一种骆驼刺组织培养的快速分化培养基及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物培养技术领域，具体涉及一种骆驼刺组织培养的快速分化培养基 及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 胳盤刺（学名：Alhagi sparsifolia Shap.)属豆科、落叶草本，主要枝上多刺，叶 长圆形，花粉红色，6月开花，8月最盛，每朵花可开放20余天，结荚果，总状花序，根系一般 长达20米。从沙漠和戈壁深处吸取地下水份和营养，是一种自然生长的耐旱植物，因为这 种植物茎上长着刺状的很坚硬的小绿叶，故叫骆驼刺，是草本植物，是戈壁滩和沙漠中骆驼 唯一能吃的赖以生存的草，故又名骆驼草，主要分布在内陆干旱地区。
[0003] 骆驼刺根系十分发达，根系一般长达20米，是地表上茎叶半径的2倍甚至3倍， 这在植物界是极其罕见的。因为其特殊的生理特性，在分化培养基中如果加入常用生长素 吲哚乙酸在低浓度无法快速促进茎叶分化，在培养基的时间过长容易感染细菌导致培养失 败，如果加入常用生长素吲哚乙酸的浓度过高，又抑制了根系的生长发育，导致组织培养的 骆驼刺根系发育不全，因此需要组织培养骆驼刺必须解决其快速分化问题。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是提供一种骆驼刺组织培养的快速分化培养基及其 制备方法。
[0005] 本发明所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现： 一种骆驼刺组织培养的快速分化培养基，所述的分化培养基为1/2MS培养基中加入 如下组份：特制固化剂、红糖、6-苄氨基腺嘌呤、4-氯-IAA、四环素、活性炭、植物提取物、 木瓜汁配制而成，在分化培养基中的浓度分别为：特制固化剂15-18g/L、红糖20-25g/L、 四环素25-45mg/L、6-苄氨基腺嘌呤2. 6-2. 8mg/L、4-氯-IAA 0? 4-0. 5mg/L、植物提取物 60-90mg/L、木瓜汁 60-80g/L、活性炭 3-4g/L。 进一步的，所述的特制固化剂：包括海藻酸钠和紫薯提取物，其制备方法为，将新鲜的 紫薯进行压榨，收集浆汁，然后将浆汁真空干燥获得凝固的块状物，再将块状物粉碎至粒径 150-300目的粉状，即为紫薯提取物；所述的特制固化剂为海藻酸钠与紫薯提取物质量比 2:3〇
[0006] 更进一步的，植物提取物提取于大叶榕气生根，所述的植物提取物的提取方法为 收集大叶榕气生根，放入搅拌机，并按照质量体积比1: lkg/L添入乙酸-乙醇水溶液并进行 组织破碎，然后将破碎液过300目滤布后收集滤液，再将滤液真空干燥后收集获得的粉末 即为所述的植物提取物，其中所述的乙酸-乙醇水溶液为质量浓度为45%的乙醇和质量浓 度为12%的乙酸按照1:2的体积比混合。
[0007] -种骆驼刺组织培养的快速分化培养基的制备方法，具体操作为：向1/2MS培养 基中加入特制固化剂、红糖、6-苄氨基腺嘌呤、4-氯-IAA、四环素、活性炭；在分化培养基 中的浓度分别为特制固化剂15-18g/L、红糖20-25g/L、四环素25-45mg/L、6-苄氨基腺嘌 呤 2. 6-2. 8mg/L、4-氯-IAA 0? 4-0. 5mg/L、活性炭 3-4g/L、植物提取物 60-90mg/L，并将其置 于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌条件为113摄氏度，压力103. 42kPa，时长25-35min，最后再 将木瓜汁加入其中。
[0008] 所述木瓜汁在添加前需要经过68°C、时长30min的加热灭菌，加热后将其温度急 速冷却到1-3°C，保持时长为5-10min，然后即可按照浓度为60-80g/L添入分化培养基中。
[0009] 以上所述的制备过程均在无菌环境中操作。
[0010] 本发明具有如下有益效果： 本发明针对骆驼刺特殊的生长和生理特性，特选海藻酸钠和紫薯提取物制备的固化 剂。
[0011] 本发明进一步在分化培养基中添加四环素，在培养过程中，可进一步对外植体的 内生菌产生明显的抑制作用，可减少组培过程中的污染，而且还起到了促进腋芽萌发，缩短 萌动时间的效果。
[0012] 本发明进一步在分化培养基中添加植物提取物，提取于大叶榕气生根的提取物配 合4-氯-IAA可有效均衡骆驼刺腋芽、根和茎的生长，而且对腋芽萌发和芽体发育有明显的 促进作用。
[0013] 应用本发明的分化培养基进行培养骆驼刺，成活率为98-99%，染菌率为 1. 7-2. 1%，培养基褐化程度较MS培养基低12-16%，萌动时间大约缩短了 20-43%。
【具体实施方式】
[0014] 下面结合具体实施例对本发明进行详细的说明。
[0015] 实施例： 本发明选用的1/2MS培养基成分及其用量(用量是指在1升1/2MS培养基中的用量） 如下表1 :
然后在1/2MS培养基中加入如下组份：特制固化剂、红糖、6-苄氨基腺嘌呤、 4-氯-IAA、四环素、活性炭、植物提取物、木瓜汁配制而成，在分化培养基中的浓度分别为： 特制固化剂15_18g/L、红糖20-25g/L、四环素25-45mg/L、6-苄氨基腺嘌呤2. 6-2. 8mg/L、 4-氯-IAA 0? 4-0. 5mg/L、植物提取物60-90mg/L、木瓜汁60-80g/L、活性炭3-4g/L。各组份 添加浓度优选为特制固化剂16g/L、红糖22g/L、四环素35mg/L、6-苄氨基腺嘌呤2. 7mg/L、 4-氯-IAA 0. 45mg/L、植物提取物75mg/L、木瓜汁70g/L、活性炭4g/L。所述的制备过程均 在无菌环境中操作。
[0016] 所述的特制固化剂：包括海藻酸钠和紫薯提取物，其制备方法为，将新鲜的紫 薯进行压榨，收集浆汁，然后将浆汁真空干燥获得凝固的块状物，再将块状物粉碎至粒径 150-300目的粉状，即为紫薯提取物；所述的特制固化剂为海藻酸钠与紫薯提取物质量比 2:3〇
[0017] 所述的植物提取物提取于大叶榕气生根，所述的植物提取物的提取方法为收集大 叶榕气生根，放入搅拌机，并按照质量体积比1: lkg/L添入乙酸-乙醇水溶液并进行组织破 碎，然后将破碎液过300目滤布后收集滤液，再将滤液真空干燥后收集获得的粉末即为所 述的植物提取物，其中所述的乙酸-乙醇水溶液为质量浓度为45%的乙醇和质量浓度为12% 的乙酸按照1:2的体积比混合。
[0018] 所述木瓜汁在添加前需要经过68°C、时长30min的加热灭菌，加热后将其温度急 速冷却到1-3°C，保持时长为5-10min，然后即可按照浓度为60-80g/L添入分化培养基中。
[0019] 实验例： 按照下表2的实验思路对本发明进行效果验证，均以MS培养基为基础，在其中按照实 施例的数据要求选择性的添入如下表的一种或多种物质，其中各组IAA添加浓度与实施例 要就的4-氯-IAA等同。
[0020] 表 2 :
每组选取五十个外植体进行组培实验统计萌动时间数据，以平均数制备下表3: 表3 :(单位：天）
经观察发现，植物提取物配合4-氯-IAA可以快速诱导分化，也因为时间缩短，被感染 少，成活率高，配合木瓜提取物、四环素等效果更佳。发明人为了确保准确又单独针将IAA 的不同浓度以及植物提取物配合作用下的不同浓度进行了实验，发现萌动时间在15-21之 间波动，和本发明相比较，本发明培养基的萌动时间大约缩短了 20-43%。
[0021] 以上所述实施例仅表达了本发明的实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能 因此而理解为对本发明专利范围的限制，但凡采用等同替换或等效变换的形式所获得的技 术方案，均应落在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种骆驼刺组织培养的快速分化培养基，其特征在于所述的分化培养基为1/2MS 培养基中加入如下组份：特制固化剂、红糖、6-苄氨基腺嘌呤、4-氯-IAA、四环素、活性炭、 植物提取物、木瓜汁配制而成，在分化培养基中的浓度分别为：特制固化剂15-18g/L、红糖 20-25g/L、四环素 25-45mg/L、6-苄氨基腺嘌呤 2. 6-2. 8mg/L、4-氯-IAA 0? 4-0. 5mg/L、植 物提取物60-90mg/L、木瓜汁60-80g/L、活性炭3-4g/L。2. 根据权利要求1所述的一种骆驼刺组织培养的快速分化培养基，其特征在于所述的 特制固化剂：包括海藻酸钠和紫薯提取物，其制备方法为，将新鲜的紫薯进行压榨，收集浆 汁，然后将浆汁真空干燥获得凝固的块状物，再将块状物粉碎至粒径150-300目的粉状，即 为紫薯提取物；所述的特制固化剂为海藻酸钠与紫薯提取物质量比2:3。3. 根据权利要求1所述的一种骆驼刺组织培养的快速分化培养基，其特征在于植物提 取物提取于大叶榕气生根，所述的植物提取物的提取方法为收集大叶榕气生根，放入搅拌 机，并按照质量体积比I: lkg/L添入乙酸-乙醇水溶液并进行组织破碎，然后将破碎液过 300目滤布后收集滤液，再将滤液真空干燥后收集获得的粉末即为所述的植物提取物，其中 所述的乙酸-乙醇水溶液为质量浓度为45%的乙醇和质量浓度为12%的乙酸按照1:2的体 积比混合。4. 如权利要求3所述的一种骆驼刺组织培养的快速分化培养基的制备方法，其特征 在于向1/2MS培养基中加入特制固化剂、红糖、6-苄氨基腺嘌呤、4-氯-IAA、四环素、活性 炭；在分化培养基中的浓度分别为特制固化剂15_18g/L、红糖20-25g/L、四环素25-45mg/ L、6-苄氨基腺嘌呤2. 6-2. 8mg/L、4-氯-IAA 0? 4-0. 5mg/L、活性炭3-4g/L、植物提取物 60-90mg/L，并将其置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌条件为113摄氏度，压力103. 42kPa， 时长25-35min，最后再将木瓜汁加入其中。5. 根据权利要求4所述的一种骆驼刺组织培养的快速分化培养基的制备方法，其特征 在于所述木瓜汁在添加前需要经过68°C、时长30min的加热灭菌，加热后将其温度急速冷 却到1-3°C，保持时长为5-10min，然后即可按照浓度为60-80g/L添入分化培养基中。6. 根据权利要求5所述的一种骆驼刺组织培养的快速分化培养基的制备方法，其特征 在于：所述的制备过程均在无菌环境中操作。
【专利摘要】本发明属于组织培养技术领域，具体涉及一种骆驼刺组织培养的快速分化培养基。所述的分化培养基为1/2MS培养基中加入如下组份：特制固化剂、红糖、6-苄氨基腺嘌呤、4-氯-IAA、四环素、活性炭、植物提取物、木瓜汁配制而成。本发明针对骆驼刺特殊的生长和生理特性，特选海藻酸钠和紫薯提取物制备的固化剂，在培养基中添加四环素，可减少组培过程中的污染，而且还起到了促进腋芽萌发，缩短萌动时间的效果。提取于大叶榕气生根的提取物配合4-氯-IAA可对腋芽萌发和芽体发育有明显的促进作用。本培养基成活率为98-99%，染菌率为1.7-2.1%，褐化程度较MS培养基低12-16%，萌动时间约缩短了20-43%。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105052739
【申请号】CN201510462668
【发明人】徐伟明
【申请人】徐伟明
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2015年8月1日