蓖齿眼子菜苗，转接到育苗箱中自然条件下培养，待植株长至20?30cm即可移栽到自然水体。
2.如权利要求1所述的蓖齿眼子菜快速繁殖的方法，其特征是生芽培养过程中添加0.5 ?2mg/L 的 6-BA 和 0.lmg/L 的 IBA。
3.如权利要求1所述的蓖齿眼子菜快速繁殖的方法，其特征是生根培养过程中添加0.5 ?2mg/L 的 NAA 和 0.02mg/L 的 6-BA。
4.如权利要求1所述的蓖齿眼子菜快速繁殖方法，其特征是外植体的培养需要光照2000?3000Lux，光照周期为12h/d。
5.利用权利要求1所培育的种苗应用于水生植被种植和水体污染治理修复工程。
【专利摘要】本发明提供了一种激素诱导快速繁殖蓖齿眼子菜工程苗的方法，主要包括以下步骤：(1)采集蓖齿眼子菜，用水洗去表面附着物后，用75％酒精和5％的次氯酸钠对茎段进行消毒处理；(2)培养基、培养液的配制和培养条件的设定；(3)新株的培育。将蓖齿眼子菜茎段在添加生长素和分裂素的培养基或培养液中培养诱导生芽、生根，然后将诱导出根和芽的蓖齿眼子菜新株移入到育苗箱中炼苗。本发明操作简单，可以在短期内繁殖大量蓖齿眼子菜种苗，解决蓖齿眼子菜繁殖率低的问题，并且可以做到全年、可持续繁殖蓖齿眼子菜种苗。
【IPC分类】A01H4-00
【公开号】CN104705194
【申请号】CN201510161551
【发明人】钱新, 吴红飞, 高海龙, 张红星, 吕志刚, 周乙新
【申请人】南京大学
【公开日】2015年6月17日
【申请日】2015年4月3日