每天光照16小时。所述的不定芽诱导培养基为:MS+1.2mg/L 6-BA,并添加蔗糖25g/L，琼脂7g/L，pH调整至6.0-7.0，121±2°C，蒸气压力103.4kPa灭菌15分钟。
[0057]5)不定芽长至3_5cm时，一般需要15_20天，将不定芽切下并转接至生根培养基中诱导生根，培养温度为23±2°C，光照光强为2500-3000Lux，每天光照16小时。所述的生根培养基为:l/2MS+0.5mg/L IAA,并添加蔗糖20g/L，琼脂6g/L，pH调整至6.0-7.0，121±2°C，蒸气压力103.4kPa灭菌15分钟。
[0058]6)不定芽转接生根培养基后20-25天，根可长至8-lOcm，这时将生根后的苗连同培养瓶从培养箱中移至室温炼苗3天，然后将苗从培养基中取出，洗净根部培养基，移栽至穴盘中，基质为泥炭土:蛭石=4:1，穴盘上方用带薄膜的罩子覆盖并保持95%空气湿度和25±2°C的温度条件，两周后去除罩子，逐步进行正常水肥管理。
[0059]根据以上方法，从离体叶片诱导愈伤组织的诱导率为96.3%，不定芽的诱导率为98.2%,诱导生根的效率超过99%，可以使植株在短时间内得到大量地增殖。
[0060]对比例I
[0061]同实施例2相比，其区别在于，所述愈伤诱导培养基为MS+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/LNAA，所得愈伤组织的诱导率仅为27.8%。
[0062]对比例2
[0063]同实施例1相比，其区别在于，所述不定芽诱导培养基为MS+2.0mg/L 6-BA,不定芽的诱导率为63.2%，但不定芽玻璃化严重，不定芽长势不好，诱导生根的频率下降，诱导生根的效率为46.5%。
[0064]对比例3
[0065]同实施例1相比，其区别在于，所述生根培养基为1/2MS+1.0mg/L IAA，诱导生根的效率为100 %，但形成的是畸形根，呈瘤状，非常脆极易折断，且移栽时绝大部分的根在清洗根部培养基的过程中折断，植株玻璃化严重，移栽成活率不足30%。
[0066]由以上对比例可看出，在选择本发明所述培养基的基础上，只有各激素的浓度在本发明所述的范围内才可取得良好的诱导效果，而且本发明所述的方法中不定芽生长健壮，无需继代培养，因此诱导周期较短，效率高。
[0067]虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
【主权项】
1.一种利用橡胶草叶片再生植株的方法，其特征在于，包括如下步骤: .1)将预处理后的橡胶草叶片接种到愈伤诱导培养基中进行培养，至诱导出愈伤组织，所述愈伤诱导培养基的组成包括:MS+1.8?2.2mg/L 6-BA+0.4?0.6mg/L NAA或IAA ； .2)将所述愈伤组织转移到继代培养基中进行培养，得到大量生长状况良好的愈伤组织，所述继代培养基的物质组成包括:MS+1.3?1.7mg/L 6-BA+0.1?0.3mg/L NAA或IAA ； .3)将所述生长状况良好的愈伤组织接种到不定芽培养基上进行培养，至长出不定芽，所述不定芽培养基的物质组成包括:MS+0.8?1.2mg/L 6-BA ； .4)将所述不定芽转接至生根培养基中诱导生根，所述生根培养基的组成包括:1/2MS+0.3 ?0.5mg/L NAA 或 IAA ； . 5)将生根后的苗在室温下炼苗后，移至培养基质中培养，得到橡胶草再生植株。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述愈伤诱导培养中和继代培养中的培养条件为:培养温度为23±2°C，光照强度为2000-2500LUX，每天光照12小时。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述不定芽诱导过程中和生根培养过程中的培养条件为:培养温度为23±2°C，光照强度为2500-3000Lux，每天光照16小时。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，对所述橡胶草的叶片进行预处理的步骤为:取幼嫩的橡胶草叶片，用自来水将表面清洗干净，将所述叶片浸入70%酒精中，表面消毒I?2min，然后用无菌水洗2_3遍，之后浸于15%的双氧水中表面消毒6?8min，最后用无菌水冲洗5-6遍，然后将表面的水吸干。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤5)中，具体操作为:根长至8-lOcm时，将橡胶草幼苗移至室温炼苗3?5天；然后将所述幼苗移栽至泥炭土、蛭石的混合培养基质中，并在80%?95%的空气湿度和25±2°C的环境中对橡胶草培养两周；最后移至正常的光照和温度条件下进行培养。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述愈伤诱导培养基中还包括蔗糖25?35g/L，琼脂6?8g/L ;所述继代培养基中还包括蔗糖25?30g/L，琼脂6?7g/L ;所述不定芽诱导培养基中还包括蔗糖15?25g/L，琼脂5?7g/L ;所述生根培养基中还包括蔗糖10?20g/L，琼脂5?7g/L ;所述培养基的pH均为6.0?7.0。7.根据权利要求1?6任一项所述的利用橡胶草叶片再生植株的方法，其特征在于，包括如下步骤: .1)取幼嫩的橡胶草叶片，用自来水将表面清洗干净，将所述叶片浸入70%酒精中，表面消毒I?2min，然后用无菌水洗2_3遍，之后浸于15%的双氧水中表面消毒6?8min，然后用无菌水冲洗5-6遍，将叶片表面的水吸干，得备用材料； .2)将所述备用材料接种到愈伤诱导培养基中，至诱导出愈伤组织；所述愈伤诱导培养过程中，培养温度为23±2°C，光照强度为2000-2500LUX，每天光照12小时；所述的愈伤诱导培养基为:MS+2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L IAA,并添加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH调整至6.0-7.0 ； .3)将所述愈伤组织转接到愈伤组织继代培养基上进行继代，继代培养温度为23±2°C，光照强度为2000-2500LUX，每天光照12小时；所述的愈伤组织继代培养基为:MS+1.5mg/L 6-BA+0.3mg/LIAA，并添加蔗糖 30g/L，琼脂 7g/L，pH 调整至 6.0-7.0 ； .4)愈伤组织增殖至所需数量时，将愈伤组织转接至不定芽诱导培养基上进行不定芽诱导，培养温度为23±2°C，光照强度为2500-3000LUX，每天光照16小时；所述的不定芽诱导培养基为:MS+1.0mg/L 6-BA,并添加蔗糖20g/L，琼脂7g/L，pH调整至6.0-7.0 ； .5)不定芽长至3-5cm时，将不定芽切下并转接至生根培养基中诱导生根，培养温度为23±2°C，光照光强为2500-3000LUX，每天光照16小时；所述的生根培养基为:1/2MS+0.4mg/L IAA,并添加蔗糖 15g/L，琼脂 7g/L，pH 调整至 6.0-7.0 ； . 6)根长至8-lOcm时，将橡胶草幼苗移至室温炼苗3?5天；然后将所述幼苗移栽至泥炭土、蛭石的体积比为4:1的混合培养基质中，并在80%?95%的空气湿度和25±2°C的环境中对橡胶草培养两周；最后移至正常的光照和温度条件下进行培养。
【专利摘要】本发明涉及一种利用橡胶草叶片再生植株的方法，其步骤为将经过预处理的橡胶草叶片依次进行愈伤组织诱导、愈伤组织继代培养、不定芽诱导和生根培养。利用本发明所述的诱导方法，繁殖系数高，且没有褐化和白化苗发生，再生植株健壮，根系发达，移植成活率高，可在短时间内获得大量的再生植株。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105052740
【申请号】CN201510488896
【发明人】覃碧, 王 锋, 张立群, 刘实忠, 杨玉双, 甘霖, 高玉尧, 徐建欣
【申请人】中国热带农业科学院橡胶研究所, 北京化工大学, 山东玲珑轮胎股份有限公司, 中国热带农业科学院湛江实验站
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2015年8月11日