专利名称：鸡干扰素长效缓释剂型的制备方法
技术领域：
本发明属于生物药物的制备技术，特别涉及一种鸡干扰素长效缓释剂型 的制备方法。
背景技术：
目前，鸡干扰素都是以注射的途径给药，通常有较好的治疗效果，但多
者每天需要注射1一2次，连用2 — 5天，给养殖业主的使用带来很多不便，因 此将其制成长效剂型便成为人们追求的目标。已有的鸡干扰素存在需要长期 频繁注射、使用不便、生物利用度低以及药物使用量大等缺陷。
因此，提供一种鸡干扰素长效缓释剂型的制备方法，有效预防和治疗各 种鸡病毒性疾病，是该技术领域科研人员急需开发的新课题之一。
发明内容
本发明的目的是为克服已有技术的不足之处，提供一种制备简单、应用 方便、效果显著的鸡干扰素长效缓释剂型的制备方法。
一种鸡干扰素长效缓释剂型的制备方法，其特征在于包括如下步骤
(1) 将一定量的鸡干扰素溶解在含有稳定剂的PBS缓冲溶液，制成水相 溶液(Wl)，鸡干扰素的含量为0.5 — 50毫克/毫升；
(2) 将丙交脂/乙交脂共聚物用二氯甲烷溶解制成油相溶液(0),丙交 脂/乙交脂共聚物的含量为0.1—0.5克/毫升；将上述含鸡干扰素的水相溶 液(Wl)加入到油相溶液(0)中，油相溶液(0)与水相溶液(Wl)的比例 为20 : l至2 : 1，使这两种溶液在温度5 — 3(TC下搅拌，搅拌速度为500—8000 转/分，搅拌时间为0.02—0.2小时，混合均匀；制成初乳W1/0，在4一10。C 下保存；
(3) 将聚乙烯醇充分溶解于水制成水相溶液(W2)，聚乙烯醇的重量浓 度为0.5-50%;将上述初乳W1 / O加入到水相溶液(W2)搅拌均匀，搅拌温度 为5—30°C，搅拌速度为100_3000转/分，搅拌时间为0.2—0.5小时；初乳 Wl /0与水相溶液(W2)的比例为l : 50至1 : 200，制成复乳W1 / 0/W2，在4 —IO'C下保存；
(4) 将复乳Wl/0/W2转移到l-5。/。的NaCl水溶液中，搅拌均匀，搅拌温 度为5 — 30'C，搅拌速度为500 — 3000转/分，搅拌时间为O. 2_0. 5小时，使 有机溶剂挥发，然后离心收集微球；(5)为了保持溶液的稳定，加入一定量的稳定剂，稳定剂直接加入到所 述制备步骤(1)溶液中。
所述稳定剂选自海藻糖、牛血清白蛋白和聚乙二醇的一种或一种以上。 所述稳定剂的加入量为最终溶液的O. 1% — 10%。
所述鸡干扰素为重组鸡基因工程干扰素IFN-a、 IFN-(3和鸡天然白细胞干 扰素。
本发明方法的有益效果是该注射用鸡干扰素长效缓释剂型能够减少鸡 干扰素用药次数，是一种理想的鸡干扰素长效剂型。具有制备工艺简单，容 易实现，应用方便，所需成本低等特点，该方法采用毒性小，注射安全的分 散剂及油相等材料，使鸡干扰素均匀的分散溶解到油相中，最终成为一种鸡 干扰素的长效剂型。采用该方法制成的鸡干扰素的长效剂型体外实验表明， 用鸡扰素为包裹对象，所制得的鸡干扰素微球形态圆整，粒度分布均匀，粒 径分布在40微米以下，载药量可达6.0%以上，包封率在30.0%以上，体外缓 释可以达4周释药，符合长效制剂特征。 一次注射后能够在较长时间内发挥抗 病毒药效。将鸡干扰素做成微球制剂，可以延长药物作用时间，大大提高药 物疗效和经济效益。
具体实施例方式
以下结合实施例，对依据本发明提供的具体实施方式
详述如下 实施例l
一种鸡干扰素长效缓释剂型的制备方法，其特征在于具体实施步骤如下
(1) 将40毫克鸡基因工程干扰素IFN-a溶解在l毫升含有2yo的海藻糖的PBS缓冲溶液，制成水相溶液(Wl);
(2) 将1000毫克丙交脂/乙交脂共聚物溶解于4毫升二氯甲垸制成油相
溶液(0);
(3) 将上述含鸡干扰素的水相溶液(Wl)加入到油相溶液(0)中，使 这两种溶液在温度15i:下、搅拌速度为8000转/分、搅拌时间为0.05小时， 搅拌混合，制成初乳W1/0，在4一10'C下保存；
(4) 将上述初乳W1 / 0在1500转/分搅拌情况下加入到300毫升2%的聚乙 烯醇中，搅拌温度为5 —30°C，搅拌时间为0,2小时，制成复乳Wl/0/W2， 在4一1(TC下保存；
(5) 将复乳Wl/0/W2加入到3倍复乳体积的P認aCl水溶液中，通过1500 转/分搅拌使有机溶剂挥发，然后2000转/分，离心15分钟，收集微球，存放 于冰箱中冷藏。
所制得的鸡干扰素微球形态圆整，粒度分布均匀，平均粒径在21.2微米，载药量可达8.9%，包封率在35.9%，体外释放实验表明，缓释可以达4周， 符合长效制剂特征。动物实验证明这种新型干扰素除具有干扰素的抗鸡病毒 作用外，其在体内的半衰期是普通鸡干扰素的3倍，从而延长了其在体内的作 用时间。
实施例2
一种鸡干扰素长效缓释剂型的制备方法，其特征在于具体实施步骤如下:
(1) 将80毫克鸡天然白细胞干扰素溶解在1. 5毫升含有2%的牛血清白蛋 白的PBS缓冲溶液，制成水相溶液(Wl);
(2) 将1200毫克丙交脂/乙交脂共聚物溶解于4毫升二氯甲烷制成油相 溶液(0);
(3) 将上述含鸡干扰素的水相溶液(Wl)加入到油相溶液(0)中，使 这两种溶液在温度15'C下、搅拌速度为8000转/分、搅拌时间为0.05小时， 搅拌混合，制成初乳W1/0，在4一1(TC下保存；
(4) 将上述初乳W1 / 0在2000转/分搅拌情况下加入到400毫升3%的聚乙 烯醇中，搅拌温度为5 — 3(TC，搅拌时间为0.2小时，制成复乳Wl/0/W2， 在4一1(TC下保存；
(5) 将复乳W1/0/W2加入到2倍复乳体积的l。/。NaCl水溶液中，通过1000 转/分搅拌使有机溶剂挥发，然后1300转/分离心20分钟，收集微球，存放于 冰箱中冷藏。
所制得的鸡干扰素微球形态圆整，粒度分布均匀，平均粒径在15.9微米， 载药量可达6.9%，包封率在31.8%，体外释放实验表明，缓释可以达3周， 符合长效制剂特征。动物实验证明这种新型干扰素除具有干扰素的抗鸡病毒 作用外，其在体内的半衰期是普通鸡干扰素的4.2倍，从而延长了其在体内的 作用时间。
实施例3
一种鸡干扰素长效缓释剂型的制备方法，其特征在于具体实施步骤如下
(1) 将20毫克鸡基因工程干扰素IFN-(3溶解在0. 5毫升含有2%的聚乙二醇 4000的PBS缓冲溶液，制成水相溶液(Wl);
(2) 将800毫克丙交脂/乙交脂共聚物溶解于2毫升二氯甲烷制成油相溶 液(0);
(3) 将上述含鸡干扰素的水相溶液(Wl)加入到油相溶液(0)中，使 这两种溶液在温度15"C下、搅拌速度为8000转/分、搅拌时间为0.05小时， 搅拌混合，制成初乳W1/0，在4一10。C下保存；
(4) 将上述初乳W1 /0在2000转/分搅拌情况下加入到400毫升3%的聚乙烯醇中，搅拌温度为5 — 3(TC，搅拌时间为0.2小时，制成复乳Wl/0/W2， 在4一10'C下保存；
(5)将复乳W1/0/W2加入至lj3倍复乳体积的2。/。NaCl水溶液中，通过800 转/分搅拌使有机溶剂挥发，然后1800转/分离心10分钟，收集微球，存放于 冰箱中冷藏。
所制得的鸡干扰素微球形态圆整，粒度分布均匀，平均粒径在18.4微米， 载药量可达7.9%，包封率在30.0%，体外释放实验表明，缓释可以达3周， 符合长效制剂特征。动物实验证明这种新型干扰素除具有干扰素的抗鸡病毒 作用外，其在体内的半衰期是普通鸡干扰素的5.6倍，从而延长了其在体内的 作用时间。
上述参照实施例对该鸡干扰素长效缓释剂型的制备方法进行的详细描 述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例， 因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。
权利要求
1、一种鸡干扰素长效缓释剂型的制备方法，其特征在于包括如下步骤(1)将一定量的鸡干扰素溶解在含有稳定剂的PBS缓冲溶液，制成水相溶液(W1)，鸡干扰素的含量为0.5—50毫克/毫升；(2)将丙交脂/乙交脂共聚物用二氯甲烷溶解制成油相溶液(0)，丙交脂/乙交脂共聚物的含量为0.1—0.5克/毫升；将上述含鸡干扰素的水相溶液(W1)加入到油相溶液(0)中，油相溶液(0)与水相溶液(W1)的比例为20∶1至2∶1，使这两种溶液在温度5—30℃下搅拌，搅拌速度为500—8000转/分，搅拌时间为0.02—0.2小时，混合均匀；制成初乳W1/0，在4—10℃下保存；(3)将聚乙烯醇充分溶解于水制成水相溶液(W2)，聚乙烯醇的重量浓度为0.5-50％；将上述初乳W1/0加入到水相溶液(W2)搅拌均匀，搅拌温度为5—30℃，搅拌速度为100—3000转/分，搅拌时间为0.2—0.5小时；初乳W1/0与水相溶液(W2)的比例为1∶50至1∶200，制成复乳W1/0/W2，在4—10℃下保存；(4)将复乳W1/0/W2转移到1-5％的NaCl水溶液中，搅拌均匀，搅拌温度为5—30℃，搅拌速度为500—3000转/分，搅拌时间为0.2—0.5小时，使有机溶剂挥发，然后离心收集微球；(5)为了保持溶液的稳定，加入一定量的稳定剂，稳定剂直接加入到所述制备步骤(1)溶液中。
2、 根据权利要求l所述的鸡干扰素长效缓释剂型的制备方法，其特征在 于所述丙交脂/乙交脂共聚物分子量为2000-5000Da。
3、 根据权利要求l所述的鸡干扰素长效缓释剂型的制备方法，其特征在 于所述稳定剂选自海藻糖、牛血清白蛋白和聚乙二醇的一种或一种以上。
4、 根据权利要求l所述的鸡干扰素长效缓释剂型的制备方法，其特征在 于所述稳定剂的加入量为最终溶液的O. 1% — 10%。
5、 根据权利要求l所述的鸡干扰素长效缓释剂型的制备方法，其特征在 于所述鸡干扰素为重组鸡基因工程干扰素IFN-a、 IFN-(3和鸡天然白细胞干扰 素。
全文摘要
本发明公开了一种可每周肌肉注射一次的鸡干扰素长效缓释剂型的制备方法，其特征在于采用复乳-溶剂挥发法制备，丙交脂/乙交脂共聚物为微球载体，用鸡干扰素为包裹对象，制成的鸡干扰素长效缓释剂型体外释药性能符合长效制剂特征。本发明有益效果是该注射用鸡干扰素长效缓释剂型克服了已有的鸡干扰素注射针剂需要长期频繁注射、使用不便以及生物利用度低和药物使用量大的缺陷，一次注射后能够在较长时间内发挥抗病毒药效，是理想的鸡干扰素的长效剂型。本发明制备简单，应用简便，且易吸收，更好的发挥治疗鸡病毒性疾病的效果。
文档编号A61K47/34GK101411870SQ200810053410
公开日2009年4月22日 申请日期2008年6月3日 优先权日2008年6月3日
发明者王连民, 田杏芳 申请人:天津生机集团股份有限公司