专利名称：：建立辐射诱导白癜风小鼠模型的方法及其应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种辐射诱导白癜风小鼠模型的建立方法，用于白癜风发病机制的研究及防治药物筛选及评价；用于肺瘤发生的免疫机制研究及免疫治疗靶点的筛选。用于辐射诱导免疫功能紊乱机制或辐射调节免疫功能的研究。
背景技术：
：白癜风是一种常见的色素脱失性皮肤病，临床表现为局部皮肤白斑，一旦发病，治愈率低且易迁延进展，给患者造成很大的身心压力。白癜风的病理改变主要是产生皮肤黑色素的黑色素细胞受到损伤。导致白癜风患者黑素细胞破坏的细胞和分子机制尚未阐明。病因非常复杂，与生化改变、神经因素、自由基防护平衡机制紊乱以及黑色素细胞不明营养物缺乏；黑色素细胞黏附缺陷以及遗传因素等有密切的关系。目前得到业界人士普遍认同的是免疫机制。临床观察发现白癜风有时常伴有其他自身免疫性疾病，提示了白癜风的免疫病理机制。有些研究提示白癜风患者血清中可检测到抗黑色素细胞及其黑色素提蛋白的自身抗体，但更多的研究提示白癜风系细胞免疫介导的自身免疫性疾病。自身抗原的处理及呈递的过程还不是很清楚。在多项研究中被证实，黑色素细胞许多与合成黑色素有关的蛋白，如酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白-1和-2(TRP-1及TRP-2)及黑色素体结构蛋白MARTl/Melan-A,Pmel17/gp100andgp75等，属细胞内蛋白，由I型MHC在细胞表面表达，极有可能被抗原特异性008+T细胞识别。细胞毒性T细胞(CTL)可能介导黑色素细胞死亡。另外调节性T淋巴细胞(Treg)平衡紊乱，白癜风患者出现CD4+CD25+细胞升高，提示免疫耐受失调可能是白癜风发病机制之一。生化异常变化最终也是与诱导免疫改变有关。白癜风生化异常主要表现在两个方面(l)血尿中儿茶酚胺及其代谢产物升高；(2)抗氧化系统失调，表皮内高水平的过氧化氢。高水平的过氧化氢使酪氨酸及其他单酚类发生羟化反应生成相应的儿茶酚类，进一步氧化成为苯醌。苯醌的长时间堆积后可作用于酪氨酸酶使后者形成半抗原，从而激发免疫反应。由于白癜风发病机制不清，在临床上易于诊断但治疗比较困难。建立简便、可靠的发病模型对于研究白癜风的发病机理及治疗靶点具有重要的理论意义和实际意义。目前与白癜风有关的实验动物有(1)Smythline(SL)鸡SL鸡是人类自身免疫性白癜风的动物模型，由美国麻萨诸塞州大学Smyth教授在20世纪70年代创立。这一模型在疾病病理的许多方面特别是在免疫学方面与人类的白癜风极为相似。(2)C57BL/6JLer-vit/vitC57BL小鼠毛色为黑色。其亚系有C57BL/6,C57BL/6J,C57BL/IO等。较易诱发免疫耐受性，小鼠B16黑素瘤细胞系起源于C57BL/6小鼠。C57BL/6JLer-vit/vit小鼠是C57BL/6J的同源突变系，是白癜风的鼠模型。由美国耶鲁大学的Lerner教授建立。C57BL小鼠的应用范围较广，与白癜风相关的研究主要有毛囊黑素细胞增殖与分化的调节与白癜风复色的研究，抗肿瘤免疫和抗肿瘤生物治疗与黑素瘤相关性白癜风的研究以及鼠白癜风的遗传等。(3)豚鼠远交群豚鼠，按其毛色分可有白色、黄褐色、黑色等。其中黄褐色豚鼠表皮中有适量的对UVB和PUVA敏感的功能性黑素细胞，经紫外线照射后的皮肤可产生清晰可见的色素沉着过度，表皮中多巴阳性黑素细胞数量较未照射部位增加3~4倍，黑素细胞树突增加。这一现象和过程类似于人类紫外线诱导的色素沉着，特别是黄种人的晒黑现象。因此，这一模型常用于研究紫外线诱导的色素沉着和白癜风治疗中的补骨脂素光化学疗法以及用于酪氨酸酶抑制剂和防晒剂的药效学研究；(4)化学脱色模型国内安徽中医学院龙子江教授利用氢醌或过氧化氢等化学物进行局部脱色制备了豚鼠白癜风模型。IRM-2小鼠是用ICR/JCL小鼠、615小鼠进行杂交，按修饰单线培育出的近交系小鼠。IRM-2小鼠对电离辐射具有较强的耐受性，自发肿瘤发生率低。但是对多种小鼠接种肿瘤细胞易感，如肺腺癌T795、Lewis肺癌、乳腺癌TA2、肝癌HepA、白血病L1210、宫颈癌U14、肉瘤S180、LM淋巴癌、B16黑色素瘤、H22肝癌。在进行辐射敏感性实验过程中发现辐射暴露后的1詣-2小鼠易出现毛发脱色。本发明人通过深入的研究和大量的实验发现IRM-2小鼠外周血淋巴细胞CD4/CD8比值降低，与临床白癜风患者改变类似。为此，为探讨白癜风发病机理研究及药物开发建立合适的白癜风动物模型，本发明人在实验室开展了多方面的试验，观察IRM-2小鼠辐射暴露诱导白癜风的发生及其机制。目前关于IRM-2小鼠辐射暴露诱导白癜风动物模型的建立方法，迄今尚未见国内外有关同类文献的报道。
发明内容本发明是利用我单位培育的纯系IRM-2小鼠，建立辐射诱导白癜风的小鼠模型，用于白癜风发病机制的研究及防治药物筛选及评价；用于肿瘤发生的免疫机制研究及免疫治疗靶点的筛选。用于辐射诱导免疫功能紊乱机制或辐射调节免疫功能的研究。为达到上述目的，本发明提供了一种建立辐射诱导白癜风小鼠模型的方法，包括以下步骤一种建立辐射诱导白癜风小鼠模型的方法，包括以下步骤(1)选择纯系IRM-2小鼠分组，使其在全身Y射线照射下出现毛发色素脱失。(2)单次全身照射后观察10周，优选记录不同照射剂量下毛发脱色的发生率、发生时间、发病的严重程度。(3)建立以辐射诱导IRM-2小鼠毛发脱色为特征的小鼠模型。本发明所述的辐射包括电离辐射和非电离辐射。其中的电离辐射指的是oc粒子、P粒子、质子、中子以及X射线、Y射线；非电离辐射指的是可见光、红外线、紫外线、电磁辐射等。本发明优选指的是137CsY射线照射，照射剂量为l-6格瑞(gray，Gy),单次全身照射。本发明所述的选择纯系irm-2小鼠分组是指将irm-2小鼠分为七组，雌雄兼有，每组7-9只，分为0(对照组)，1，2，3，4，5,6Gy组。剂量分组将照射同一剂量的两种小鼠一同进行全身137Csy射线照射4-8周，照射后分组饲养并长期观察；定时观察皮肤脱色情况，做积分纪录。本发明所述的辐射诱导irm-2小鼠白癜风模型是采用前述公开的方法获得。本发明更进一步公开了辐射诱导irm-2小鼠白癜风模型的应用。包括辐射诱导白癜风小鼠模型用于白癜风发病机制的研究及防治药物筛选及评价；用于肿瘤发生的免疫机制研究及免疫治疗乾点的筛选；用于辐射诱导免疫功能紊乱机制或辐射调节免疫功能的研究；用于辐射诱导其他自身免疫性疾病模型的参考；用于其他化学药物诱导皮肤脱色模型。本发明辐射诱导白癜风小鼠模型与现有的各种白癜风模型相比所具有的积极效果在于(1)本发明选用的irm-2,具有在全身照射下易于出现毛发色素脱失的特性；辐射诱导的IRM-2小鼠白癜风出现早，照射剂量低，更符合拟人体一般机能状态；只需单次y射线全身照射即可成模型，方法筒便。也可扩展不同的方案建立模型；并且可以根据试验的需要选择不同照射剂量。(2)本发明选用的irm-2小鼠繁殖率高，生长快，抵抗力强，作为辐射诱导白癜风的动物模型具有造价低廉，易于在研究和应用中推广使用的特点。(3)本发明建立的irm-2小鼠白癜风模型为研究辐射损伤免疫细胞机制及白癜风发病机理提供了线索，也为治疗白瘢风药物的开发和评价提供了客观标准。(4)本发明的模型具有制备简单、病变出现时间早，发生率高，辐射剂量低等特点，同时也为开发白癜风发病机制的实验研究，筛选新药奠定了基础。实验结果证明本发明所建立的I脂-2小鼠白癜风模型属于易感模型。因此，对于化学毒物或某些免疫抑制病毒诱导引起免疫细胞损伤，皮肤色素脱失的白癜风同样具有指导意义。同时采用本发明所建立的IRM-2小鼠白癜风模型也可以进行化学毒物或某些免疫抑制病毒诱导引起免疫细胞损伤白癜风药物的药理研究及白癜风新药的筛选。具体实施例方式现结合实施例，对本发明动物模型构建方法及作为模型进行机制探讨的描述加以进一步的说明。实施例1实验目的根据以往实验观察，探讨辐射暴露诱导IRM-2小鼠建立白癜风小鼠模型。实验材料1.实验动物C57BL/6小鼠，购自维通利华，批准号SCXK(京)2007-0001;IRM-2小鼠来自中国医学科学研究院放射医学研究所，批准号SCXK(津)2005-00019。I詣-2小鼠是用ICR/JCL小鼠、615小鼠进行杂交，按修饰单线培育出的近交系小鼠，对外有销售。其中的ICR/JCL小鼠，购自中国医学科学院放射医学研究所，615小鼠购自中国医学科学院血液病研究所。2.试剂K3EDTA购自Sigma;CD4、CD8、CD25、B220、NK1.1购自eBioscience公司。CDllc及LysingBuffer购自BDPharmingen公司。celltiter-Gl(^试剂盒购自美国Promega公司；曱基纤维素培养基(MethoCult⑧GFM3534)，StemCellTechnologies,超氧化物歧化酶(SOD)测试盒购自南京建成生物工程研究所。3.实验仪器137Csv射线照射源加拿大原子能有限公司，USD型，Autocell140，剂量率0.79Gy/min。倒置显微镜重庆光学仪器厂；CoulterAltra流式细胞仪美国Beckman;GloMax^^发光检测仪美国Promega。实验方法1.实验分组及照射本实验将小鼠分为七组，雌雄兼有，每组7-9只。分为对照组，1，2，3,4，5，6Gy组。按照剂量分组将照射同一剂量的两种小鼠一同进行全身照射，照射后分组饲养并长期观察皮肤脱色情况及进行积分纪录。2.皮肤脱色观察及积分纪录方法照射后定时观察皮肤脱色情况。出现脱色后，每周观察皮肤脱色情况，并由两人分别进行积分记录。小鼠毛发脱色评分标准为0分毛发无脱色；l分毛发有脱色；2分毛发脱色面积>10%;3分毛发脱色面积>25%;4分毛发脱色面积>50%;5分毛发脱色面积>75%。3.病理取材及固定方法照射后观察10w取材。小鼠处死后，对皮肤病损照相。3.l.皮肤固定用8。/。Na2S小鼠脱毛，在脱色与未脱色交界处，切取宽度约1.5cm的长方形皮肤。取下皮肤后将皮肤展开贴在滤纸上，中性福尔马林固定。3.2.剥离小鼠肾脏与脾脏，称重后，中性福尔马林固定。4.免疫学测定方法4.1取材小鼠摘取眼球取血，K3EDTA抗凝。4.2.染色取50ul抗凝血加入到lml血细胞裂解液中，震荡混匀后，避光放置15min。用含1%血清的PBS溶液洗涂两次后弃去上清，加入100ulPBS悬起细胞，加入相应的抗体，混匀后，避光孵育15min，中间混匀一次。最后加入400ul的PBS，混勻过滤，进4亍流式细胞检测。使用EXP032软件进行检测与用配套的EXP032Analysis软件进行分析。4.3.结果处理采用SPSS11.0软件进行统计学处理5.氧化损伤指标测定小鼠摘取眼球取血，制备血清，按厂家提供方法测定小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活性测定。6.股骨有核细胞计数无菌取小鼠股骨，冲洗骨髓细胞，混匀后过滤，计数细胞，计数结果以每根股骨有核细胞数表示。7.集落形成(克隆)能力测定分装曱基纤维素培养基，-201C保存。用前置于2-8'C冰箱内或室温下解冻；分离小鼠骨髓细胞，胎盘蓝染色计数细胞调整细胞浓度加入M3534，振荡器充分混匀，静置待气泡消失，用3ml注射器连接16#平头注射器针头，加入24孔板放入湿盒，置入37X:,5%0)2培养箱中培养14天。集落形态学观察及计数。从培养第5天开始在倒置显微镜下进行观察。低倍观察集落形成情况，细胞数>30为阳性集落，集落形成率以每105个细胞形成的集落数表示。实验结果及讨论(1)辐射诱导IRM-2小鼠毛发脱色发生率在照射4周后，IRM-2雄性小鼠照射6Gy组全部出现皮肤色素脱失性病变，IRM-2雌性小鼠与C57雄性小鼠均未出现。照射8周后，IRM-2雄性小鼠照射3-6Gy均出现白癜风皮肤色素脱失，3Gy组发病率为25%,4Gy组发病率为75%，5-6Gy组均为100%。IRM-2雌性小鼠照射4-6Gy出现了白癜风，发病率均与IRM-2雄性同剂量照射组一致。而C57雄性小鼠仅在照射5Gy和6Gy出现白癜风，5Gy组发病率为33%,6Gy组发病率为100%。照射10周后小鼠的毛发脱色发生率与8周相似。以上结果显示IRM-2小鼠接受照射可以出现皮肤脱色病变，与对照组C57BL/6小鼠比较，照射诱导毛发脱色的剂量低，发生率呈剂量依赖性。表1照射8周后小鼠的发病率照射剂量IRM-2雄性IRM-2雌性C57雄性3Gy25004Gy757505Gy100100336Gy100100100(2)不同剂量辐射诱导小鼠照射后毛发脱色出现时间观察不同照射剂量小鼠出现病变的最早时间，结果见表2。结果显示，IRM-2小鼠病变出现早。并且照射剂量越高，毛发脱色出现的时间越早。表2不同剂量辐射诱导小鼠毛发脱色出现时间照射剂量IRM-2雄性IRM-2雌性C57雄性3Gy57614Gy35355Gy3535576Gy283542(3)不同剂量辐射诱导小鼠照射后毛发脱色面积照射4周后仅有I詣-2雄性6Gy照射组脱色，脱色面积得分为1.00±0.00。照射8周后，各种小鼠脱色面积得分均呈剂量依赖关系。结果见表2。I詣-2小鼠与C57小鼠比较差异有显著性。表3照射8周后不同小鼠平均脱色面积照射剂量IRM-2雄性IRM-2雌性C57雄性3Gy0.25±0.500.000.004Gy1.50士1.000.75土0.500.005Gy2.25±0.962.25±0.960.33±0,586Gy4.75士0.504.50±0.582,67±0.58照射IO周后不同小鼠平均脱色面积增加，积分呈剂量依赖关系。结果见表4。表4照射IO周后不同小鼠平均脱色面积照射剂量IRM-2雄性IRM-2雌性C57雄性3Gy0.25±0.500.50±0.580.004Gy1.00±0.820.75±0.500.005Gy3.00±0.823.00±1.411.33±2.316Gy5.00±0.004.50±0.583.67±0.58以上结果表明，IRM-2小鼠辐射暴露后易于出现皮肤脱色性病变，与C57比较诱发病损出现率高，病损出现早，并且病变程度呈剂量反应关系，由此获得类似于人皮肤色素脱失(白癜风)的模型。因此，可利用辐射诱导IRM-2小鼠毛发脱色的特征作为诱导性白癜风模型，用于白癜风发病机制的探讨以及防治药物的开发。并提供作为探讨其他自身免疫性疾病模型的可能性。实施例2辐射诱发白癜风小鼠免疫学机制探讨，实验设计同上。1.健康小鼠外周血免疫细胞分型采集小鼠外周血进行免疫细胞分型流式细胞分析，结果见表4。通过检测CD4、CD8、CD25、Dllb、NKl.l，结果发现，IRM-2小鼠与C57小鼠比较，CD4以及CD4/CD8有一定的差别，表现为IRM-2小鼠的CD4/CD8低于C57小鼠。而CDllb则是IRM-2小鼠高于C57小鼠。CD25及NK1.1两种小鼠未见明显区别。两种小鼠免疫细胞分型的差异意义有待于进一步探讨。表5键<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>2.辐射暴露小鼠外周血免疫细胞分型进行辐射暴露后IO周采血进行小鼠T淋巴细胞亚群观察，发现IRM-2CD4、CD8随照射剂量升高，有下降趋势，CD4/CD8有升高趋势，提示CD4和CD8在辐射照射后损伤及恢复的程度不同。表6辐射暴露后小鼠外周血T淋巴细胞亚型照射剂量<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>018.7±3.1616.l土l.1320.8±1.5014.1±1.140.卯±0.801.17±0.02113.8土3.3214-3土0-9121.6土0.787.75±1.480.74土0.101.89±0.43217.8±0.5717.2±1.7016.9±0.9913.03土2,371.03±0.081.37±0.20415.4土1.6914.2土0.1513.7±5.898.93土2.481.58土0.522-53±1.16613.5±3.0312.8±0.4911.1±3.9612.97±0.671.27±0.340.90±0.13检测结果发现，辐射引起暴露小鼠外周血淋巴细胞CD25/CD4升并呈剂量依赖趋势。两组小鼠未见明显差异。结果见表7。表7辐射暴露后小鼠外周血CD25测定照射剂量CD4CD25CD25/CD4(Gy)IRM曙2C57IRM-2C57mM-2C57018.7±3.1616.10±1.131.IO士O.561.40±0.720.90土0.801.87±1.46113.8±3.3214.33土0.910.87±0.250,87土0,151.40±0.360.77±0.31217.8±0.5717.23±1.701.卯±0.142.13±0,813.15±0.071.97±1.29415.4±1.6914.17±0.152.58±1,241,60±0.565.20土1.472.53土1.16613.5±3.0312.77±0.496.68±2.904.50土2.093.94土0.535.50±0.57检测小鼠外周血B细胞亚群，发现照射后小鼠B220比对照组升高，提示可能是T淋巴细胞比例相对降低。反映DC及NK细胞表型未见明显差异。结果见表8。表8辐射暴露后小鼠外周血免疫细胞表型变化照射剂量B220CDllc(Gy)IRM-2C57IRM曙2C57IRM陽2C57038.03±12.7751.63土2.901.20±0.101.27±0.310.87土0.151,17±0.15140,55土2.1952.77±9.500.70±0.530.90±0.780.57±0.060.67±0.32245.50土5.6662.07±3,051.IO土O.710.87±0.12l.OO土O.281.67±0.61453.97±4.4368.03±1.501.35土0.610.53±0.510.70土0.180.67±0.32648.53±12.8353.93±1,403,22土1,501.97±0.763.12±1.682.卯±0.833.辐射暴露小鼠造血免疫细胞从表8可以看出，辐射暴露10周后的小鼠骨髓有核细胞计数及外周血白细胞计数，与对照组未见明显差异(见表9)。但骨髓细胞增殖功能受到抑制，并且呈剂量依赖性。IRM-2小鼠骨髓细胞增殖活力高于对照C57小鼠(P〈0.05~0.01)，辐射对骨髓增殖活性抑制程度低于C57小鼠(结果见表10)。表9辐射暴露后小鼠造血免疫细胞<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>重要脏器如胸腺、脾脏、肺和肾脏重量照射组小鼠与对照组小鼠未见明显差异。结果见表11及表12。表ll辐射暴露后小鼠免疫脏器指数<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>42.70±0.402.38±0.100.87±0.361.37±0.10G2.85±0.362.03±0.050.71±0.301.20±0.19表12辐射暴露后小鼠脏器指数<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>本项实验选择了亚致死剂量l~6Gy照射，测定时间为受照后10周。从脏器重量及骨髓、外周血白细胞计数结果来看，两组小鼠及照射组与对照組没有显著差异，但骨髓细胞增殖功能仍受到不同程度的抑制，IRM-1骨髓细胞计数高，照射后抑制率低，与其辐射抗性特性一致。外周血淋巴细胞分型结杲发现，与C57小鼠比较，IRM-2小鼠CD/CD8比值较高，差异有显著性。CD25/CD4也略高。全身照射后IRM-2的CD4/CD8比值呈升高趋势，这种差异可能与IRM-2某些生物学特性有关。CD25/CD4双阳性细胞是调节性T细胞的一种。调节性T细胞(regulatoryTcells,Treg细胞)通过"主动"的方式抑制免疫系统对自身和外来抗原的应答，在维持机体免疫耐受和免疫应答稳态方面具有非常重要的作用。本次实验发现随照射剂量增加l~6Gy，CD25/CD4细胞比例升高，但两种小鼠未见明显区别。这些结果提示本项研究选择的不同剂量照射后，经过长时间的恢复，虽然脏器未见明显损伤但免疫细胞之间的平衡出现了变化，可能与导致某些自身免疫性样疾病发生有关。建立IRM-2小鼠白癜风4莫型为研究辐射损伤免疫细胞机制及白癜风发病机理提供了线索，也为治疗药物开发和评价提供了客观标准标准。实施例3辐射诱导皮肤脱色性病变过氧化损伤机制的探讨IRM-2小鼠与C57小鼠照射后1周，取外周血，制备血清，测定S0D活力，结果发现未照射组IRM-2低于C57小鼠；照射后S0D活力下降，2Gy、4GylRM-2小鼠降低10%左右，而C57小鼠分别降低30%、40%。提示照射后IRM-2小鼠S0D活力较高。表13小鼠血清中CuZn-SOD活力(U/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>综上所述，本发明的内容并不局限在的实施例中，相同领域内的有识之士可以在本发明的技术指导思想之内可以轻易提出其他的实施例，但这种实施例都包括在本发明的范围之内。权利要求1、一种建立辐射诱导白癜风小鼠模型的方法，包括以下步骤(1)选择纯系IRM-2小鼠，使其全身在γ射线照射下出现毛发色素脱失；(2)单次全身照射后观察10周，记录不同照射剂量下毛发脱色的发生率、发生时间、发病的严重程度；(3)建立以辐射诱导IRM-2小鼠毛发脱色为特征的小鼠模型。2、权利要求1所述建立辐射诱导白瘋风小鼠模型的方法，其中的IRM-2小鼠是用ICR/JCL小鼠、615小鼠进行杂交，按修饰单线培育出的近交系小鼠。3、权利要求1所述建立辐射诱导白癜风小鼠模型的方法，其中所述的辐射包括电离辐射或非电离辐射。4、权利要求1所述建立辐射诱导白癜风小鼠模型的方法，其中的单次全身照射，指的是l6Gy，137CsY射线单次全身照射。5、一种辐射诱导白癜风小鼠模型，其特征在于由权利要求l-4任一项所述的建立方法获得。6、一种权利要求5所定义的辐射诱导白癜风小鼠模型，其特征在于白癜风小鼠模型用于白癜风发病机制的研究及药物筛选中的应用。7、一种权利要求5所定义的辐射诱导白癜风小鼠模型，其特征在于用于肺瘤发生的免疫机制及免疫治疗靶点药物筛选中的应用。8、一种权利要求5所定义的辐射诱导白癜风小鼠模型，其特征在于用于辐射诱导免疫功能紊乱机制或辐射调节免疫功能中的应用。9、一种权利要求5所定义的辐射诱导白癜风小鼠模型，其特征在于用于辐射诱导其他自身免疫性疾病模型中的应用。全文摘要本发明提供了一种应用不同剂量γ射线对IRM-2小鼠全身照射，建立辐射诱导白癜风小鼠模型的方法。辐射诱导的白癜风小鼠模型，主要用于白癜风发病机制的探讨以及防治药物的开发；也可用于肿瘤发生的免疫机制研究及免疫治疗靶点的筛选；还可用于辐射诱导免疫功能紊乱机制的研究。本发明的模型具有制备简单、病变出现时间早，发生率高，辐射剂量低等特点，同时也为开发白癜风发病机制的实验研究，筛选新药奠定了基础。文档编号A61B19/00GK101288602SQ20081005346公开日2008年10月22日申请日期2008年6月10日优先权日2008年6月10日发明者吴红英,孟爱民,张俊伶,李德冠,彦王,王月英,褚丽萍,璐路申请人:中国医学科学院放射医学研究所