心。将板在挥发 性杀菌剂处理之前立即接种。将Whatman#l滤片（Cat. No. 1001-0155) -式两份放置在聚乙 烯PCR板密封膜的下侧。为了确定最小抑菌浓度（MIC)，将化合物在丙酮中稀释，并且将适 当量的化合物以剂量依赖的方式添加至所述片以实现最终的顶空浓度为1142. 9至0. 6mg/ L。允许丙酮挥发5分钟。将培菌液周围的顶空然后通过具有含杀菌剂粘附片的膜通过将 板倒放在经处理的片上密封在孔的内部，并且密封以防止任何化学品从片剥落并且落在经 接种的琼脂上。在23°C储存3天之后，将培养物基于测量真菌菌落直径评价相对于对照的 生长百分比。实验结果汇总于表7中。结果表明，苯硼酸半酯化合物具有优异的抵抗五个 经选择的植物真菌病原体的体外活性。
[0269]
[0271] BOTRCI =番前灰霉病菌（Botrytis cinerea)(灰霉病）
[0272] PENIEX =扩展青霉菌（Penicillium expansum)(苹果蓝霉）
[0273] ALTEAL =烟草赤星病菌（Alternaria alternata)(烟草赤星病）
[0274] MONIFC =桃褐腐病菌（Monilinia fructicola)(苹果褐腐病）
[0275] GLOMCI =胶孢炭疽病菌（Glomerella cingulata)(番椒炭疽病）
[0276] 实施例9
[0277] 将12-孔（6. 5每个孔的按mL计的体积）微量滴定板用于挥发性抗微生物化合物 的体外抑制试验。将3-mL体积的全强度的番茄葡萄糖琼脂（PDA)添加至每个孔。冷却之 后，IyL的IX 105每mL番前灰霉病菌（Botrytis cinerea)和扩展青霉菌（Penicillium expansum)孢子悬浮液点滴吸移至琼脂的中心。将板在挥发性杀菌剂处理之前立即接种。 将Whatman#l滤片（Cat. No. 1001-0155) -式两份放置在聚乙烯PCR板密封膜的下侧。为 了确定最小抑菌浓度（MIC)，将化合物在丙酮中稀释，并且将适当量的化合物以剂量依赖的 方式添加至所述片以实现最终的顶空浓度为35.7至0.03mg/L。允许丙酮挥发5分钟。将 培菌液周围的顶空然后通过具有含杀菌剂粘附片的膜通过将板倒放在经处理的片上密封 在孔的内部，并且密封以防止任何化学品从片剥落并且落在经接种的琼脂上。在23°C储存 3天之后，将培养物基于测量真菌菌落直径评价相对于对照的生长百分比。实验结果汇总于 表8中。结果表明，许多苯硼酸半酯化合物具有优异的抵抗两种经选择的植物真菌病原体 的体外活性。
[0278]
[0284] BOTRCI=番前灰霉病菌（Botrytis cinerea)(灰霉病）
[0285] PENIEX=扩展青霉菌（Penicilliumexpansum)(苹果蓝霉）
[0286] 实施例10
[0287] 将12-孔（6. 5每个孔的按mL计的体积）微量滴定板用于挥发性抗微生物化 合物的体外抑制试验A和B(图1)抵抗许多植物真菌病原体。将3-mL体积的全强度 的番茄葡萄糖琼脂（PDA)添加至每个孔。冷却之后，将IuL的IX 105孢子每mL的 番前灰霉病菌（Botrytis cinerea)，扩展青霉菌（Penicillium expansum)，烟草赤星 病菌（Alternaria alternata)，胶抱炭疽病菌（Glomerella cingulata)，指状青霉菌 (Penicillium digitatum)，桃褐腐病菌（Monilinia fruticola)，黑曲霉菌（Aspergillus brasiliensis)，尖抱炭疽菌（Colletotrichum acutatum)，接骨木镜刀菌（Fusarium sambucinum)，辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici)，白地霉菌（Geotrichum candidum)， 黑曲霉菌（Aspergillus niger)，棉色二孢菌（Diplodia gossypina)或柑桔砂皮病菌 (Diaporthe citrii)悬浮液点滴在琼脂的中心上c^_Whatman#l 滤片（Cat. No. 1001-0155) 一式两份放置在聚乙烯PCR板密封膜的下侧。为了确定最小抑菌浓度（MIC)，将试验化合物 在丙酮中稀释，并且将适当量的化合物以剂量依赖的方式添加至所述片以实现最终的顶空 浓度为35.7至0.03mg/匕允许丙酮蒸发五分钟。将培菌液周围的顶空然后通过具有含杀 菌剂粘附片的膜通过将板倒放在经处理的片上密封在孔的内部，并且密封以防止任何化学 品从片剥落并且落在经接种的琼脂上。在23°C储存3天之后，评价培养物相对于对照物的 生长百分比。示于表9中的结果表明苯硼酸半酯化合物A和B通过挥发性活性控制生长许 多真菌植物病原体的能力。
[0288]
[0289]
[0290] 实施例11
[0291] 将12-孔(6. 5每个孔的按mL计的体积）微量滴定板用于挥发性抗微生物化合 物的体外抑制试验A(图1)抵抗许多细菌病原体。将3-mL体积的营养琼脂添加至每个池 和在引入病原体中之前使得干燥。将大肠杆菌（Escherichia coli)，胡萝卜软腐果胶杆菌 (Pectobacterium carotovorum)，柑桔溃疡病菌（Xanthomonas axonopodis)和肠道沙门 氏菌（Salmonella enterica)的细胞悬浮液调节至光学密度为0. 2至0. 35,将其进一步稀 释1/10,并且将15 y L吸移至每个池的中心并且倾斜以均匀分布。将Whatman#l滤纸（CAT 1001-0155)放置在聚乙烯PCR板密封膜的下侧。为了确定最小杀菌浓度（MBC)，将化合物 A在丙酮中稀释，并且将50 y L -式两份，以剂量依赖的方式施用至所述片，以实现最终的 顶空浓度为71.4至0.03mg/L。允许丙酮挥发5分钟。将具有经处理的片的膜然后施用到 接种板上并且密封。将板倒置，并且在23°C接种48小时。在潜伏期之后，将细菌菌落移入 包含tween 80的无菌水（0. 001% )中，并且确定光学密度（0D ;600nm)。结果汇总于表10 中，其中报告控制至少80%的细菌生长所需要的顶空浓度。在该体外测定中，化合物A显示 良好的抵抗许多细菌的抗微生物活性。
[0292]
[0293] 实施例12
[0294] 为了评估挥发性抗微生物化合物A的体内活性，开展挥发性生物测定以评价新鲜 牛肉上的对照的大肠杆菌（Escherichia coli)和肠道沙门氏菌（Salmonella enterica)。 将牛肉洗涤通过在温水中漂洗2分钟以除去任何天然培菌液。将两个条单层放置在无菌 10. 8-杯SnapWare密封容器（型号#109842)中。
[0295]
[0296] 将每个条通过放置20 y L的调节至光学密度为0. 35 (600nm)的大肠杆菌（E. coli) 或肠道沙门氏菌（S. enterica)细胞悬浮液接种在表面上，并且进一步稀释1/10。为了确定 功效，将化合物A粉末以实现最终顶空浓度为100mg/L所需要的配额引入具有升华装置的 容器中（将铜管在0. 5升每分钟（L/分钟）的风机流量加热至200°C )。将容器及其内容物 然后在21°C培育2天。处理之后，将牛肉洗涤，并且将洗涤物收集，连续稀释，覆盖在营养琼 脂上，然后在37°C培育另外24小时。将细菌菌落计数并且表示为菌落形成单位（CFU/mL)， 其中相对于对照物计算log减少。列于表11中的结果显示，在使用牛肉的该体内测定中，化 合物A良好的抵抗大肠杆菌（E.coli)和肠道沙门氏菌（S. enterica)的抗微生物活性。化 合物A表明大肠杆菌（E. coli)的3. 171og减少（>99. 9% )和肠道沙门氏菌（S. enterica) 的2-log减少。
[0297] 实施例13
[0298] 为了评估挥发性抗微生物化合物对于控制观赏花丼上番前灰霉病菌（Botrytis cinerea)的体内活性A，使用白色康乃馨开展挥发性生物测定。
[0301] 将五朵康乃馨放置在SOOmL的包含200mL常用商业花卉保鲜剂的罐中。将五个罐 然后放置在117L Rubbermaid储存箱（Cat#2244)中。将花瓣用5mL 1\105孢子/11^的番 前灰霉病菌（Botrytis cinerea)悬浮液均勾喷雾接种。将管密封。对于处理剂施用，将化 合物A溶解在1，2-丙二醇水溶液（3:1)中，并且将5mL所述溶液使用ES-100-H SmartFog 系统（Reno，NV)通过施用之后立即密封的"侧口挥发到容器中。将花在21°C培育3天。储 存之后，基于花瓣相对于未处理的对照花上在21°C至多8天存在的病害评价花的发病率， 结果汇总于表12中。在lmg/L的化合物A在处理剂除去之后显示O %发病率2天和在8天 之后仅为16%的发病率，并且通常表明在该体内分析时观赏花卉中良好的抵抗番茄灰霉病 菌（Botrytis cinerea)感染的挥发性抗微生物活性。
[0302] 实施例14
[0303] 与上述试验类似的试验也在具有天然培菌液的白色康乃馨（用商业抗乙烯化合 物硫代硫酸银；STS处理或不用商业抗乙烯化合物硫代硫酸银；STS处理）上进行。将化合 物A溶解在1，2-丙二醇水溶液（3:1)中并且将5mL所述溶液使用ES-100-H SmartFog系 统（Reno, NV)通过施用之后立即密封的"侧口挥发，或将化合物A溶解在丙酮中并且施用 至42. 5毫米（mm) Whatman#l滤片（Cat. No. 1001-042)，并且在使得丙酮挥发5分钟之后将 其放置在表面玻璃上。将花培育3天在21°C。储存之后，基于花瓣和萼片上存在的病害数 量评价花的另外8天的病害严重程度。列于表13中的结果显示在该体内分析中的良好的 抵抗番前灰霉病菌（Botrytis cinerea)的抗微生物活性。
[0306] 实施例15
[0307] 与上述试验类似的试验也在具有天然培菌液的白玫瑰上进行。将五朵白玫瑰放置 在800mL的包含200mL常用的商业花卉保鲜剂的罐中。
[0308]
[0309] 将三个罐然后放置在117L Rubbermaid储存箱（Cat#2244)中。将两个小的风机 放置在容器的相对两端中以协助挥发性分布化合物A。将管密封，然后将化合物A在丙酮中 稀释，然后吸移至1.5英寸Xl英寸棉条上。使得丙酮挥发五分钟。将化合物A然后通过 升华装置（将铜管在风机流量为〇. 5L/分钟加热至200°C )引入至容器通过立即密封之后 施用的1/2"侧口以实现最终顶空浓度为0. 04,0. 2, lmg/L。可选择地，将化合物A吸移至由 表面玻璃支持的42. 5mm Whatman#l滤片（Cat. No. 1001-042)上，其中在密封容器之前使得 丙酮蒸发五分钟。将花在21°C培育三天。处理之后，评价另外两天花的发病率和花瓣的严 重程度。施加在lmg/L通过升华的处理导致0%的发病率。用化合物A处理之后的玫瑰花 瓣没有发病率，保留白颜色，并且玫瑰没有花瓣落下。列于表14中的结果显示白玫瑰良好 的抵抗番前灰霉病菌（Botrytis cinerea)感染的抗微生物活性，并且提高通过升华挥发的 速率导致更明显的病害防治。
[0310] 实施例16
[0311] 为了试验化合物A(图1)在蔬菜上的效果，番茄、洋葱和笋瓜得自本地商店，并且 表面用0.825%的次氯酸钠（NaOCl)消毒。将一片番茄或两叶洋葱放置在无菌Petri板中， 同时整个笋瓜放置在无菌10. 8-杯SnapWare密封容器（型号#109842)中。将每片番茄用 2〇111^的1\105孢子/1]1]^接骨木镰刀菌（?11831'；[111]1831]11311〇；[11111]1)悬浮液接种，同时洋葱用 20 y L的IX 106孢子/mL番前灰霉病菌（Botrytis cinerea)悬浮液接种。对于接种舆瓜， 将小核除去，将辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici)的菌丝插头插入并且在核心封端。将 化合物A在丙酮中稀释，并且以实现最终的顶空浓度为10mg/L的配额添加至连接至盖内侧 的42. 5mm Whatman#l滤片（Cat. No. 1001-042)。在石錯膜（parafilm)密封所述板或关闭 密封容器之前使得丙酮蒸发5分钟。将蔬菜在21°C培育3天，并且评价菌丝体生长，干腐， 和水浸泡的外观（以_计的直径），结果汇总于表13中。在该体内测定时，化合物A表明 使用3种不同的蔬菜作物对3种植物病原体良好的真菌防治。
[0312]
[0313] 实施例17
[0314] 为了试验化合物A在控制蔬菜的细菌病原体的效果，将番茄，洋葱和胡萝卜切 成小方块，表面用0.825% NaOCl消毒，并且使得干燥。将每种蔬菜的四个小方块（约1 平方厘米（cm2)放置在无菌Petri板中。将每个方块用25 yL的胡萝卜软腐果胶杆菌 (Pectobacterium carotovorum)(细菌浓度为OD 1.0,600nm)接种。为了确定功效，将化合 物A在丙酮中稀释，并且将为实现最终顶空浓度为50mg/L的适当体积添加至与盖的内侧连 接的42. 5mm Whatman#l滤片（Cat. No. 1001-042)。在关闭所述板并且将其用石蜡膜密封之 前允许丙酮蒸发五分钟。将蔬菜在IOC培育四天。列于表16中的结果表明在该体内分析 时抵抗洋葱（2. 141og减少），胡萝卜（0? 291og减少）和番茄（0? 841og减少）上的胡萝卜 软腐果胶杆菌（P. carotovorum)的抗微生物活性。
[0315]
[0316] 实施例18
[0317] 为了评估挥发性抗微生物化合物在水果中的体内活性A，使用草莓，葡萄和越橘开 展挥发性生物测定。将八个草莓，16串葡萄或30个越橘（一式两份）放置在商业相关的涂 胶的PET抓斗，其中茎端朝向为越橘和葡萄，和向下为草莓。将新鲜伤口用20 y L (草莓和葡 萄）或10 y L (越橘）的I X 106每mL番前灰霉病菌（Botrytis cinerea)孢子悬浮液接种。 将抓斗放置在10. 8-杯SnapWare密封容器（型号#109842)内部。将42. 5_ Whatman#l 滤片（Cat. No. 1001-042)放置在表面玻璃上。将化合物A溶解在丙酮中并且以剂量依赖的 方式添加至所述片以得到最终顶空浓度为0.4, 2或10mg/L。允许丙酮蒸发五分钟。将容器 然后用盖封闭并且在21°C放置三天。储存之后，评价水果在21°C另外三天的发病率和严重 程度（0至4)，结果汇总于表17中。结果表明良好的对番前灰霉病菌（Botrytis cinerea) 的体内挥发性抗微生物控制，其中在三天储存期之后对于草莓，葡萄和越橘的约50%的较 低发病率和显著降低的严重程度。
[0318]
[0319] *严重程度
[0320] 0 =没有真菌生长
[0321] I=轻微感染（显微镜下仅为可见的内部伤口）
[0322] 2 =中度感染（接种点上的可见到的生长）
[0323] 3 =高度感染（>lcm直径的葡萄孢属的视锥细胞）
[0324] 4 =极度感染（> 半长的水果）
[0325] 实施例19
[0326] 为了评估挥发性抗微生物化合物在水果中的体内活性A，使用柑橘类水果开展挥 发性生物测定。将两个橙放置在PET抓斗内部。三个新鲜伤口每个橙用30yL的1X106 每mL指状青霉菌（Penicillium digitatum)孢子悬浮液接种。将抓斗放置在10. 8-杯 SnapWare 密封容器（型号 #109842)内部。将 42. 5mm Whatman#l 滤片（Cat. No. 1001-042) 放置在表面玻璃上。将化合物A溶解在丙酮中并且以剂量依赖的方式添加至所述片以制得 最终顶空浓度为2,10或50mg/L。允许丙酮蒸发五分钟。将容器然后用盖封闭并且在21°C 放置三天。储存之后，评价水果在21°C另外两天在所述水果表面上的发病率（腐坏的按mm 计的直径）和病原菌产孢量（按mm计的直径），结果汇总于表18中。结果表明，特别在大 于10mg/L配额的良好的对在接种的橙内指状青霉菌（P. digitatum)的体内挥发性抗微生 物控制。
[0327]
[0328] 实施例20
[0329] 为了评估挥发性抗微生物化合物在水果中的体内活性A，使用苹果开展挥发性生 物测定。将两只苹果放置在PET抓斗内部。将三个新鲜伤口每个苹果用30yL的IX 106每 mL扩展青霉菌（Penicillium expansum)孢子悬浮液接种。将抓斗放置在10. 8-杯SnapWare 密封容器（型号#109842)内部。将42. 5mm Whatman#l滤片（Cat. No. 1001-042)放置在表 面玻璃上。将化合物A溶解在丙酮中并且以制得最终顶空浓度为50mg/L的方式添加至所 述片。允许丙酮蒸发五分钟。将容器然后用盖封闭，并且在21°C放置三天。储存之后，评价 水果在21°C另外三天在所述水果表面上的发病率（腐坏的按mm计的直径）和病原菌产孢 量（按_计的直径），结果汇总于表19中。结果表明，在处理之后至多3天，苹果100%的 对指状青霉菌（P. digitatum)霉菌的体内挥发性抗微生物控制。
[0330]
[0331] 实施例21
[0332] 为了评估挥发性抗微生物化合物的体内活性B在水果中，使用橙开展挥发性生物 测定。将两个橙一式两份放置在抓斗内部。将三个新鲜伤口每个橙用30 y L的I X 106每mL 指状青霉菌（Penicillium digitatum)孢子悬浮液接种。将抓斗放置在10. 8-杯SnapWare 密封容器（型号#109842)内部。将化合物B粉末通过升华装置（将铜管在风机流量为0. 5L/ 分钟加热至200°C )引入至容器以实现最终顶空浓度为0. 4, 2,10或50mg/L。将容器然后 用盖封闭并且在21 °C放置三天。储存之后，评价水果在21 °C另外三天在所述水果表面上的 发病率（腐坏的按_计的直径）和病原菌产孢量（按_计的直径），结果汇总于表20中。 结果表明在配额为0. 4mg/L良好的橙内指状青霉菌（P. digitatum)的体内挥发性抑制和在 10mg/L的完全抑制。
[0333]
[0334] 实施例22
[0335] 为了评估水果中的挥发性抗微生物化合物的体内活性A(图1)，使用苹果，梨，橙， 草莓，葡萄和越橘开展挥发性生物测定。将两只苹果，2个橙，2个梨，8个草莓，16串葡萄或 30个越橘（每复制份，一式两份）放置在抓斗中，其中茎端朝向全部水果，不同之处在于草 莓（莖端朝下）。将新鲜伤口用20 y L IX 106每mL扩展青霉菌（Penicillium expansum) 孢子悬浮液（苹果和梨），20ii L IX 106每mL指状青霉菌（Penicillium digitatum)孢 子悬浮液（橙），和20 y L(草莓和葡萄）或IOy L(越橘）的1X106每mL番茄灰霉病菌 (Botrytis cinerea)孢子悬浮液接种。将抓斗放置在117L用盖封闭的Rubbermaid储存箱 (Cat#2244)的内部。将溶解在丙酮中的化合物A吸移至棉条上，其中使得丙酮蒸发五分钟， 然后通过升华装置（将铜管在风机流量为0. 5L/分钟加热至200°C )引入容器中以实现最 终顶空浓度为l〇mg/L。将容器然后在21°C保持三天。处理之后，将水果在21°C保持另外三 天，然后评价对于苹果，梨和橙的发病率（褐变或水浸泡病害的按mm计的直径）和病原菌 产孢量（按mm计的直径），以及对于草莓，葡萄和越橘的番前灰霉病菌（Botrytis cinerea) 发病率（％)和严重程度（0至4)，结果汇总于表21中。结果表明当作为挥发性杀菌剂施 用时良好的对至少六个不同宿主上至少三个真菌病原体的体内抗微生物控制。
[0336]
[0337] 实施例23
[0338] 为了比较化合物A当通过不同机制主动挥发时的能力，进行使用草莓的体内测 定。将八个草莓放置在抓斗中，其中茎端朝下。将新鲜伤口用20yL的IX 105每mL番茄 灰霉病菌（Botrytis cinerea)孢子悬浮液接种。将抓斗放置在10. 8-杯SnapWare密封容 器（型号#109842)中并且用盖封闭。将化合物溶解在丙酮中并且通过ES-IOO-H SmartFog 系统（Reno，NV)借助于可密封的1/2英寸侧口挥发。可选择地，将溶解在丙酮中的化合物A 吸移至棉条上，其中使得丙酮蒸发五分钟，然后通过升华装置（将铜管在风机流量为〇. 5L/ 分钟加热至200°C)引入容器中以实现最终顶空浓度为10mg/L。将所述水果在21°C储存三 天。处理三天之后，将水果在21°C储存另外三天，然后评价病害的发病率（％)和严重程度 (0至4)。结果汇总于表22中并且表明在该体内分析中良好的抵抗番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea)的抗微生物活性，表明化合物A为有效的挥发性抗微生物剂。
[0339]
[0340] 实施例24
[0341] 使用体内试验以评价化合物A可从不同材料和对照真菌病原体挥发的能力。将八 个草莓放置在抓斗中，其中茎端朝下。将新鲜伤口用20yL的1X106每mL番茄灰霉病菌 (Botrytis cinerea)孢子悬浮液接种。将抓斗然后放置在10. 8-杯SnapWare密封容器（型 号#109842)中。将化合物A溶解在丙酮中，然后在配额为200毫克每平方米（mg/m 2)均匀 喷雾至纤维素纸和Tyvek? fabric上。使得丙酮蒸发。同样将化合物A溶解在丙二醇中 并且均匀喷雾至纤维素纸和Tyvek_ fabric上。在这种情况下未曾蒸发。
[0344] 将材料件切割成适当尺寸以供给最终顶空浓度为0. 4, 2或10mg/L。将容器封闭， 并且在21°C放置三天。处理之后，将水果在21°C储存另外两天，然后评价病害的发病率 (%)和严重程度（0至4)，结果汇总于表23中。结果表明化合物A良好的抵抗番茄灰霉病 菌（Botrytis cinerea)的体内抗微生物活性，其中在以剂量依赖方式的全部配额时的发病 率和严重程度减少，并且挥发性化合物可从不同物质释放。
[0345] 实施例25
[0346] 使用体内试验以评价化合物A至可从不同物质和对照真菌病原体挥发的能力。将 八个草莓放置在抓斗中，其中茎端朝下。将新鲜伤口用20 y L的IX 106每mL番茄灰霉病 菌（Botrytis cinerea)孢子悬浮液接种。将抓斗然后放置在10. 8-杯SnapWare密封容器 (型号#109842)中。作为化合物A的基材，使用放置在表面玻璃上的42. 5mm Whatman#l滤 片（Cat. No. 1001-042)或典型地用于包装草莓的10平方厘米（cm2)纸板件。将化合物溶 解在丙酮中并且在以实现最终的顶空浓度为〇. 4, 2或10mg/L的配额吸移在所述片上或涂 在纸板上。允许丙酮蒸发五分钟。将容器封闭，并且在21°C放置三天。处理之后，将水果在 21°C储存