一种气虚型胃肠功能障碍小鼠动物模型的构建方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种气虚型胃肠功能障碍动物模型的建立，通过给ICR小鼠灌服芒硝 过饱和溶液以达到让小鼠产生腹胀、腹泻、体重减轻等中医气虚临床表现及胃肠动力减退、 胃肠黏膜损伤等西医胃肠功能障碍的临床表现和病理改变，为研发治疗胃肠功能障碍新物 提供一个稳定、可靠的动物模型。 (二）
【背景技术】
[0002] 胃肠功能障碍是指机体在受到创伤、感染、失血等严重损害时，胃肠道出现的严重 应激反应，表现为各种致病因素导致胃肠黏膜受损及肠道免疫系统功能下降，肠道屏障功 能被破坏，肠道内的细菌与细菌毒素转移到肠外（即发生细菌移位）。
[0003] 胃肠功能障碍的病因非常广，近年来有学者对胃肠功能障碍提出了新的分类：I 型胃肠功能障碍多指腹部手术后自限性胃肠功能障碍；II型胃肠功能障碍是指危重病人的 胃肠功能障碍，这些患者除行小肠广泛切除外，还并发有感染、代谢和营养并发症；III型胃 肠功能障碍是指需要长期甚至终身营养支持的慢性胃肠功能障碍。
[0004] 通过长期的临床观察发现，很多危重症患者在无明显的创伤、感染、出血等应激情 况下却也出现了严重的胃肠功能障碍，常表现为腹胀、腹泻和严重营养不良，这类患者符合 胃肠功能障碍临床表现但很难归类到以上三型胃肠功能障碍，西医学很难阐明其发病机 理。而中医学却能很好解释这一理论：《黄帝内经?素问?宣明?五气篇》有云"久卧伤气"； 《素问?平人气象论》又云"人以水谷为本"。重症患者在抢救及恢复过程中往往需要长期 卧床，致使气机失调；这类病人由于病情危重，无法自主进食而依靠全胃肠外营养，致使丧 失了脾胃"后天之本一水谷精微"的濡养，导致气血本源缺失，进一步导致了脾胃气虚，进 而影响小肠的泌清别浊和大肠通降功能失常，出现腹胀、腹泻等症状，同时脾的运化功能减 退，气血生化无缘，气血虚亏，五脏六腑失去濡养，导致其他脏器功能衰竭，这与胃肠功能障 碍的临床表现相一致。所以大部分此类胃肠功能障碍患者在症型上符合中医气虚的临床表 现，疾病上符合"痞满"和"泄泻"病范畴。
[0005] 国内没有涉及胃肠功能障碍中医症型动物模型实验研究，因此本发明将对中医药 在胃肠功能衰竭疾病领域治疗优势的发挥起到很大的促进作用。 (三）
【发明内容】
[0006] 本发明目的在于通过芒硝过饱和溶液灌胃建立一种气虚型胃肠功能障碍的小鼠 动物模型，为评价治疗胃肠功能障碍药物的疗效提供一种可靠的动物模型平台。
[0007] 本发明采用的技术方案是：
[0008] 本发明涉及一种气虚型胃肠功能障碍小鼠动物模型的构建方法，所述方法为：用 过饱和芒硝水溶液灌胃小鼠10-15天，再灌胃四君子汤7-10天，当小鼠出现下列第（1)、（4) 和（6)或多种症状时，气虚型胃肠功能障碍的小鼠动物模型构建成功：⑴体重减少，小鼠 毛色变灰暗、无光泽，（2)进食量减少，（3)粪便变稀，（4)小肠粘膜损伤评分变差，（5)胃体 积增大以及（6)胃肠碳粉推进指数下降；所述过饱和芒硝水溶液的用量为0. 1-0. 3ml/10g 体重，所述四君子汤用量为〇. lml/10g体重；所述四君子汤为党参、白术、茯苓和炙甘草按 重量比3:3:3:2混合后，加水煎煮而成。上述（1)-(6)症状中出现（1)、（4)和（6)或者还 出现其他3种症状中的一种或多种，则表明模型构建成功。
[0009] 本发明所述小鼠为ICR小鼠，优选所述小鼠为健康成年ICR小鼠，体重18_22g。
[0010] 本发明所述过饱和芒硝水溶液的用量优选为〇. 3ml/10g体重。
[0011] 本发明所述四君子汤用量为0. lml/10g体重，所述四君子汤的生药量为500mg/ ml〇
[0012] 本发明的有益效果主要体现在：现有盲肠结扎穿刺法大鼠脓毒症胃肠功能衰竭模 型存在造模不稳定，致死率高，且无法观测治疗效果等缺点，本发明提供一种稳定性高、易 于推广、重复性好、经济实用的气虚型胃肠功能障碍小鼠动物模型，为中医药治疗胃肠功能 障碍的临床前期研究提供实验基础。 (四）
【附图说明】
[0013] 图1为小肠组织标本HE染色的光学显微镜图，其中A为对照组（100倍），B为对 照组（400倍），C为造模安慰剂组（100倍），D为造模安慰剂组（400倍），E为模型组（100 倍），F为模型组（400倍），G为自愈组（100倍），H为自愈组（400倍），I为四君子汤组 (100倍），J为四君子汤组（400倍）。 (五）
【具体实施方式】
[0014] 下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于 此：
[0015] 本发明实施例所述党参、白术、茯苓、炙甘草均采用药学2010版中国药典制备。
[0016] 实施例1:药物的制备
[0017] (1)四君子汤：党参9g、白术9g、茯苓9g、炎甘草6g
[0018] 各生药均用清水浸泡30分钟，由浙江省中医院中药房煎熬至每mL含生药材 500mg。按照体表系数换算法，与人临床剂量等效的小鼠剂量为42. 9mg/10g ? d(计算公式 为：小鼠用量g/kg ? d =人一天剂量*0. 0026/0. 02)。
[0019] (2)芒硝过饱和水溶液：将芒硝（十水合硫酸钠Na2S04 ? 10H20)粉碎后过20目筛 网，逐渐加入到室温（约20°C )蒸馏水中，用磁力搅拌器搅拌，直到出现芒硝结晶体析出，再 搅拌15分钟，析出的结晶体不再溶解，此时的溶液即为芒硝过饱和水溶液。
[0020] 实施例2:动物模型的构建及验证
[0021] 1 ?动物分组
[0022] 健康成年雄性ICR小鼠120只，体重18_22g，根据数字随机表随机选取24只为对 照组，24只为造模安慰剂组，72只为实验组。实验组小鼠再随机分成模型组、自愈组、四君 子汤组各24只。
[0023] 2.分组给药方法
[0024] 对照组给予小鼠饲料正常饮食10天，造模安慰剂组正常饮食的同时给予生理 盐水0.3ml/10g的剂量灌胃10天。实验组小鼠正常饮食的同时给予芒硝过饱和水溶液 0. 3ml/10g的剂量灌胃10天。10天后，对照组、造模安慰剂组、模型组的部分小鼠立即处死 进行（一般情况观察，平均稀便级，体重变化增值曲线，胃体积，碳粉推进指数，显微镜下肠 上皮损伤情况大体及chiu评分等指标检测检测，剩余小鼠进行实验；四君子汤组小鼠继续 正常饮食的同时给予四君子汤〇. lml/10g灌胃7天，进行检测（一般情况观察，平均稀便 级，体重变化增值曲线，胃体积，碳粉推进指数，显微镜下肠上皮损伤情况大体及chiu评分 等指标检测）；自愈组小鼠继续正常饮食的同时给予〇. lml/10g生理盐水灌胃7天，进行检 测（一般情况观察，平均稀便级，体重变化增值曲线，胃体积，碳粉推进指数，显微镜下肠上 皮损伤情况大体及chiu评分等指标检测）。
[0025] 3. -般情况观察
[0026]对照组与造模安慰剂组小鼠毛色光亮、爪尾红润、食欲正常，粪便成形，纺锤状，含 水量适中，未出现异常特征，无死亡。实验组小鼠体毛光亮度减退、毛色偏黄、爪尾苍白、食 欲明显减退，粪便稀软糊状，排泄物异味重，活动减少，精神出现不同程度的萎靡。经历7天 恢复期后，自愈组小鼠体毛仍无光泽、毛色发黄、爪尾苍白、进食量略有增加、粪便质软不成 形、静卧少动。四君子汤组小鼠体毛光亮度仍不满意、进食量较自愈组明显增多、粪便成形、 活动正常。
[0027]4?平均稀便级
[0028] (1)小鼠稀便级表示稀便的程度，反映小鼠消化吸收能力，以稀便污染滤纸形成污 迹的直径大小定级。本实验采用平均稀便级（见表1)
[0029] 表1平均稀便级分级标准
[0030]
【主权项】
1. 一种气虚型胃肠功能障碍小鼠动物模型的构建方法，其特征在于所述方法为：用 过饱和芒硝水溶液灌胃小鼠10-15天，再灌胃四君子汤7-10天，当小鼠出现下列第（1)、 (4) 和（6)或多种症状时，气虚型胃肠功能障碍的小鼠动物模型构建成功：⑴体重减少， 小鼠毛色变灰暗、无光泽，（2)进食量减少，（3)粪便变稀，（4)小肠粘膜损伤评分变差， (5) 胃体积大小变大以及(6)胃肠碳粉推进指数下降；所述过饱和芒硝水溶液的用量为 0. 1-0. 3ml/10g体重,所述四君子汤用量为0. lml/10g体重；所述四君子汤为党参、白术、获 苓和炙甘草按重量比3:3:3:2混合后，加水煎煮而成。
2. 如权利要求1所述气虚型胃肠功能障碍小鼠动物模型的构建方法，其特征在于所述 小鼠为ICR小鼠。
3. 如权利要求2所述气虚型胃肠功能障碍小鼠动物模型的构建方法，其特征在于所述 小鼠为健康成年ICR小鼠，体重18-22g。
4. 如权利要求1所述气虚型胃肠功能障碍小鼠动物模型的构建方法，其特征在于过饱 和芒硝水溶液的用量为0. 3ml/10g体重。
5. 如权利要求1所述气虚型胃肠功能障碍小鼠动物模型的构建方法，其特征在于所述 四君子汤的生药量为500mg/ml，用量为0. lml/lOg体重。
【专利摘要】本发明公开了一种气虚型胃肠功能障碍小鼠动物模型的构建方法，所述方法为：用过饱和芒硝水溶液灌胃小鼠10-15天，再灌胃四君子汤7-10天，当小鼠出现下列第(1)、(4)和(6)或多种症状时，气虚型胃肠功能障碍的小鼠动物模型构建成功：(1)体重减少，小鼠毛色变灰暗、无光泽，(2)进食量减少，(3)粪便变稀，(4)小肠粘膜损伤评分变差，(5)胃体积增大以及(6)胃肠碳粉推进指数下降；气虚型胃肠功能障碍的小鼠动物模型构建成功；本发明提供一种稳定性高、易于推广、重复性好、经济实用的气虚型胃肠功能障碍小鼠动物模型，为中医药治疗胃肠功能障碍的临床前期研究提供实验基础。
【IPC分类】A61K36-484, A61K49-00
【公开号】CN104622945
【申请号】CN201410853675
【发明人】黄立权, 王灵聪, 江荣林, 雷澍, 智屹惠, 吴艳春, 朱美飞
【申请人】浙江中医药大学附属第一医院
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2014年12月31日