专利名称：一种用于药物研究的小鼠模型的构建方法
技术领域：
本发明涉及一种小鼠模型的构建方法，特别涉及一种用于药物研究的小鼠模型的构建方法，本发明尤其适用于带有放射性标记药物研究的小鼠模型的构建。
背景技术：
在现代的各种基础医学研究中，为了观察药物、新的化合物等的药效毒理或在疾病发生的病因、病机以及病理的研究中，为了观察动物机体功能、代谢及形态的变化，通常都需要对实验动物采用一定的给药方式，而目前使用最多的是对小鼠进行注射的方法，常见的有小鼠腹腔注射、小鼠静脉注射、皮下注射给药、皮内注射给药、肌肉注射给药等。其中，腹腔注射是常见的给药方式，尤其是在麻醉时，其优点是操作简单，但药物吸收较慢，易流失；皮下注射给药、皮内注射给药药物吸收速度相对腹腔注射慢，且注射时容易导致药物外漏；小鼠血管内药物注射通常通过静脉进行，小鼠尾静脉注射是静脉注射经常使用的一种手段，但尾静脉较细，注射药物往往会由于操作的原因不能进入血管或从其中溢出，造成环境的污染，因此该方法对于操作者的技能程度、熟练程度均要求较高，操作繁琐，而且尾静脉属末梢循环，循环较慢，药物注射入动物体内后分散时间也较慢，不利于药物的扩散； 肌肉注射给药的方法，由于小鼠体积小，肌肉较少，因此并不适于对小鼠的注射。另外，为了便于对药效、毒理或病理的研究，观察药物作用的靶点，经常采用放射性同位素对药物进行标记后，再用于小鼠的注射。由于采用了放射性标记的药物，对于操作者来说，迫切需要找到一种方法，该方法操作简便容易，药物吸收快，且可有效防止药物的外露，避免对操作者造成危害。
发明内容
为了解决上述技术问题，发明人在积累了大量的经验基础上，并结合创造性劳动， 提出了一种用于药物研究的小鼠模型的构建方法，本发明的一种用于药物研究的小鼠模型的构建方法，其特征在于，在小鼠麻醉状态下，采用小鼠体内的下腔静脉作为给药部位， 30-60分钟后，将小鼠断颈处死，取得小鼠各组织器官称重后，进行药物含量的检测。具体的包括以下步骤(1)使用麻醉剂将小鼠麻醉；(2)将麻醉好的小鼠固定，沿小鼠腹中线，腹部下剪开表皮0. 5-0. 7公分的开口并向下剪开腹壁；(3)拉开切口并轻轻的将腹腔内的肠道拨向两侧，暴露出脊柱及脊柱旁的下腔静脉；(4)将所需注射的药物吸入注射器中，用针头刺破下腔静脉缓慢将药物注射进入下腔静脉中；(5) 30-60分钟后，将小鼠断颈处死，取得小鼠各组织器官称重后，进行药物含量的检测。
其中，优选的，在步骤(1)中采用腹腔注射的方法注射0. 戊巴比妥钠0. 1毫升， 20分钟后将小鼠麻醉；其中，优选的，在步骤O)中沿小鼠腹中线，于腹部下1/3处剪开表皮；其中，优选的，在步骤O)中剪开表皮0.6公分的开口 ；其中，优选的，在步骤中每只小鼠注射药物总量不超过0. 2毫升；其中，优选的，在步骤中所述的药物可为放射性标记的药物；使用本发明方法进行注射40分钟后，注射药物便会分散至小鼠全身或要检测的靶位点。按照以上所述的构建方法得到的小鼠模型在药物研究中的应用。相较于现有方法，本发明的技术优势有1、小鼠血管内药物注射通常通过尾静脉进行。但尾静脉较细，难于操作，本发明方法采用小鼠腔静脉进行注射，相比尾静脉注射，血管相对较粗，对操作者的操作技能要求相对降低，更容易将药物注射入小鼠的体内；2、小鼠尾静脉注射需要对小鼠尾部反复揉搓或者用温水浸泡使血管充盈，这样不可避免的对小鼠造成应激性刺激。本发明方法药物注射在小鼠麻醉状态下进行，对实验动物刺激小，能够避免对实验动物的应激性刺激，以便于得到稳定的结果；3、小鼠下腔静脉血管较粗血流量较大，药物注入后能够更快的分布于全身各个脏器。传统的尾静脉注射末梢循环较慢，药物注射入动物体内后分散时间也较慢；4、放射性药物往往具有污染性，小鼠麻醉后下腔静脉注射能够保证药物全部进入血液，在实验动物体内分布造成的环境污染小。传统的尾静脉注射由于血管较细，注射药物往往会由于操作的原因不能进入血管或从其中溢出，造成环境的污染。本发明通过采用上述方法向小鼠体内注射氚标记脱氧葡萄糖 [3H]-2-DeOXy-glUCOSe，进一步说明了本发明方法的可行性，以及注射效果。氚标记脱氧葡萄糖[3H]-2-DeOXy-gluCOSe，即应用氚替代了脱氧葡萄糖2位点上的氢原子，从而使葡萄糖带上标记，在组织摄取葡萄糖合成糖原后氚标记的葡萄糖就会留存于组织细胞当中，分离细胞中的氚标记物，并通过液体闪烁仪即可以检测放射性物质在单位组织中的含量。具体实施方法下面通过具体实施例对本发明做进一步说明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的保护范围。实施例1实验材料试验用小鼠品系为ICR品系雌性小鼠，购自黑龙江中医药大学实验动物中心；试验用戊巴比妥钠为美国SIGMA公司产品，商品名PENTOBARBITAL SODIUM，货号 Cat. No. P3761，哈尔滨同城生物试剂公司协助购买；胰岛素为生物合成胰岛素注射液诺和灵R，购自黑龙江中医药大学附属第一医院；BD注射器由美国BD公司生产，是一种专门用于胰岛素注射的注射器。BD胰岛素注射器的特点1.针头特别幼细；注射无痛，皮肤损伤小 2.直接读数，刻度准确；避免换算，剂量准确3.固定针头，没有死腔，哈尔滨同城生物试剂公司协助购买；氚标记脱氧葡萄糖由PerKin Elmer公司生产的1450型液体闪烁计数器进行测定，货号是NET 328A001MC,中国同位素公司协助购买。
构建方法小鼠腹腔注射0. 戊巴比妥钠0. 1毫升，20分钟后动物麻醉。将麻醉好的小鼠固定于操作台上。用眼科剪刀，沿小鼠腹中线，腹部下1/3处剪开表皮约0.6公分开口并向下剪开腹壁。用解剖镊拉开切口并轻轻的将腹腔内的肠道拨向两侧，暴露出脊柱及脊柱旁的下腔静脉。将15uCi氚标记脱氧葡萄糖([3H]-2-DeOXy-glUCOSe)约15微升， 2IU胰岛素体积50微升，两种药物混合后加生理盐水稀释至100微升，用BD注射器针头刺破下腔静脉缓慢将药物注射进入下腔静脉中。40分钟后，将小鼠断颈处死，取得小鼠各组织器官称重后，进行放射性标记物含量的检测。各组织器官葡萄糖摄取量检测结果，如表1所示，DPMI值为放射性葡萄糖检测值， 其余为仪器数据。检测结果说明，放射性葡萄糖注射后在不同小鼠的各个组织器官中都能够检测到，说明此构建方法可行。表1小鼠各个器官组织的放射性葡萄糖检测值
权利要求
1.一种用于药物研究的小鼠模型的构建方法，其特征在于，在小鼠麻醉状态下，采用小鼠的下腔静脉作为给药部位，30-60分钟后，将小鼠断颈处死，取得小鼠各组织器官称重后， 进行药物含量的检测。
2.按照权利要求1所述的构建方法，其特征在于，具体的包括以下步骤(1)使用麻醉剂将小鼠麻醉；(2)将麻醉好的小鼠固定，沿小鼠腹中线，腹部下剪开表皮0.5-0. 7公分的开口并向下剪开腹壁；(3)拉开切口并轻轻的将腹腔内的肠道拨向两侧，暴露出脊柱及脊柱旁的下腔静脉；(4)将所需注射的药物吸入注射器中，用针头刺破下腔静脉缓慢将药物注射进入下腔静脉中；(5)30-60分钟后，将小鼠断颈处死，取得小鼠各组织器官称重后，进行药物含量的检测。
3.按照权利要求2所述的构建方法，其特征在于步骤(1)中采用腹腔注射的方法注射0. 戊巴比妥钠0. 1毫升，20分钟后将小鼠麻醉。
4.按照权利要求2所述的构建方法，其特征在于步骤O)中沿小鼠腹中线，于腹部下 1/3处剪开表皮。
5.按照权利要求2或4所述的构建方法，其特征在于步骤O)中剪开表皮0.6公分的开口。
6.按照权利要求2所述的构建方法，其特征在于步骤中每只小鼠注射药物总量不超过0.2毫升。
7.按照权利要求2或6所述的构建方法，其特征在于步骤(4)所述的药物为放射性标记的药物。
8.按照权利要求2所述的构建方法，其特征在于40分钟后，将小鼠断颈处死，取得小鼠各组织器官称重后，进行药物含量的检测。
9.按照1-9任一项权利要求所述的构建方法得到的小鼠模型在药物研究中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种用于药物研究的小鼠模型的构建方法，本发明尤其适用于带有放射性标记药物研究的小鼠模型的构建。本发明的构建方法，其特征在于，在小鼠麻醉状态下，采用小鼠下腔静脉作为给药部位。本发明的方法具有操作简便容易，药物吸收快，可有效防止药物外露等优点，且给药30min-60min后，药物便会分散至小鼠全身或要检测的靶位点。
文档编号G01N23/00GK102346155SQ20111019745
公开日2012年2月8日 申请日期2011年7月14日 优先权日2011年7月14日
发明者吴效科, 李威 申请人:吴效科