一种利用橡胶草叶片再生植株的方法_2

文档序号:9333579阅读:来源:国知局
来限制本发明的范围。
[0033]实施例1
[0034]本实施例涉及一种利用橡胶草叶片再生植物的方法,其具体步骤如下:
[0035]I)取幼嫩的橡胶草叶片,用自来水将表面清洗干净,将清洗干净的叶片转移至超净工作台内并置于无菌的培养瓶中,加入70%酒精进行表面消毒lmin,然后用无菌水洗2-3遍,之后换至一个无菌的培养瓶中,加入15 %的双氧水消毒7min,然后用无菌水冲洗5-6遍,清洗完毕后将叶片置于放有滤纸的平皿里将表面的水吸干,备用;
[0036]2)将叶片切成大约l_2cm2大小的外植体接种到愈伤诱导培养基中(参看图1),培养温度为23±2°C,光照光强为2000-2500Lux,每天光照12小时。所述的愈伤诱导培养基为:MS+2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L IAA,并添加蔗糖 30g/L,琼脂 7g/L,pH 调整至 6.0-7.0,121±2°C,蒸气压力103.4kPa灭菌15分钟。外植体接入愈伤诱导培养基后15天开始启动,第25-30天的时候诱导出的愈伤组织已经在材料与培养基接触的外围长满了厚实的一圈,呈淡黄绿色,结构酥松(参看图2);
[0037]3)将愈伤组织转接到愈伤组织继代培养基上进行继代,继代培养温度为23 ± 2 °C,光照光强为2000-2500Lux,每天光照12小时。所述的愈伤组织继代培养基为:MS+1.5mg/L 6-BA+0.3mg/L IAA,并添加蔗糖 30g/L,琼脂 7g/L,pH 调整至 6.0-7.0,121±2°C,蒸气压力103.4kPa灭菌15分钟。
[0038]4)愈伤组织增殖至所需数量时,将愈伤组织转接至不定芽诱导培养基上进行不定芽诱导,培养温度为23±2°C,光照光强为2500-3000LUX,每天光照16小时。所述的不定芽诱导培养基为:MS+1.0mg/L 6-BA,并添加蔗糖20g/L,琼脂7g/L,pH调整至6.0-7.0,121±2°C,蒸气压力103.4kPa灭菌15分钟。
[0039]5)不定芽长至3-5cm时,一般需要15_20天(参看图3),将不定芽切下并转接至生根培养基中诱导生根,培养温度为23±2°C,光照光强为2500-3000Lux,每天光照16小时。所述的生根培养基为:l/2MS+0.4mg/L IAA,并添加蔗糖15g/L,琼脂7g/L,pH调整至6.0-7.0,121±2°C,蒸气压力 103.4kPa 灭菌 15 分钟。
[0040]6)不定芽转接生根培养基后20-25天,根可长至8-10cm(参看图4),这时将生根后的苗连同培养瓶从培养箱中移至室温炼苗3天,然后将苗从培养基中取出,洗净根部培养基,移栽至穴盘中,基质为泥炭土:蛭石=4:1,穴盘上方用带薄膜的罩子覆盖并保持80%空气湿度和25±2°C的温度条件,两周后去除罩子,逐步进行正常水肥管理。
[0041]根据以上方法,从离体叶片诱导愈伤组织的诱导率为96.3% (成功诱导出愈伤的叶片数占接种叶片总数的比例),不定芽的诱导率为97.2% (能够分化出不定芽的愈伤数占转接愈伤总数的比例),诱导生根的效率超过99% (能够成功诱导出根的不定芽数占转接不定芽总数的比例),可以使植株在短时间内得到大量地增殖。
[0042]实施例2
[0043]本实施例涉及一种利用橡胶草叶片再生植株的方法,其具体步骤如下:
[0044]I)取幼嫩的橡胶草叶片,用自来水将表面清洗干净,将清洗干净的叶片转移至超净工作台内并置于无菌的培养瓶中,加入70%酒精进行表面消毒lmin,然后用无菌水洗2-3遍,之后换至一个无菌的培养瓶中,加入15 %的双氧水消毒7min,然后用无菌水冲洗5-6遍,清洗完毕后将叶片置于放有滤纸的平皿里将表面的水吸干,备用。
[0045]2)将叶片切成大约I?2cm2大小的外植体接种到愈伤诱导培养基中,培养温度为23±2°C,光照光强为2000-2500LUX,每天光照12小时。所述的愈伤诱导培养基为:MS+1.8mg/L 6-BA+0.4mg/L NAA,并添加蔗糖 25g/L,琼脂 6g/L,pH 调整至 6.0-7.0,121±2°C,蒸气压力103.4kPa灭菌15分钟。外植体接入愈伤诱导培养基后15天开始启动,第25-30天的时候诱导出的愈伤组织已经在材料与培养基接触的外围长满了厚实的一圈,呈淡黄绿色,结构酥松。
[0046]3)将愈伤组织转接到愈伤组织继代培养基上进行继代,继代培养温度为23 ± 2 °C,光照光强为2000-2500Lux,每天光照12小时。所述的愈伤组织继代培养基为:MS+1.3mg/L 6-BA+0.lmg/L NAA,并添加蔗糖 25g/L,琼脂 6g/L,pH 调整至 6.0-7.0,121±2°C,蒸气压力103.4kPa灭菌15分钟。
[0047]4)愈伤组织增殖至所需数量时,可将愈伤组织转接至不定芽诱导培养基上进行不定芽诱导,培养温度为23±2°C,光照光强为2500-3000LUX,每天光照16小时。所述的不定芽诱导培养基为:MS+0.8mg/L 6-BA,并添加蔗糖15g/L,琼脂5g/L,pH调整至6.0-7.0,121±2°C,蒸气压力103.4kPa灭菌15分钟。
[0048]5)不定芽长至3_5cm时,一般需要15_20天,将不定芽切下并转接至生根培养基中诱导生根,培养温度为23±2°C,光照光强为2500-3000Lux,每天光照16小时。所述的生根培养基为:l/2MS+0.3mg/L NAA,并添加蔗糖10g/L,琼脂5g/L,pH调整至6.0-7.0,121±2°C,蒸气压力103.4kPa灭菌15分钟。
[0049]6)不定芽转接生根培养基后20-25天,根可长至8-lOcm,这时将生根后的苗连同培养瓶从培养箱中移至室温炼苗3天,然后将苗从培养基中取出,洗净根部培养基,移栽至穴盘中,基质为泥炭土:蛭石=4:1,穴盘上方用带薄膜的罩子覆盖并保持90%的空气湿度和25±2°C的温度条件,两周后去除罩子,逐步进行正常水肥管理。
[0050]根据以上方法,从离体叶片诱导愈伤组织的诱导率为95.8%,不定芽的诱导率为97.6%,诱导生根的效率超过99%,可以使植株在短时间内得到大量地增殖。
[0051]实施例3
[0052]本实施例涉及一种利用橡胶草叶片再生植株的方法,其具体步骤如下:
[0053]I)取幼嫩的橡胶草叶片,用自来水将表面清洗干净,将清洗干净的叶片转移至超净工作台内并置于无菌的培养瓶中,加入70%酒精进行表面消毒lmin,然后用无菌水洗2-3遍,之后换至一个无菌的培养瓶中,加入15 %的双氧水消毒7min,然后用无菌水冲洗5-6遍,清洗完毕后将叶片置于放有滤纸的平皿里将表面的水吸干,备用;
[0054]2)将叶片切成大约l-2cm2大小的外植体接种到愈伤诱导培养基中,培养温度为23±2°C,光照光强为2000-2500LUX,每天光照12小时。所述的愈伤诱导培养基为:MS+2.2mg/L 6-BA+0.6mg/L IAA,并添加蔗糖 35g/L,琼脂 8g/L,pH 调整至 6.0-7.0,121±2°C,蒸气压力103.4kPa灭菌15分钟。外植体接入愈伤诱导培养基后15天开始启动,第25-30天的时候诱导出的愈伤组织已经在材料与培养基接触的外围长满了厚实的一圈,呈淡黄绿色,结构酥松;
[0055]3)将愈伤组织切转接到愈伤组织继代培养基上进行继代,继代培养温度为23 ± 2 °C,光照光强为2000-2500Lux,每天光照12小时。所述的愈伤组织继代培养基为:MS+1.7mg/L 6-BA+0.3mg/L IAA,并添加蔗糖 30g/L,琼脂 7g/L,pH 调整至 6.0-7.0,121±2°C,蒸气压力103.4kPa灭菌15分钟。
[0056]4)愈伤组织增殖至所需数量时,将愈伤组织转接至不定芽诱导培养基上进行不定芽诱导,培养温度为23±2°C,光照光强为2500-3000LUX,
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