专利名称：Sod乳酸菌生产技术的制作方法
技术领域：
本发明涉及微生物工程、生化工程、酶工程等领域，是一种快速、低成本、安全性高，利用纯种乳酸菌发酵生产SOD的新技术。
超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,EC1.15.1.1，简称SOD)，是生物防御氧化损伤的一种十分重要的酸性蛋白酶。SOD的主要功能是清除生物体内有氧代谢产生的超氧自由基(O-2)，而超氧自由基O被认为对各种生物大分子及组织、细胞有严重的损伤作用。是促使疾病的发生和加重(炎症，衰老，癌变)的重要原因之一。近年来SOD的药理作用及生物学功能越来越被人们所认知，首先在抗炎、抗衰老、抗病变、抗辐射等方面的作用得到肯定，其次在治疗自身免疫力下降，内化疗引起的骨髓损伤和白血球减少，贝切物氏病、新生儿呼吸困难综合症、水肿、肺气肿、老年白内障等疾病方面有显著疗效。因此，SOD的制备方法，纯化及保存活性备受关注。目前SOD的提取方法主要有两条途径，一是从动物血液中提取(主要为牛血)，二是从植物组织中提取(主要为玉米)。这两种提取SOD的方法存在工艺繁琐，有时不可避免地带进污染，使用安全性差，SOD活性丧失快等问题。
本发明提供的SOD乳酸菌生产技术，克服了以往从动物细胞和植物组织中提取SOD的繁琐工艺、污染机会多、SOD活性丧失快等不足。而且其最突出优点是以乳酸菌发酵法生产SOD，原料来源广泛，生产成本低，周期短，SOD活性高(120U/ml)，并且SOD活性在2个月内不丧失。再者乳酸菌本身是生物体内有益微生物菌群的重要菌株之一，用纯种乳酸菌接种发酵生产的SOD不会被污染，不用分离菌体即可食用SOD，因此用乳酸菌生产食用型的SOD潜力巨大，开发前景好。
乳酸菌SOD生产技术1．菌种活化培养基(g/L)，葡萄糖酵母膏蛋白胨KH2PO4=(5-10):(0.5-3):(1-5):(0.3-1.2)，琼脂2g/L,121℃,15’(不加琼脂即为液种子培养基)。
2．发酵培养基(g/L)，玉米粉KH2PO4:K2HPO4=(20-50):(0.5-3):(0.2-0.6),121℃,15′3．液体种子，将活化菌种接种于液体种子培养基中，28℃培养2天。
4．液体发酵，将液体种子以3～5％的接种量，接入发酵培养基中，28～30℃培养3天。
利用乳酸菌制备SOD技术，具有以下几个突出的特点1．利用纯种可直接食用的乳酸菌发酵法生产的SOD，具有从植物组织或动物组织中提取的SOD的特性，类型为Cu/Zn-SOD。
2．该技术生产SOD的周期短，原料来源广泛，成本低，没有副产物，全部为可食用的产品。
3．该技术生产的SOD，未经任何修饰，保存2个月酶活不丧失。
4．该技术生产的SOD为纯种封闭的乳酸菌发酵，不带任何污染源，不但可以提供大量的SOD，而且也可以提供大量的乳酸菌，有效活菌体(活菌体≥1.0×108个/ml)。这样即有利于清除生物体内的超氧阴离子(O)，同时对维持人体内的微生态环境起到非常重要的作用。
例1于250ml三角瓶中装入100ml液体种子培养基，接入3针活化的乳酸菌种，28℃培养2天，即为一级液体种子；根据液体种子的需要量，可以继续扩大培养，将液体种子按3％的接种量接入发酵罐中，28℃培养3天，即为SOD和乳酸菌混合液，此时作为食用型的SOD可以罐装。
例2接活化的菌种1针于10ml液体种子培养基中，进行逐级放大培养，制成供发酵生产SOD的液体种子，将液体种子按5％的接种量接入不同体积发酵罐中，30℃恒温培养2天，即为可直接食用的SOD和乳酸菌活菌体的悬浊液。
权利要求
1．SOD乳酸菌生产技术(1)．菌种活化培养基(g/L)，葡萄糖酵母膏蛋白胨KH2PO4=(5-10):(0.5-3):(1-5):(0.3-1.2)，琼脂2g/L,121℃,15’(不加琼脂即为液种子培养基)。(2)．发酵培养基(g/L)，玉米粉KH2PO4:K2HPO4=(20-50):(0.5-3):(0.2-0.6),121℃,15′。(3)液体种子，将活化菌种接种子液体种子培养基中，28℃培养2天。(4)液体发酵，将液体种子以3～5％的接种量，接入发酵培养基中，28～30℃培养3天。
全文摘要
本发明提供的SOD乳酸菌生产技术,克服了以往从动物细胞和植物组织中提取SOD的繁琐工艺、污染机会多、SOD活性丧失快等不足。而且其最突出优点是以乳酸菌发酵法生产SOD,原料来源广泛,生产成本低,周期短,SOD活性高(120U/ml),并且SOD活性在2个月内不丧失。再者乳酸菌本身是生物体内有益微生物菌群的重要菌株之一,用纯种乳酸菌接种发酵生产的SOD不会被污染,不用分离菌体即可食用SOD,因此用乳酸菌生产食用型的SOD潜力巨大,开发前景好。
文档编号C12N1/20GK1306088SQ0110622
公开日2001年8月1日 申请日期2001年2月27日 优先权日2001年2月27日
发明者刘长江, 迟乃玉, 张庆芳 申请人:沈阳农业大学