专利名称：可高产α－半乳糖苷酶的扬奇青霉菌株及在固态发酵制备饲用α－半乳糖苷酶中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，特别涉及一种可高产α-半乳糖苷酶的扬奇青霉菌株及在固态发酵制备饲用α-半乳糖苷酶中的应用。
背景技术：
提高畜禽对饲料的利用效率一直是动物营养学非常关注的研究领域，尤其在当前饲料原料比较紧缺的情况下如何提高饲料的利用价值更值得重视。阻碍畜禽对饲料充分利用的一个重要因素是饲料原料中含有多种多样的抗营养因子。这些抗营养因子通过干扰畜禽的正常消化和代谢功能而影响动物生产潜能的充分发挥，降低饲料的利用效率。在豆类籽实和饼粕饲料中含有较高的α-半乳糖苷，研究表明α-半乳糖苷是一种抗营养因子，其抗营养作用主要是影响动物对能量的利用；而α半乳糖苷酶水解棉籽糖和水苏糖中α-半乳糖苷的连接键的活性很高。虽然α-半乳糖苷酶分布比较广，微生物、动物和植物都能产生α-半乳糖苷酶，但是由于生产工艺复杂，产量少，价格比较昂贵。
发明内容
本发明目的在于提供一种可高产α-半乳糖苷酶的扬奇青霉菌株；本发明另一目的是该可高产α-半乳糖苷酶的扬奇青霉菌株在固态发酵制备饲用α-半乳糖苷酶中的应用。
本发明的实施方案如下本发明提供的可高产α-半乳糖苷酶的扬奇青霉菌株，其特征在于，为一种高产α-半乳糖苷酶的青霉菌，孢子呈灰绿色，于2001年12月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会，其保藏号为CGMCC No.0668；本发明提供的可高产α-半乳糖苷酶的扬奇青霉菌株的生物学特性为菌落在麦芽汁平板上生长适度，25℃，7天，直径18-22mm，有辐射状皱纹；质地绒状；边缘白色，中部灰绿色，反面橙黄色；分生孢子梗发生于气生菌丝，50-200×2.0-2.5微米，壁平滑；帚状枝不规则，叉开，单轮生或双轮生，双轮生者，每轮埂基2-4个，在顶端埂基下间生分枝；埂基8-12×2.5-3.0微米，顶端稍膨大；瓶埂安瓿型，每轮(2-)4-6(8)个，5.5-9(12)×2.5-3.0微米；分生孢子球形，2.0-3.0微米，粗糙，分生孢子链短。
本发明提供的可高产α-半乳糖苷酶的扬奇青霉菌株在固态发酵制备饲用α-半乳糖苷酶中的应用。
本发明提供的扬奇青霉菌株可高产α-半乳糖苷酶，可被用来固态发酵制备饲用α-半乳糖苷酶，饲用α-半乳糖苷酶的生产成本低；而且该饲用α-半乳糖苷酶添加至饲料中，可提高畜禽的生产性能。
本发明的可高产α-半乳糖苷酶的扬奇青霉菌株的诱变选育过程为1.出发菌种的筛选本申请人选取吉林省长白山林区安图县土壤2g与10ml无菌水混合，摇匀后，静置5分钟，吸取上层液，逐步稀释101、102、103、104和105倍，接种于X-α-Gal初筛培养基上，每个稀释度3个平板，28℃下培养72小时后；按菌落蓝色的深浅，进行选种；在稀释度为105倍的平板上，获得目的菌株；将该目的菌株接种于斜面保藏培养基，生长出孢子后进行菌种复筛，获得一株出发霉菌；该出发霉菌在下述固态培养基中可产酶活28U/g干基；再将此菌进行多次γ射线辐照或亚硝基胍诱变获得一株可高产α-半乳糖苷酶(酶活为86U/g干基)的菌株；所述斜面保藏培养基葡萄糖40克，蛋白胨10克，琼脂15克，蒸馏水1000ml，pH值5.6，8磅灭菌20min。
所述固态培养基麸皮10g，加入0.2M乙酸钠-乙酸缓冲液(pH5.0)，使含水量达到55％。
所获得的可高产α-半乳糖苷酶(酶活为86U/g干基)的菌株鉴定结果如下该菌株为一种高产α-半乳糖苷酶的青霉菌，孢子呈灰绿色，于2001年12月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会，其保藏号为CGMCC No.0668；该可高产α-半乳糖苷酶的扬奇青霉菌株的生物学特性为菌落在麦芽汁平板上生长适度，25℃，7天，直径18-22mm，有辐射状皱纹；质地绒状；边缘白色，中部灰绿色，反面橙黄色；分生孢子梗发生于气生菌丝，50-200×2.0-2.5微米，壁平滑；帚状枝不规则，叉开，单轮生或双轮生，双轮生者，每轮埂基2-4个，在顶端埂基下间生分枝；埂基8-12×2.5-3.0微米，顶端稍膨大；瓶埂安瓿型，每轮(2-)4-6(8)个，5.5-9(12)×2.5-3.0微米；分生孢子球形，2.0-3.0微米，粗糙，分生孢子链短。
本发明的可高产α-半乳糖苷酶的扬奇青霉菌株可应用于固态发酵制备饲用α-半乳糖苷酶。
利用本发明提供的可高产α-半乳糖苷酶的扬奇青霉菌株固态发酵生产α-半乳糖苷酶步骤如下
1.将1.5公斤麸皮与营养液以1∶1.5-2的比例混合，灭菌后，制成固态培养基，放入无菌方盘(45cm×55cm×5cm)内；所述营养液为一种含(NH4)2SO4的的营养液，其浓度为每100ml营养液中含有0.3克的(NH4)2SO4；其pH控制在5.0-8.0范围内，pH为6.0时效果更佳；2.将本发明的扬奇青霉接种于斜面保藏培养基，于28℃恒温箱中，培养7天，长出孢子；所述斜面保藏培养基葡萄糖40克，蛋白胨10克，琼脂15克，蒸馏水1000ml，pH值5.6，8磅灭菌20min；3.将长出的扬奇青霉孢子接种于上述固态培养基进行发酵，接种量应控制在5.0×106-7.5×106个孢子；发酵温度控制在28-30℃；水分控制在60-65％之间；发酵72小时，取样烘干、粉碎得干曲；采用对硝基本酚法测定所得干曲(饲用α-半乳糖苷酶)的酶活方法如下测定原理硝基酚比色法利用对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖或邻硝基酚-α-D-吡喃半乳糖与α-半乳糖苷酶反应后，生成有色物质—对硝基酚或邻硝基酚，通过测定有色物质的量计算酶活；酶活定义在pH5.0、37℃条件下，每分钟从对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖溶液中降解释放1μmol对硝基酚所需的酶量为一个酶活单位，简称为u；仪器设备752C紫外可见分光光度计，酸度计，秒表，水浴锅，天平(感量0.001g)，磁力搅拌器，漏斗，Whatman No.1滤纸。试剂对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖(批号90K1646)和对硝基酚(p-NPG)(批号19H5077)购于Sigma公司，无水醋酸钠、冰醋酸和无水碳酸钠均为分析纯。水为蒸馏水，溶液为水溶液；对硝基酚标准溶液准确称取1.3910g对硝基酚，用0.2M的碳酸钠溶液定容至100ml，然后分别吸取1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、7ml、8ml和9ml，再用0.2M的碳酸钠溶液定容至100ml，配制成浓度分别为1μmol/ml、2μmol/ml、3μmol/ml、4μmol/ml、5μmol/ml、6μmol/ml、7μmol/ml、8μmol/ml和9μmol/ml的标准对硝基酚溶液。
酶液制备称取干曲1g，用80ml醋酸钠缓冲液浸泡，磁力搅拌20-30分钟，然后用醋酸钠缓冲液定容至100ml，然后用滤纸过滤，取滤液用于测定酶活；10mM对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖溶液准确称取3.031g对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖，用0.05M醋酸钠缓冲液(pH5.0)定容至1000ml，冷冻保存；0.2M碳酸钠碱性溶液准确称取21.198g无水碳酸钠，用蒸馏水溶解，定容至1000ml；测定方法1.对硝基酚标准曲线绘制吸取1ml标准对硝基酚溶液(做三个平行)，加入到试管中。再加入1ml醋酸钠缓冲液。在对照的空白样试管中加入2ml醋酸钠缓冲液(做三个平行)；在所有的试管中加入8ml碳酸钠溶液，振荡，在400nm处测定吸光度OD值；以OD值为x轴，对硝基酚的浓度为y轴，绘制标准曲线；2.酶液反应吸取经过适当稀释的酶液各1ml，分别加入1ml对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖底物溶液，振荡混匀，在37℃精确保温10分钟，然后加入8ml碳酸钠溶液，振荡混匀，以蒸馏水为对照，调零，在400nm处测定吸光度OD值。
3.酶液空白吸取经过适当稀释的酶液各1ml，然后加入8ml碳酸钠溶液，振荡混匀。再分别加入1ml对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖底物溶液。以蒸馏水为对照，调零，在400nm处测定吸光度OD值。
4.酶活计算选择酶反应液的OD值处于0.3-3.0之间的测定值为基础，计算在此条件下稀释液中的酶活。
样品中的对硝基酚酶活A(u/g)A=([Ax-Ao]×K+Co)×DfW×t]]>其中Ax样品酶液的吸光度OD值 Ao对应酶液的空白吸光度OD值K对硝基酚标准曲线的斜率 Co对硝基酚标准曲线的截距。
Df稀释倍数 W称取酶制剂的重量(g)t反应时间(分钟)测定结果表明，干曲的酶活可达126.12U/g，比国际上同类产品酶活44-56U/g，高出两倍。
具体实施例方式
实施例1α-半乳糖苷酶对仔猪生长性能的影响随着生物工程技术的不断发展和完善，畜牧业生产也发生了巨大的变化；动物营养与饲料加工学已不仅仅局限于新饲料原料的开发和畜禽营养需要量的研究，利用饲用酶制剂来提高饲料的利用率和降低饲料中抗营养因子的不利作用，已引起人们的重视；环保是当今世界普遍关注的热点问题，饲用酶制剂为解决畜牧生产所带来的环境污染问题提供了一条可行的途径；由于大豆含有棉子糖和水苏糖，造成胀气，导致胀气的主要原因是由于肠道中缺乏能够水解它们的酶-α-半乳糖苷酶；小肠不能利用α-半乳糖苷；它们进入大肠后，被大肠的微生物菌群发酵并利用，产生CO2，H2和少量的甲烷；由此产生一系列的胀气症状如恶心，下痢等；它们同时具有热稳定性，不能在加工过程中被破坏。在饲料原料中，作为蛋白质饲料主要来源的豆类籽实中含有相当高的α-半乳糖苷；利用酶制剂来提高饲料利用率已经成为当今的研究热点。虽然对于大豆寡糖的抗营养性还没有充分肯定，已经有一些研究学者开发并且研究相应酶制剂的实际效果。其中应用最广泛的酶是α-半乳糖苷酶；α-半乳糖苷酶可以水解α-半乳糖苷释放出末端的半乳糖苷残基。它可以水解在棉籽糖和水苏糖中的α-半乳糖苷连接键(Marx等，1998)；它水解棉籽糖和水苏糖的活性很高；本实施例目的在于检测α-半乳糖苷酶对仔猪生长性能和饲料消化率的影响；一.材料与方法1.酶制剂α-半乳糖苷酶由本试验室生产，为扬奇青霉发酵处提物，酶活174U/g；2.试验动物拟选用仔猪72头，体重15±0.34kg，公母各半，利用完全随机区组分为3组，每组6个重复，每个重复4头，公母分栏饲喂；3.试验日粮试验分为3个处理，即对照组(饲喂基础日粮)、α-半乳糖苷酶组1(饲喂基础日粮+0.01％酶制剂)和α-半乳糖苷酶组2(饲喂基础日粮+0.05％酶制剂)。基础日粮中含有3.17Mcal总能/kg日粮，粗蛋白18.07％，钙0.84％，磷0.64％赖氨酸1.1％(表1)；Cr2O3为测定饲料消化率的外源指示剂；表1试验日粮组成成分日粮组成(％) 对照组 α-半乳糖苷酶组1 α-半乳糖苷酶组2玉米 63.263.2 63.2豆粕 23.523.5 23.5小麦麸 10 10 10石粉 0.80.80.8磷酸氢钙 0.70.70.7食盐 0.30.30.3预混料11 1 1赖氨酸0.25 0.25 0.25Cr2O30.25 0.25 0.25α-半乳糖苷酶2- 0.01 0.05化学组成3总能(Mcal/kg) 3.17 3.17 3.17粗蛋白(％)18.07 18.07 18.07钙(％)0.84 0.84 0.84磷(％)0.64 0.64 0.64赖氨酸(％)1.1 1.11.1蛋+胱(％) 0.51 0.51 0.51苏氨酸(％)0.76 0.76 0.764.饲养管理试验于北京昌平流村进行，饲养期为28天，自由采食和饮水。舍内温度为18℃，湿度55％；每圈有单独的食槽和饮水器，每周进行称重和结料以计算饲料转化率，在实验第7天和第28天，每组取一头猪进行直肠采粪，烘干粉碎备用；5.实验室分析方法饲料和粪样的常规分析按照AOAC(1990)所提供的方法进行分析测定，氨基酸用氨基酸自动分析仪进行测定；6.数据统计分析试验所有数据根据Duncan’s多重比较用SPSS6.0(美国SPSS公司)软件进行分析处理；二.结果与讨论表2为α-半乳糖苷酶对仔猪生产性能的影响；表2对照组α-半乳糖 α-半乳糖SEM p苷酶组1 苷酶组2Day 0-7平均日增重(kg)0.46 0.53 0.43 0.0403 NS平均日采食量(kg) 1.06a0.93b1.02ab0.0529 0.0476饲料转化率2.29a1.91b2.13ab0.08730.0432Day 8-14平均日增重(kg)0.74 0.75 0.74 0.0329NS平均日采食量(kg) 1.22a1.17b1.19ab0.02130.0431饲料转化率1.62a1.04b1.31ab0.04310.0423Day 15-21平均日增重(kg)0.77 0.88 0.77 0.0896NS平均日采食量(kg) 1.66 1.60 1.60 0.0670NS饲料转化率2.15 2.04 2.09 0.1304NSDay 22-28平均日增重(kg)0.82 0.89 0.83 0.0367NS平均日采食量(kg) 1.84 1.79 1.79 0.0568NS饲料转化率2.28 2.01 2.16 0.1946NSDay 0-28平均日增重(kg)0.67b0.74a0.69b0.02010.0423平均日采食量(kg) 1.36a1.19b1.28ab0.04660.0356饲料转化率2.04a1.91b2.0ab0.06610.0463表3为α-半乳糖苷酶对饲料消化率的影响；表3对照组 α-半乳糖 α-半乳糖SEMp苷酶组1 苷酶组2Day 7(％)有机物 76.77b82.38a72.36b1.98 0.0342粗蛋白 72.75b82.64a69.43b2.12 0.0231总能 84.96b89.68a84.02b1.34 0.0346中性洗涤纤维 80.56b87.91b79.80b1.87 0.0341酸性洗涤纤维 79.89b84.50a77.14b1.24 0.0433钙37.45b60.01a34.61b3.21 0.0000磷39.24b61.56a36.91b2.24 0.0000Day 28(％)有机物77.06b81.40a76.48b1.12 0.0389粗蛋白74.64b82.78a71.90b1.76 0.0442总能 85.28b88.96a84.48b1.16 0.0396中性洗涤纤维 82.42 87.4881.40 1.87 NS酸性洗涤纤维 81.34a85.07a76.46b1.43 0.0432钙38.02b62.78a40.70b3.46 0.0000磷41.24b63.42a31.18c3.07 0.0000a，b同一行内上标不同的差异显著；由表2可以看出，在试验的第一和第二周，添加0.01％α-半乳糖苷酶使仔猪的平均饲料采食量和饲料转化效率比对照组均有所改善，平日采食量降低了12.26％，饲料转化效率改善了9.46％，差异显著(p＜0.05)；尽管α-半乳糖苷酶组1的饲喂效果要于其它两组，第三周和第四周的差异不显著；从全过程来看，α-半乳糖苷酶组1的平均日增重比对照组提高了10.47％，平均采日采食量降低了12.14％，饲料转化效率降低了6.4％，但是统计差显著(p＜0.05)；李德发等(2002)研究表明，在日粮中添加1％的水苏糖对断奶仔猪的生产性能没有显著影响；当日粮中水苏糖的添加量达到2％时，仔猪的平均日增重和平均日采食量明显下降；而本实施例试验表明，日粮添加α-半乳糖苷酶可以提高仔猪的生产性能；由表3可以看出，试验的第7天所测得的饲料成分消化率差异显著(p＜0.05)；在第28天，有机物、粗蛋白和总能的消化率差异显著(p＜0.05)；另外，α-半乳糖苷酶组1钙磷的消化率极显著地高于对照组和α-半乳糖苷酶组2(p＜0.01)；另外，日粮中添加的0.01％α-半乳糖苷酶会使日粮中氨基酸的消化率提高(p＜0.05)；这与Gdala等(1997)研究报道的结果相似；据其报道，在羽扇豆日粮中添加α-半乳糖苷酶会提高仔猪对于物质，能量和氨基酸的利用率；另外，在本实施例实验中仔猪的饲料转化效率一直保持较高的水平也可以证明这一现象，尽管差异不显著；这也表明仔猪完全可通提高采食量来获得充足的能量用以维持和生长。因此，α-半乳糖苷酶的添加效应在生产实验上体现不出来；我们以前的研究也表明日粮中的水苏糖会降低断奶仔猪的能量利用率，氮存留率和氨基酸的消化率(Zhang等，2001)；但是，日粮中添加0.05％α-半乳糖苷酶并没有表现出添加效应；这也许是酶制剂的副效应造成的，因为Irish等(1995)在肉子鸡上也发现了相似的结果；然而Veldman等(1992)的研究表明，当日粮中含有较高大豆寡糖(27.5g/kg)，添加α-半乳糖苷酶对饲料消化率不会产生正面效应；这种差异可能来自于日粮中大豆寡糖的含量和该寡糖的组成；从以上结果可以看出，仔猪日粮中添加0.01％的α-半乳糖苷酶可以提高饲料消化率和猪的生产性能。这与Gdala(1997)的报道相同。而当添加量增高到0.05％时，添加效果并不显著；三.结论日粮中添加适当的由扬奇青霉产生的α-半乳糖苷酶，可以降解α-半乳糖苷类化合物，降低其对仔猪所造成的负面影响，提高饲料消化率和仔猪的生产性能；1预混料组成每千克日粮含有vitamin A，5,512IU；vitamin D3，2,200IU；vitamin E，6.1IU；vitamin B，12,276ug；riboflavin，5.5mg；D-pantothenicacid，13.8mg；niacin，30.3mg；choline chloride，551mg；Mn，100mg；Fe，100mg；Ze，100mg；Cu，234mg；I，1.4mg；Se，0.3mg；Co，1.0mg.2α-半乳糖苷酶混入预混料中。3实测值表4为α-半乳糖苷酶对饲料氨基酸消化率的影响(Day 28)；表4对照组 α-半乳糖 α-半乳糖 SEM p苷酶组1 苷酶组2必需氨基酸(％)苏氨酸 76.22b83.72a71.30b1.340.0356半胱氨酸 80.78b86.66a78.07b2.010.0468缬氨酸 73.32b82.28a68.31b1.670.0362蛋氨酸 73.66b83.23a72.00b1.060.0023异亮氨酸 71.89b81.27a67.29b1.680.0092亮氨酸 78.63b85.63a75.85b1.260.0256色氨酸 74.85b83.12a70.79b1.680.0036苯丙氨酸 78.09b85.24a75.43b2.110.0442赖氨酸 79.55b87.26a76.82b1.640.0368组氨酸 95.28 96.40 94.601.63NS精氨酸 92.23 94.15 91.591.62NS非必需氨基酸(％)天冬氨酸 78.72b85.50a74.56b1.480.0426丝氨酸 82.35b87.42a78.15b1.890.0368谷氨酸 83.52 89.27 81.242.14NS甘氨酸 73.47b82.70a69.40b2.420.0468丙氨酸 69.56b81.21a66.28b1.850.0085脯氨酸 41.11b67.10a34.91b1.680.0013a，b同一行内上标不同的差异显著。
实施例2选择健康、出生体重相近的1日龄AA肉公鸡360只，随机分成三组即喂食玉米豆粕型不加酶组，加酶0.01％组，加酶0.05％组，每组处理6个重复，每重复20只鸡，为期42天。结果表明，添加α-半乳糖苷酶可以使肉仔鸡体重的日增重差异显著(p＜0.05)，降低料肉比差异显著(p＜0.05)，但是对饲料采食量没有影响；因此，日粮中添加α-半乳糖苷酶，可以改善肉子鸡的生产性能提高畜禽对饲料的利用效率一直是动物营养学非常关注的研究领域，尤其在当前饲料原料比较紧缺的情况下如何提高饲料的利用价值更值得重视；阻碍畜禽对饲料充分利用的一个重要因素是饲料原料中含有多种多样的抗营养因子；这些抗营养因子通过干扰畜禽的正常消化和代谢功能而影响动物生产潜能的充分发挥，降低饲料的利用效率；已经发现在豆类籽实和饼粕饲料中含有较高的α-半乳糖苷；部分研究报告指出α-半乳糖苷是一种抗营养因子；本实施例的目的是研究添加α-半乳糖苷酶制剂对肉仔鸡生长性能的影响；一.材料与方法1.试验动物及分组试验选择健康、出生体重相近的1日龄AA肉公鸡360只，随机分成3个处理(玉米豆粕型不加酶组，加酶0.01％组，加酶0.05％组，每个处理6个重复，每重复20只鸡，为期42天；2.试验日粮参照NRC(1994)肉鸡营养需要配制试验日粮，以粉料形式饲喂。试验基础日粮组成及营养水平见表5；表5试验日粮组成及营养水平原料组成(％) 0-3周 3-6周 3-6周玉米 53 56.64 56.64豆粕 37.15 34.2 34.2大豆油3 4.5 4.5鱼粉 2.58- -石粉 1.371.5 1.5磷酸氢钙 1.251.45 1.45食盐 0.3 0.3 0.31预混料 1 1 1蛋氨酸0.220.22 0.22赖氨酸0.130.19 0.19总计 100 100 100营养水平代谢能2.933.00 3.00
(Mcal/kg)2粗蛋白(％)22.520.3 20.32钙(％)1.1 1.04 1.043有效磷(％)0.450.37 0.373赖氨酸(％)1.228 1.0631.0633蛋氨酸(％)0.560.40 0.401预混料为每公斤日粮提供维生素A14400IU；维生素D31800IU；维生素E20mg；维生素K1.5mg；维生素B12.25mg；维生素B29mg；泛酸钙15mg；烟酸36mg；维生素B63mg；生物素0.15mg；维生素B120.025mg；叶酸75mg；胆碱100mg；锰60mg；锌75mg；铁100mg；铜9mg；碘0.35mg；硒0.3mg；*氨基酸由日本味之素提供。2实测值，3计算值；3.饲养管理试验鸡采用阶梯笼养，每笼4只。第一周用红外灯取暖，室温控制在34℃-36℃。以上。以后逐步降温，每周降2℃。0-3周每日光照24小时，4-6周每日光照20小时。第7、14天分别滴鼻点眼进行传支120和新城疫弱毒苗及法氏囊的免疫，21、28天分别饮水免疫传支52和新城疫弱毒苗二联苗及传染性法式囊；4.样品的收集、保存及预处理5.测定指标各阶段耗料量、日采食量(ADFI)、日增重(ADG)和饲料转化效率(F/G)；6.统计分析试验数据用SPSS(6.0)软件进行方差分析和等肯氏多重比较；二.试验结果与分析1.不同处理组的体重及日增重见表6表6各处理组的体重及日增重玉米组 WS+ WS+SEM P值0.01％0.05％体重(g)1日龄 41.641.5 41.2 0.244 0.8113周龄 757.7a794.4b805.1b8.262 0.00336周龄 1873a1895b1898b9.773 0.0394平均日增重(g)0-3周 34.1a35.9b36.4b0.395 0.00294-6周 54.0a55.3b55.2b0.159 0.03830-6周 44.1a45.2b45.3b0.243 0.9334平均日采食量(g)0-3周 48 48 480.035 0.5074-6周 106 108107 3.067 0.9670-6周 76 76 761.185 0.943饲料/增重0-3周 1.42a1.36b1.34b0.015 0.0034-6周 1.89a1.73b1.75b0.043 0.610-6周 1.78a1.64b1.69b0.036 0.0462注在同一行含不同上标者表示差异显著(p＜0.05)。1WS+0.05％小麦日粮加
0.05％木聚糖酶由表6可知，在0-6周，采食加酶日粮的鸡只的3和6周龄体重比对照组提高了4.5％、0-6周龄平均日增重提高了2.5％，差异显著(p＜0.05)；在整个试验中，日粮加酶处理组与不加酶组的鸡只相比，体重和日增重都有所增加，差异显著(p＜0.05)；2.不同处理组的平均日采食量各阶段中各处理组的采食量无显著性和规律性的变化；3.不同处理组的饲料转化效率由表6可知，在0-3周和4-6周，采食加酶日粮的各处理组的饲料/增重极显著的低于饲喂基础日粮处理组，差异显著(p＜0.05)；整体从全期结果来看，采食加酶日粮各组的饲料/增重低于饲喂不加酶小麦组，平均降低了5％，差异显著(p＜0.05)；3.结论本实施例的结果表明，在日粮的应用α-半乳糖苷酶，可以改善肉子鸡的生产性能。
实施例3α-半乳糖苷酶对肉仔鸡生长性能的影响本实施例选择健康、出生体重相近的1日龄AA肉公鸡360只，随机分成3个处理(玉米豆粕型不加酶组，加酶0.01％组，加酶0.05％组，每个处理6个重复，每重复20只鸡，为期42天。结果表明，添加α-半乳糖苷酶可以使增加肉仔鸡的日增重差异显著(p＜0.05)，降低料肉比差异显著(p＜0.05)，但是对饲料采食量没有影响；因此，日粮的应用α-半乳糖苷酶，可以改善肉子鸡的生产性能；提高畜禽对饲料的利用效率一直是动物营养学非常关注的研究领域，尤其在当前饲料原料比较紧缺的情况下如何提高饲料的利用价值更值得重视。阻碍畜禽对饲料充分利用的一个重要因素是饲料原料中含有多种多样的抗营养因子。这些抗营养因子通过干扰畜禽的正常消化和代谢功能而影响动物生产潜能的充分发挥，降低饲料的利用效率。已经发现在豆类籽实和饼粕饲料中含有较高的α-半乳糖苷。部分研究报告指出α-半乳糖苷是一种抗营养因子。本试验的目的是研究添加α-半乳糖苷酶制剂对肉仔鸡生长性能的影响；一.材料与方法1.试验动物及分组试验选择健康、出生体重相近的1日龄AA肉公鸡360只，随机分成3个处理(玉米豆粕型不加酶组，加酶0.01％组，加酶0.05％组，每个处理6个重复，每重复20只鸡，为期42天；2.试验日粮参照NRC(1994)肉鸡营养需要配制试验日粮，以粉料形式饲喂。试验基础日粮组成及营养水平见表7；
表7试验日粮组成及营养水平原料组成(％) 0-3周 3-6周 3-6周玉米 53 56.64 56.64豆粕 37.15 34.234.2大豆油 3 4.5 4.5鱼粉 2.58- -石粉 1.371.5 1.5磷酸氢钙 1.251.451.45食盐 0.3 0.3 0.31预混料1 1 1蛋氨酸 0.220.220.22赖氨酸 0.130.190.19总计 100 100 100营养水平代谢能 2.933.003.00(Mcal/kg)2粗蛋白(％)22.520.320.32钙(％)1.1 1.041.043有效磷(％)0.450.370.373赖氨酸(％)1.228 1.063 1.0633蛋氨酸(％)0.560.400.401预混料为每公斤日粮提供维生素A14400IU；维生素D31800IU；维生素E20mg；维生素K1.5mg；维生素B12.25mg；维生素B29mg；泛酸钙15mg；烟酸36mg；维生素B63mg；生物素0.15mg；维生素B120.025mg；叶酸75mg；胆碱100mg；锰60mg；锌75mg；铁100mg；铜9mg；碘0.35mg；硒0.3mg；*氨基酸由日本味之素提供。2实测值，3计算值；3.饲养管理试验鸡采用阶梯笼养，每笼4只。第一周用红外灯取暖，室温控制在34℃-36℃。以上；以后逐步降温，每周降2℃。0-3周每日光照24小时，4-6周每日光照20小时；第7、14天分别滴鼻点眼进行传支120和新城疫弱毒苗及法氏囊的免疫，21、28天分别饮水免疫传支52和新城疫弱毒苗二联苗及传染性法式囊；4.样品的收集、保存及预处理；
5.测定指标各阶段耗料量、日采食量(ADFI)、日增重(ADG)和饲料转化效率(F/G)；6.统计分析试验数据用SPSS(6.0)软件进行方差分析和等肯氏多重比较；二.试验结果与分析1.不同处理组的体重及日增重表8为各处理组的体重及日增重；表8玉米组 WS+0.01％WS+0.05％ SEM P值体重(g)1日龄41.6 41.5 41.20.2440.8113周龄757.7a794.4b805.1b8.2620.00336周龄1873a1895b1898b9.7730.0394平均日增重(g)0-3周34.1a35.9b36.4b0.3950.00294-6周54.0a55.3b55.2b0.1590.03830-6周44.1a45.2b45.3b0.2430.9334平均日采食量(g)0-3周48 48 48 0.0350.5074-6周106108 107 3.0670.9670-6周76 76 76 1.1850.943饲料/增重0-3周1.42a1.36b1.34b0.0150.0034-6周1.89a1.73b1.75b0.0430.610-6周1.78a1.64b1.69b0.0360.0462*在同一行含不同肩标者表示差异显著(p＜0.05)；1WS+0.05％小麦日粮加0.05％木聚糖酶；由表8可知，在0-6周，采食加酶日粮的鸡只的3和6周龄体重比对照组提高了4.5％、0-6周龄平均日增重提高了2.5％，差异显著(p＜0.05)；在整个试验中，日粮加酶处理组与不加酶组的鸡只相比，体重和日增重都有所增加，差异显著(p＜0.05)；2.不同处理组的平均日采食量各阶段中各处理组的采食量无显著性和规律性的变化；3.不同处理组的饲料转化效率由表8可知，在0-3周和4-6周，采食加酶日粮的各处理组的饲料/增重极显著的低于饲喂基础日粮处理组，差异显著(p＜0.05)；整体从全期结果来看，采食加酶日粮各组的饲料/增重低于饲喂不加酶小麦组，平均降低了5％，差异显著(p＜0.05)；4.结论本实施例试验的结果表明，在日粮的应用α-半乳糖苷酶，可以改善肉子鸡的生产性能。
权利要求
1.一种可高产α-半乳糖苷酶的扬奇青霉菌株，其特征在于，为一种可高产α-半乳糖苷酶的青霉菌，孢子灰绿色，于2001年12月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会，其保藏号为CGMCC No.0668。
2.按权利要求1所述的可高产α-半乳糖苷酶的扬奇青霉菌株，其特征在于，该可高产α-半乳糖苷酶的扬奇青霉菌株的生物学特性为菌落在麦芽汁平板上生长适度，25℃，7天，直径18-22mm，有辐射状皱纹；质地绒状；边缘白色，中部灰绿色，反面橙黄色；分生孢子梗发生于气生菌丝，50-200×2.0-2.5微米，壁平滑；帚状枝不规则，叉开，单轮生或双轮生，双轮生者，每轮埂基2-4个，在顶端埂基下间生分枝；埂基8-12×2.5-3.0微米，顶端稍膨大；瓶埂安瓿型，每轮(2-)4-6(8)个，5.5-9(12)×2.5-3.0微米；分生孢子球形，2.0-3.0微米，粗糙，分生孢子链短。
3.权利要求1所述可高产α-半乳糖苷酶的扬奇青霉菌株在固态发酵制备饲用α-半乳糖苷酶中的应用。
全文摘要
本发明涉及的可高产α－半乳糖苷酶的扬奇青霉菌株，孢子灰绿色，于2001年12月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会，保藏号CGMCC No.0668；生物学特性菌落在麦芽汁平板上生长适度，25□，7天，直径18－22mm，有辐射状皱纹；质地绒状；边缘白色，中部灰绿色，反面橙黄色；分生孢子梗发生于气生菌丝，50－200×2.0－2.5微米，壁平滑；帚状枝不规则，叉开，单轮生或双轮生，双轮生者，每轮埂基2－4个，在顶端埂基下间生分枝；埂基8－12×2.5－3.0微米，顶端稍膨大；瓶埂安瓿型，每轮(2－)4－6(8)个，5.5－9(12)×2.5－3.0微米；分生孢子球形，2.0－3.0微米，粗糙，分生孢子链短；可应用于固态发酵制备饲用α－半乳糖苷酶。
文档编号C12N9/40GK1446905SQ0211632
公开日2003年10月8日 申请日期2002年3月26日 优先权日2002年3月26日
发明者李德发, 潘宝海, 陆文清, 谯仕彦, 朴香淑, 张丽英, 邢建军, 胥学新 申请人:中国农业大学