一种免疫细胞冻存液的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种免疫细胞冻存液，包括以下组分：重组人白介素?2 25?100 U/mL、α?1,4?葡聚糖0.5?2.5 mg/mL、海藻糖0.05?0.2 mg/mL、聚乙二醇0.1?0.5 mL/mL、丙二醇0.05?0.15 mL/mL和基础培养基0.7?0.9 mL/mL。本发明的有益效果为：本发明的免疫细胞冻存液安全性高，对细胞的损伤小，能够保证细胞复苏后正常的生物学功能。
【专利说明】
一种免疫细胞冻存液
技术领域
[0001 ]本发明属于细胞培养技术领域，特别是涉及一种免疫细胞冻存液。【背景技术】
[0002]免疫细胞疗法是一种自身免疫抗癌的新型治疗方法，它是运用生物技术和生物制剂对从病人体内采集的免疫细胞进行体外培养和扩增后输回到病人体内的方法，以激发、 增强机体白身免疫功能，从而达到治疗肿瘤的目的。细胞冻存是长期保存细胞的主要方法之一，然而细胞冻存过程会改变细胞的热力学、化学和物理环境，会对细胞造成一定程度的生物性损伤。为了将细胞冻存、复苏过程中细胞的损伤降至最低，不但需要优化化学和温度操作过程，而且需要在冻存前加入一种或一种以上的冻存保护剂，在溶解后又将其去除。
[0003]目前最常用的冻存保护剂为二甲基亚砜(DMS0)，这种物质分子量小，溶解度大，易穿透细胞，可使冰点下降，减少胞内形成冰晶的机会，从而减少冰晶对细胞的损伤。由于高浓度DMS0对细胞由毒性，还必须添加其他的液体成分，如血清、细胞培养基，以降低DMS0的浓度，减少对细胞的伤害。现有细胞冻存液多采用10%的DMS0与90%的胎牛血清，但由于DMS0 含量仍较高，具有相当的毒性，对病人身体不利，并且胎牛血清中含有大量的异种蛋白，既有传染病的危险，又很容易引起过敏反应或者免疫排斥。而且此种冻存液冻存的细胞存活率以及细胞活性较低。
【发明内容】
[0004]本发明的目的就在于克服上述不足，提供一种免疫细胞冻存液。
[0005]为达到上述目的，本发明是按照以下技术方案实施的:一种免疫细胞冻存液，包括以下组分:重组人白介素-2、a-l，4_葡聚糖、海藻糖、聚乙二醇、丙二醇和基础培养基。
[0006]进一步的，包括以下组分:重组人白介素-2 25-100 U/mL、a-l，4-葡聚糖0.5-2.5 mg/mL、海藻糖0.05-0.2 mg/mL、聚乙二醇0.1-0.5 mL/mL、丙二醇0.05-0.15 mL/mL和基础培养基〇.7-〇.9 11117111匕[〇〇〇7] 进一步的，包括以下组分:重组人白介素_2 50 U/mL、a-l，4-葡聚糖1.5 mg/mL、海藻糖0.1 mg/mL、聚乙二醇0.25 mL/mL、丙二醇0.05 mL/mL和基础培养基0.85 mL/mL。
[0008]进一步的，所述基础培养基为RPM1-1640或GT-T551或GT-T561培养基。
[0009]与现有技术相比，本发明的有益效果为:1.本发明通过添加适量的海藻糖、聚乙二醇和丙二醇可以替代二甲基亚砜，保证细胞在接近冰点时胞内的水分不会结晶，能有效的保护细胞，并有效降低细胞毒性；2.本发明添加a-l，4_葡聚糖能够有效的降低冻存、复苏中细胞的损伤，并能够保证复苏后细胞增殖的活力；3.本发明添加重组人白介素_2能够有效维持细胞的活性，保证细胞复苏后正常的生物学功能。
[0010]本发明的免疫细胞冻存液安全性高，对细胞的损伤小，能够保证细胞复苏后正常的生物学功能。【具体实施方式】
[0011]下面结合具体实施例对本发明作进一步描述，在此发明的示意性实施例以及说明用来解释本发明，但并不作为对本发明的限定。[〇〇12]实施例1一种免疫细胞冻存液，包括以下组分:重组人白介素-2 50 U/mL、a-l，4-葡聚糖1.5 mg/mL、海藻糖0.1 mg/mL、聚乙二醇0.25 mL/mL、丙二醇0.05 mL/mL和RPM1-1640培养基 0.85 mL/mL〇
[0013]实施例2一种免疫细胞冻存液，包括以下组分:重组人白介素-2 25 U/mL、a-l，4-葡聚糖1.0 mg/mL、海藻糖0.05 mg/mL、聚乙二醇0.3 mL/mL、丙二醇0.1 mL/mL和GT-T551 培养基0.9 mL/mL〇[〇〇14]实施例3一种免疫细胞冻存液，包括以下组分:重组人白介素-2 100 U/mL、a-l，4-葡聚糖2.0 mg/mL、海藻糖0.15 mg/mL、聚乙二醇0.25 mL/mL、丙二醇0.15 mL/mL和GT-T561 培养基0.9 mL/mL〇
[0015]本发明的技术方案不限于上述具体实施例的限制，凡是根据本发明的技术方案做出的技术变形，均落入本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种免疫细胞冻存液，其特征在于，包括以下组分:重组人白介素-2、a-l，4-葡聚糖、海藻糖、聚乙二醇、丙二醇和基础培养基。2.根据权利要求1所述的一种免疫细胞冻存液，其特征在于，包括以下组分:重组人白 介素-2 25-100 U/mL、a-l,4-葡聚糖0.5-2.5 mg/mL、海藻糖0.05-0.2 mg/mL、聚乙二醇 0.1-0.5 111171111、丙二醇0.05-0.15 111171111和基础培养基0.7-0.9 11117111匕3.根据权利要求1所述的一种免疫细胞冻存液，其特征在于，包括以下组分:重组人白 介素-2 50 U/mL、a-l，4_葡聚糖1.5 mg/mL、海藻糖0.1 mg/mL、聚乙二醇0.25 mL/mL、丙二 醇0.05 mL/mL和基础培养基0.85 mL/mL。4.根据权利要求1所述的一种免疫细胞冻存液，其特征在于，所述基础培养基为RPM1-1640或 GT-T551 或 GT-T561 培养基。
【文档编号】A01N1/02GK105994253SQ201610553886
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年7月15日
【发明人】陈祥, 阮雯莉
【申请人】广州姿生生物科技有限公司