一种芒果茎段无菌系体系建立的方法
【专利说明】
【技术领域】
[0001]本发明属于植物组织培养领域，涉及一种芒果茎段无菌系体系建立的方法。
【【背景技术】】
[0002]芒果(mangiferaindica)属于漆树科(anacardiaceae)芒果属(meagifera)，是热带优质水果之一，是世界第二大热带水果。芒果肉质细嫩，风味浓郁，营养丰富，具有十二种必需氨基酸，维生素A和C、胡萝卜素等含量较高。食用芒果具有抗癌、美化肌肤、防止高血压、动脉硬化、防止便秘、止咳、清肠胃的功效，是消费者非常喜爱的热带亚热带著名水果，素有“热带果王”之美誉。中国是仅次于印度的第二大芒果生产国，芒果栽培地区主要分布于海南、广西、广东、云南和四川的金沙江干热河谷区域，广西百色市则以盛产芒果而闻名，具有很高的经济价值和社会价值。芒果是基因高度杂合的木本植物，种子的存活期不长，用传统的育种方法改良芒果较困难。
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【发明内容】
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[0003]鉴于以上内容，本发明提供一种芒果茎段无菌系体系建立的方法，该方法利用芒果幼嫩枝条作为外植体进行组织培养，实现了芒果茎段培养诱导无菌芽，达到快速繁殖的作用。
[0004]本发明所采用的技术方案是:一种芒果茎段无菌系体系建立的方法，包括以下步骤:1)剪取芒果嫩枝茎段作为外植体预处理；2)灭菌；3)接种；4)白炽光照培养；5) 二次灭菌；6)获取再生植株。
[0005]进一步地，在步骤I)中，芒果嫩枝茎段为剪取芒果树上新抽的嫩枝条，剪刀剪去叶片，留0.5cm的叶柄，枝条剪成1.5cm长带一个腋芽的茎段。
[0006]进一步地，在步骤I)中，用流水冲洗莖段1min后，而后用0.01%高猛酸钾溶液浸泡15min，再用流水冲洗30min。
[0007]进一步地，在步骤2)中，将经步骤I)处理后的茎段放置在灭菌过的超净工作台上，用75%酒精对茎段灭菌20s，而后用无菌水冲洗3次，再用0.1% HgCljP 3滴吐温-80灭菌13min，最后用无菌水冲洗5次。
[0008]进一步地，在步骤3)中，将经步骤2)灭菌后的茎段接种到菌种培养基，该菌种培养基为 1/2MS+6-BA 4.0mg/L，pH 为 5.8。
[0009]进一步地，在步骤4)中，将步骤3)中的菌种培养基放置在白炽光照环境下培养4天，光照时间为12h。
[0010]进一步地，在步骤5)中，将经步骤4)培养得到的茎段重新放置在超净工作台上用0.1% HgCljP 3滴吐温-80灭菌5min，再用无菌水冲洗5次。
[0011]进一步地，在步骤6)中，将经步骤5)的茎段接种到传代培养基中培养，以获取再生植株。
[0012]进一步地，所述传代培养基为1/2MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.2mg/L，pH 为 5.8。
[0013]本发明的有益效果是:打破传统的以体细胞胚发生途径获得芒果再生植株，同时能够传承母株的优良性状，获得大量芒果组培苗，实现了芒果茎段培养诱导无菌芽，达到快速繁殖的作用。
【【具体实施方式】】
[0014]以下实施例对本发明作进一步说明。
[0015]一种芒果茎段无菌系体系建立的方法，所述方法包括以下步骤:
[0016]I)芒果嫩枝茎段作为外植体的预处理:芒果嫩枝茎段为剪取芒果树上新抽的嫩枝条，剪去叶片，留0.5cm的叶柄，枝条剪成1.5cm长带一个腋芽的茎段，作为外植体，在本实施方式中，用流水冲洗莖段1min,而后用0.01%高猛酸钾溶液浸泡15min，再用流水冲洗30min，冲洗完成后备用；
[0017]2)灭菌:将经步骤I)处理后的茎段放置在灭菌过的超净工作台上，用75%酒精对茎段灭菌20s，而后用无菌水冲洗3次，再用0.1 % HgCljP 3滴吐温-80灭菌13min，最后用无菌水冲洗5次；
[0018]3)接种:将经步骤2)灭菌后的茎段接种到菌种培养基，该菌种培养基为1/2MS+6-BA4.0mg/L, pH 为 5.8 ;
[0019]4)白炽光照培养:将步骤3)中的菌种培养基放置在白炽光照环境下培养4天，光照时间为12h ；
[0020]5) 二次灭菌:将经步骤4)培养得到的茎段重新放置在超净工作台上用0.1%HgCljP 3滴吐温-80灭菌5min，再用无菌水冲洗5次后；
[0021]6)获取芒果再生植株:将经步骤5) 二次灭菌后的茎段接种到传代培养基中培养，以获取再生植株，该传代培养基为1/2MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.2mg/L，pH为5.8。
[0022]上述芒果茎段无菌系体系建立的方法打破传统的以体细胞胚发生途径获得芒果再生植株，同时能够传承母株的优良性状，获得大量芒果组培苗，实现了芒果茎段培养诱导无菌芽，达到快速繁殖的作用。
【主权项】
1.一种芒果茎段无菌系体系建立的方法，其特征在于:包括以下步骤:1)剪取芒果嫩枝茎段作为外植体预处理；2)灭菌；3)接种；4)白炽光照培养；5) 二次灭菌；6)获取再生植株。2.根据权利要求书I所述的芒果茎段无菌系体系建立的方法，其特征在于:在步骤I)中，芒果嫩枝茎段为剪取芒果树上新抽的嫩枝条，剪刀剪去叶片，留0.5cm的叶柄，枝条剪成1.5cm长带一个腋芽的茎段。3.根据权利要求书2所述的芒果茎段无菌系体系建立的方法，其特征在于:在步骤I)中，用流水冲洗莖段1min后，而后用0.01%高猛酸钾溶液浸泡15min，再用流水冲洗30mino4.根据权利要求书2或3所述的芒果茎段无菌系体系建立的方法，其特征在于:在步骤2)中，将经步骤I)处理后的茎段放置在灭菌过的超净工作台上，用75%酒精对茎段灭菌20s，而后用无菌水冲洗3次，再用0.1% HgCljP 3滴吐温-80灭菌13min，最后用无菌水冲洗5次。5.根据权利要求4所述的芒果茎段无菌系体系建立的方法，其特征在于:在步骤3)中，将经步骤2)灭菌后的茎段接种到菌种培养基，该菌种培养基为1/2MS+6-BA 4.0mg/L，pH 为 5.8。6.根据权利要求5所述的芒果茎段无菌系体系建立的方法，其特征在于:在步骤4)中，将步骤3)中的菌种培养基放置在白炽光照环境下培养4天，光照时间为12h。7.根据权利要求6所述的芒果茎段无菌系体系建立的方法，其特征在于:在步骤5)中，将经步骤4)培养得到的茎段重新放置在超净工作台上用0.1% HgCljP 3滴吐温-80灭菌5min，再用无菌水冲洗5次。8.根据权利要求7所述的芒果茎段无菌系体系建立的方法，其特征在于:在步骤6)中，将经步骤5)的茎段接种到传代培养基中培养，以获取再生植株。9.根据权利要求8所述的芒果茎段无菌系体系建立的方法，其特征在于:所述传代培养基为 1/2MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.2mg/L，pH 为 5.8。
【专利摘要】本发明公开了一种芒果茎段无菌系体系建立的方法，涉及植物组织培养领域。所述方法包括以下步骤：1)剪取芒果嫩枝茎段作为外植体预处理；2)灭菌；3)接种；4)白炽光照培养；5)二次灭菌；6)获取再生植株。本发明打破了传统的以体细胞胚发生途径获得芒果再生植株，同时能够传承母株的优良性状，获得大量芒果组培苗，实现了芒果茎段培养诱导无菌芽，达到快速繁殖的作用。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105028199
【申请号】CN201510402213
【发明人】农艳丰, 岑湘涛, 苏仕林
【申请人】百色学院
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年7月10日