稻上饲养一代后，再接入虫笼不同水稻材料水稻上饲养，得到不同水稻材料的褐飞虱种群。
[0027]供试水稻品种:抗除草剂转基因水稻“Bar68-1”为中国科学院亚热带农业生态研宄所、湖南杂交水稻研宄中心和香港中文大学共同培育的早籼稻，系用基因枪法将Bar基因转入籼稻品种“D68”而得的抗草铵膦转基因水稻(Xiao G.Y.a7.，2007)，非转基因亲本对照品种为“D68”，均由中国科学院亚热带农业生态研宄所提供。感虫对照品种“TN1 ”由广西农业科学院植物保护研宄所提供。
[0028]具体步骤为:
步骤S1:分别收集转基因抗除草剂水稻、非转基因亲本对照水稻和非转基因感虫对照水稻的稻株伤流液；
取60日龄的转基因抗除草剂水稻Bar68-1、非转基因亲本对照水稻D68和非转基因感虫对照水稻TNl的稻苗，除去外叶鞘后斜置，24 h后用经酒精消毒的剪刀在离土 10 cm处剪去主茎上半部分，如图1所示，将水稻茎杆I切成倾斜状2，稻株伤流液容器3与茎杆接触的部分也做成倾斜口 4，将稻株伤流液容器3的倾斜口 4与倾斜状2的下部连接。采用此技术方案，利用稻株伤流液引流到倾斜状下部后再进行收集，这样可以克服常规方法收集时稻株伤流液容易漏出的问题。
[0029]步骤S2:在棉球分别放入到60日龄的转基因抗除草剂水稻Bar68_l、非转基因亲本对照水稻D68和非转基因感虫对照水稻TNl稻株伤流液中浸泡，另外再放入棉球在蒸馏水中浸泡作为对照，以不滴水为标准；如图2所示，然后将吸收了转基因抗除草剂水稻Bar68-1稻株伤流液、非转基因亲本对照水稻D68稻株伤流液、非转基因感虫对照水稻TNl稻株伤流液和蒸馏水的棉球、分别装入四个喂食容器管21中，所述喂食容器管21的侧壁设有通孔22 ;将这四个喂食容器管21分别放入到四个试验箱23中。
[0030]步骤S3:如图2所示，将10头/箱24 h内羽化的黑肩绿盲蝽成虫分别装入到四个试验箱中，并盖上试验箱盖24，所述验箱盖24上也设有通孔25 ;每6 h检查黑肩绿盲蝽成虫的存活数，直到成虫死亡；期间需保证棉球湿润需及时用胶头滴管补充各比较样本的稻株伤流液。上述试验每个处理(不同水稻材料伤流液或蒸馏水对照)重复3次，即每个水稻材料试验用黑肩绿盲蝽雌、雄成虫各30头，共60头成虫，4个处理共用黑肩绿盲蝽成虫240头O
[0031]步骤S4:以5头/根的数量将怀卵褐飞虱雌虫分别在转基因抗除草剂水稻Bar68-1、非转基因亲本对照D68和非转基因感虫品种TNl稻茎上产卵24h，得到带有褐飞虱卵的上述三种水稻稻茎； 将这三种带有褐飞虱卵的水稻稻茎以I根/箱的数量分别放入步骤S2所述的装有对应的转基因抗除草剂水稻、非转基因亲本对照水稻和非转基因感虫对照水稻的稻株伤流液棉球喂食容器的三个试验箱23中，然后以I头/箱的数量将24 h内羽化的黑肩绿盲蝽雌成虫分别装入到三个试验箱23中，让其在箱内捕食不同水稻材料上的褐飞虱卵。24 h后，解剖稻株，得到褐飞虱卵被黑肩绿盲蝽捕食的数量。
[0032]另外准备两个装有蒸馏水棉球喂食容器的试验箱23，连同步骤S3的装有蒸馏水棉球喂食容器的试验箱23，一共为三个装有蒸馏水棉球喂食容器的试验箱23，将上述三种带有褐飞虱卵的水稻稻茎按照水稻品种分别以I根/箱的数量放入三个装有蒸馏水棉球喂食容器的试验箱23中，然后以I头/箱的数量将24 h内羽化的黑肩绿盲蝽雌成虫分别装入这三个试验箱23中，让其在箱内捕食褐飞虱卵；24 h后，解剖稻株，得到褐飞虱卵被黑肩绿盲蝽捕食的数量。
[0033]上述试验一共六个处理，即:
处理A:产有Bar68-1褐飞虱种群卵块的Bar68_l稻杆，喂食容器内为浸有Bar68_l伤流液(伤流液用来喂食黑肩绿盲蝽成虫用)的棉球；
处理B:产有D68褐飞虱种群卵块的D68稻杆，喂食容器内为浸有D68伤流液的棉球； 处理C:产有TNl褐飞虱种群卵块的TNl稻杆，喂食容器内为浸有TNl伤流液的棉球； 处理D:产有Bar68-1褐飞虱种群卵块的Bar68_l稻杆，喂食容器内为浸有蒸馏水的棉球；
处理E:产有D68褐飞虱种群卵块的D68稻杆，喂食容器内为浸有蒸馏水的棉球；
处理F:产有TNl褐飞虱种群卵块的TNl稻杆，喂食容器内为浸有蒸馏水的棉球。
[0034]上述每个处理重复10次，即每个处理试验用黑肩绿盲蝽雌成虫10头、褐飞虱雌成虫50头，6个处理共用黑肩绿盲蝽雌成虫60头、褐飞虱雌成虫300头。
[0035]步骤S5:比较转基因抗除草剂水稻Bar68_l伤流液、非转基因感虫对照水稻TNl伤流液、非转基因亲本对照水稻D68伤流液和蒸馏水空白对照处理间，黑肩绿盲蝽的雌、雄成虫寿命以及褐飞虱卵捕食量的差异显著性，分析转基因抗除草剂水稻对黑肩绿盲蝽生物学特性和捕食能力的影响。
[0036]本例的结果显示，如图3和图4所示，黑肩绿盲蝽在取食转基因抗除草剂水稻Bar68-1伤流液后，雌、雄成虫寿命与非转基因亲本对照D68和非转基因感虫对照TNl的伤流液相比，差异不显著。
[0037]如图5所示，通过上述六个处理之间的对比可以发现，无论是否有稻株伤流液的存在，黑肩绿盲蝽的捕食能力在三种水稻材料之间不存在显著差异，即转基因抗除草剂水稻Bar68-1对黑肩绿盲蝽成虫捕食褐飞虱卵的影响，与非转基因亲本对照D68和非转基因感虫对照TNl对黑肩绿盲蝽成虫捕食褐飞虱卵的影响一致。
[0038]以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。
【主权项】
1.转基因抗除草剂水稻对黑肩绿盲蝽环境安全性的评价方法，其特征在于，包括以下步骤: 步骤S1:确定比较样本的水稻品种得到各比较样本，分别收集所述各比较样本水稻的稻株伤流液； 步骤S2:用载体分别吸收所述各比较样本水稻的稻株伤流液，然后将吸收了稻株伤流液的载体分别装入喂食容器中得到各比较样本的喂食容器，所述喂食容器的侧壁设有通孔；准备与样本数量相同的试验箱，将所述各比较样本的喂食容器分别放入各试验箱中； 步骤S3:将24 h内羽化的黑肩绿盲蝽成虫分别装入到所述步骤S2装有对应的比较样本喂食容器的各试验箱中，每6 h检查黑肩绿盲蝽成虫的存活数，直到成虫死亡； 步骤S4:准备带有褐飞虱卵的所述各比较样本水稻稻茎；将带有褐飞虱卵的各比较样本水稻稻茎放入到所述步骤S2装有对应的比较样本喂食容器的各试验箱中，将24h内羽化的黑肩绿盲蝽雌成虫也装入到所述各试验箱中，24h后，解剖稻株，得到褐飞虱卵被黑肩绿盲蝽捕食的数量； 步骤S5:分析所述各比较样本间黑肩绿盲蝽的成虫寿命以及黑肩绿盲蝽捕食褐飞虱卵量的差异显著性，分析转基因抗除草剂水稻对黑肩绿盲蝽生物学特性和捕食能力的影响。
2.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于:所述各比较样本的水稻品种为三个，分别为转基因抗除草剂水稻、非转基因亲本对照水稻和非转基因感虫对照水稻。
3.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于:还包括以蒸馏水代替稻株伤流液喂食作为对照，重复所述步骤S2到步骤S5的步骤。
4.根据权利要求1~3任意一项所述的评价方法，其特征在于:步骤SI中，所述稻株伤流液采用稻株伤流液收集容器进行收集，所述稻株伤流液收集容器的上部设有倾斜部；具体操作包括先将水稻茎杆切成倾斜状，将所述稻株伤流液收集容器的倾斜部与所述水稻茎杆切成的倾斜状连接，收集稻株伤流液。
5.根据权利要求1~3任意一项所述的评价方法，其特征在于:步骤S2中，所述喂食容器为圆柱形中空管。
6.根据权利要求1~3任意一项所述的评价方法，其特征在于:所述步骤S4中，准备带有褐飞虱卵的各比较样本水稻稻茎的方法为，将怀卵褐飞虱雌虫分别在各比较样本的稻茎上产卵24h，得到带有褐飞虱卵的各比较样本的水稻稻茎。
7.根据权利要求1~3任意一项所述的评价方法，其特征在于:所述步骤S3中，将24h内羽化的黑肩绿盲蝽成虫装入到试验箱后，定时用胶头滴管给载体补充所述各比较样本的稻株伤流液，保证载体湿润。
8.根据权利要求1~3任意一项所述的评价方法，其特征在于:所述黑肩绿盲蝽为室内用TNl水稻品种上饲养的实验种群。
9.根据权利要求1~3任意一项所述的评价方法，其特征在于:所述褐飞虱为在TNl水稻上饲养一代后，再接入虫笼中的不同水稻材料上饲养得到的种群。
10.根据权利要求1~3任意一项所述的评价方法，其特征在于:所述载体为棉球、棉花或棉布中至少一种。
【专利摘要】本发明提供了一种转基因抗除草剂水稻对黑肩绿盲蝽环境安全性的评价方法，包括以下步骤：收集比较样本的稻株伤流液；用载体分别吸收比较样本的稻株伤流液，然后将载体装入喂食容器中；将喂食容器放入试验箱中，将黑肩绿盲蝽成虫装入到试验箱中，定时检查黑肩绿盲蝽成虫的存活数，直到成虫死亡；将带有褐飞虱卵的稻茎放入喂食容器中，并将黑肩绿盲蝽雌成虫装入到试验箱中，24h后，解剖稻株；分析比较样本间黑肩绿盲蝽的成虫寿命以及捕食褐飞虱卵量的差异显著性。该方法在室内测定，易于控制，准确性高，周期性短，可以准确快速地研究转基因稻株伤流液对黑肩绿盲蝽的影响，可以为转基因水稻对天敌昆虫的安全性评价提供新的方法。
【IPC分类】A01G7-00, A01K67-033
【公开号】CN104813855
【申请号】CN201510214500
【发明人】蒋显斌, 龙丽萍, 黄芊, 凌炎, 陈玉冲
【申请人】广西壮族自治区农业科学院水稻研究所
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2015年4月29日