一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，涉及一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法。
【背景技术】
[0002] 在大多数应激条件下，动物机体的生物学功能会受到不同程度损伤，如生长发育 受阻、生产力及繁殖力下降，这是机体为保证其基本的生命活动所必须付出的代价。动物在 应激状态下，如果体内固有的贮备不足以应对应激，机体就会动用本该用于其他生物功能 的资源，进而导致这些生物功能的损伤。在运输途中的饥渴、混群、拥挤、高温、颠簸、噪声等 运输应激源的综合作用下，牛、猪等动物机体的营养、水分大量消耗和免疫力降低，不仅导 致动物生长速度和生产性能降低，还可能继发病原性疾病，对动物的身体健康和生产性能 产生极大影响，对养殖业产生严重的经济损失。
[0003] 为预防牛、猪等动物的运输应激所造成的危害，研宄人员开展了大量的试验研宄， 由于开展动物运输应激试验的实验动物费用较高和激发实验动物运输应激过程比较繁琐， 在一定程度上影响了动物运输应激的试验研宄。
[0004] 根据小鼠的生理生化特点，摸索建立运输应激模型，对于研宄运输应激机制，筛选 有效的干预措施，减小或避免运输应激对动物的危害必要。但直接使用现有的牛、猪等大动 物来建立应激模型，面临的最大难题是保证运输应激条件一致性是相当困难的。运输应激 刺激是一个复杂的过程，运输应激刺激因素包括实验环境条件、实验动物自身因素及运输 应激刺激因素和动物保定因素，实验动物越大，上述因素对实验结果影响的不确定性就越 明显。此外所需实验动物费的开支也会明显增加。建立低成本、特征稳定可靠的模拟运输 应激模型方法可以促进运输应激机制和干预措施的研宄。
【发明内容】
[0005] 本发明为了解决上述问题，设计了一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法，具体 技术方案是：
[0006] 一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法，关键是：本方法步骤中包括：
[0007] A、应激时间的确定
[0008] 将2N只体重为18-22g的实验小鼠平均分为实验组、对照组两组，其中N为整数， 在22~25°C温度下将实验组小鼠于160-180次/分的摇床上，每摇动满1小时即刻从实验 组、对照组中各取小鼠采血取样，并绘制两组小鼠的血糖、血清乳酸脱氢酶、促肾上腺皮质 激素随时间变化的规律曲线，根据规律曲线确定合适的应激时间T ;
[0009] B、验证试验
[0010] 再取2M只体重为18-22g的实验小鼠平均分为实验组、对照组两组，其中M为整 数，在22~25°C温度下将实验组小鼠于160-180次/分的摇床上，摇床连续摇动时间为T， 期间观察小鼠行为表现，在T-I及T时刻，分别从实验组、对照组中各取小鼠采血取样，检测 两组小鼠的血清皮质醇、肌酸磷酸水平并进行比较，确定应激时间T的准确性。
[0011] 实验证明，优选地，所述的摇床的振荡速度为170次/分。
[0012] 还有，步骤A中摇床连续摇动不少于8小时。
[0013] 步骤A中所述的应激时间T为4小时。
[0014] 所述的采血取样方式为先将小鼠断头采血，再将血样静置，待凝集后进行离心处 理。
[0015] 所述的离心处理按3000rpm/min进行离心，离心时间为5min。
[0016] 所述的实验小鼠中雌、雄各半。
[0017] 本发明的关键在于：本发明根据小鼠的生理生化特点，而建立运输应激模型，对于 研宄运输应激机制，筛选有效的干预措施，减小或避免运输应激对动物的危害有着非常重 要的作用；另外，本方法的实验过程保证实验动物自身因素、运输应激刺激因素和动物保定 因素的稳定，实验结果更加可靠。
[0018] 本发明的有益效果是：本运输应激模型成本低廉、特征稳定可靠，有效地避免了利 用牛、猪等大动物来建立应激模型而面临的难以保证运输应激条件一致性的难题。实验动 物越大，运输应激刺激因素包括实验环境条件、实验动物自身因素及运输应激刺激因素和 动物保定因素，上述因素对实验结果影响的不确定性就越明显，且所需实验动物费用的开 支也会明显增加。所以本发明建立的低成本、特征稳定可靠的模拟运输应激模型方法可以 促进运输应激机制和干预措施的研宄。
【附图说明】
[0019] 图1是小鼠的血糖变化规律。
[0020] 图2是小鼠的肾上腺皮质激素变化规律。
[0021] 图3是小鼠的乳酸脱氢酶变化规律。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合实施例对本发明进行详细说明。
[0023] 实验一：运输应激对小鼠血糖、血清肾上腺皮质激素、乳酸脱氢酶影响规律观察：
[0024] 将50只Km小白鼠（雌、雄各半，体重在18-22g之间）随机分成二组，分别放置在 小鼠笼内。在室温（22~25°C )下将一组小鼠于170次/分的摇床上，连续摇动8小时。 摇动间隔1小时后，各组取3只小鼠断头采血，放置30min，血标本凝集后，按3000rpm/min 进行离心，离心时间为5min。应用ELISAL试剂盒检测血糖、肾上腺皮质激素和血清乳酸脱 氢酶的水平。
[0025] 试验结果：
[0026] 血糖、血清肾上腺皮质激素和乳酸脱氢酶的检测结果如图1、图2、图3,在受运输 应激后，应激小鼠的血糖、肾上腺皮质激素、乳酸脱氢酶均升高，4h后与正常对照组相比，均 有显著性差异（P〈〇. 05) ;7h后其浓度都高于正常对照组。
[0027] 实验二：运输应激对小鼠血清皮质醇、肌酸磷酸影响：
[0028] 将12只Km小白鼠，雌、雄各半，体重在18-22g之间，随机分成二组，分别放置在小 鼠笼内。在室温22~25°C下将一组小鼠于170次/分的摇床上，连续摇动4h，试验过程 中，观察小鼠行为表现。然后分别在摇动3h、4h时，各组取3只小鼠断头采血，放置30min， 血标本凝集后，按3000rpm/min进行离心，离心时间为5min。应用ELISAL试剂盒检测血清 皮质醇和肌酸磷酸水平。
[0029] 试验结果：行为观察结果为小鼠受应激刺激40min后开始产生明显的行为变化， 如毛须树立、排便、站立不安、尖叫；3h后眼睛开始流泪，眼周皮毛不洁。
[0030] 血清检测指标见表1
[0031] 表1血清皮质醇、肌酸磷酸的检测结果
[0032]
【主权项】
1. 一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法，其特征在于：本方法步骤中包括： A、 应激时间的确定 将2N只体重为18-22g的实验小鼠平均分为实验组、对照组两组，其中N为整数，在 22~25°C温度下将实验组小鼠于160-180次/分的摇床上，每摇动满1小时即刻从实验组、 对照组中各取小鼠采血取样，并绘制两组小鼠的血糖、血清乳酸脱氢酶、促肾上腺皮质激素 随时间变化的规律曲线，根据规律曲线确定合适的应激时间T ; B、 验证试验 再取2M只体重为18-22g的实验小鼠平均分为实验组、对照组两组，其中M为整数，在 22~25°C温度下将实验组小鼠于160-180次/分的摇床上，摇床连续摇动时间为T，期间观 察小鼠行为表现，在T-I及T时刻，分别从实验组、对照组中各取小鼠采血取样，检测两组小 鼠的血清皮质醇、肌酸磷酸水平并进行比较，确定应激时间T的准确性。
2. 根据权利要求1所述的一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法，其特征在于：所述 的摇床的振荡速度为170次/分。
3. 根据权利要求1所述的一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法，其特征在于：步骤A 中摇床连续摇动不少于8小时。
4. 根据权利要求1所述的一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法，其特征在于：步骤A 中所述的应激时间T为4小时。
5. 根据权利要求1所述的一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法，其特征在于：所述 的采血取样方式为先将小鼠断头采血，再将血样静置，待凝集后进行离心处理。
6. 根据权利要求5所述的一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法，其特征在于：所述 的离心处理按3000rpm/min进行离心，离心时间为5min。
7. 根据权利要求1所述的一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法，其特征在于：所述 的实验小鼠中雌、雄各半。
【专利摘要】本发明公开了一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法，利用摇床模拟运输应激刺激来分别进行应激时间的确定和验证试验。本运输应激模型成本低廉、特征稳定可靠，有效地避免了利用牛、猪等大动物来建立应激模型而面临的难以保证运输应激条件一致性的难题。实验动物越大，运输应激刺激因素包括实验环境条件、实验动物自身因素及运输应激刺激因素和动物保定因素，上述因素对实验结果影响的不确定性就越明显，且所需实验动物费用的开支也会明显增加。所以本发明建立的低成本、特征稳定可靠的模拟运输应激模型方法可以促进运输应激机制和干预措施的研究。
【IPC分类】A01K67-027
【公开号】CN104737985
【申请号】CN201510094866
【发明人】石玉祥, 安永福, 索慧娜, 王晓芳, 李英, 栾英凡, 王艳梅
【申请人】河北工程大学
【公开日】2015年7月1日
【申请日】2015年3月3日