专利名称：测定纳豆激酶标准活性值的方法
技术领域：
本发明涉及一种测定纳豆激酶标准活性值的方法，特别是指一种可以针对一未知活性的纳豆激酶，能够正确地获得其标准活性值的测定纳豆激酶标准活性值的方法。
背景技术：
近年来，纳豆激酶(Nattokinase)由于被证实具有抗血栓与降低人类脑溢血发生机率的功效，所以造成其需求量激增，有许多的厂商也因此积极地加入生产研发的行列，其所生产制造出来的纳豆激酶的品质好坏，便成为重要的课题，其中，纳豆激酶的活性值即成为一可以作为判断品质基准的依据。
所谓纳豆激酶的活性值基本上即是代表每单位体积的纳豆激酶样品中具有的纳豆激酶的浓度，应该是一种相对值的概念，而非绝对值的概念，日本纳豆协会为了规范坊间纳豆激酶的活性值，公布了一种可以测试出纳豆激酶的标准活性值的方法(以下称标准测定法)，该方法主要是取待测纳豆激酶的样本与一空白样本做比较，最后利用公式FU/g＝(AT-AB)/0.01×1/60×1/0.1×D，其中AT为待测纳豆激酶样本对于OD275的吸光值，AB为空白样本对于OD275吸光值，D为样品稀释倍数，计算出纳豆激酶的标准活性值，并将其定义成1单位活性(FU)为每克(g)每分钟使OD275吸光值增加0.01的酶量。
但由于日本纳豆协会有接受坊间人员付费而进行检定纳豆激酶的标准活性值的业务，其检测报告中会大致上将其测试方法(即所谓标准测定法)附给坊间人员，但因为其方法并没有详尽告知细节，所以坊间人员若是需要自行测试某一未知活性的纳豆激酶时，即便是依据日本纳豆协会所提供的标准测定法来进行测试，也无法获得纳豆激酶的正确标准活性值，其中，主要原因是在测试纳豆激酶的活性过程中的稀释步骤，针对不同的稀释度将会影响其测试出来的活性值的结果，例如请参照图1所示，若是利用一经过日本纳豆协会测试过并标示为4000单位活性(FU)的纳豆激酶作为实验对象，然后再依据不同的稀释度制作出多个待测样品，利用日本纳豆协会所检附的标准测定法进行实验后，可以获得多个单位活性(FU)值，绘制成如图1所示的曲线，可以发现当此纳豆激酶的稀释度大约在70倍时，其所测试出来的活性值才会等于日本纳豆协会所测试出来的标准活性值；同样的，再利用另一经过日本纳豆协会测试过并标示为8000单位活性(FU)的纳豆激酶作为实验对象，同样依据不同的稀释度制作出多个待测样品，利用日本纳豆协会所检附的标准测定法进行实验后，也可以获得多个单位活性(FU)值，绘制成如图2所示的曲线，可以发现当此纳豆激酶的稀释度大约在160倍时，其所测试出来的活性值才会等于日本纳豆协会所测试的标准活性值。
由上述的实验可以得知，仅利用日本纳豆协会所提供的标准测定法所获得的活性值，仍旧会依据不同的纳豆激酶的稀释度而有所差异，这样若是针对一未知活性值的纳豆激酶而言，由于同时无法知到其标准活性值以及稀释度，所以此方法根本无法获知其真正的标准活性值为何？每每仅能将所欲测试活性值的纳豆激酶样本送交日本纳豆协会测试，才能得知其正确的标准活性值，这无异是造成纳豆激酶成本无法下降的主要原因。
发明内容
本发明的目的在于提供一种测定纳豆激酶标准活性值的方法，可以针对一未知活性的纳豆激酶，自行测定出其标准活性值。
为达上述目的，本发明提供了一种测定纳豆激酶标准活性值的方法，该方法包含下列步骤准备一标准活性值对应曲线；取一未知活性值的纳豆激酶稀释成多个样本，并分别以一标准测定法测试后，可以分别得知一活性值，获得一样本曲线；将样本曲线与标准活性值对应曲线叠合后，产生一交点；以及该交点所对应的活性值即为纳豆激酶的标准活性值。
根据本发明的优选具体实施方案，所述标准测定法的步骤包含取一纳豆激酶的样本与一空白样本做比较；以及利用公式FU/g＝(AT-AB)/0.01×1/60×1/0.1×D获得纳豆激酶的一标准活性值，其中AT为该纳豆激酶的样本对于OD275的吸光值，AB为空白样本对于OD275的吸光值，D为该纳豆激酶的样本的稀释倍数，获得每克(g)每分钟使OD275吸光值增加0.01的酶量。
根据本发明的优选具体实施方案，所述标准活性值对应曲线是由多个分别具有标准活性值的纳豆激酶依据所述标准测定法实验后而获得。
根据本发明的优选具体实施方案，该未知活性值的纳豆激酶稀释成多个样本的稀释度间隔值最好不大于100倍，以获得较佳的精度。
由上述可知，根据本发明提供的测定纳豆激酶标准活性值的方法，可解决现有技术中的困扰，在不需要增设任何实验设备与增加其它实验成本的状况下，即能测定一未知活性的纳豆激酶的标准活性值，具有产业价值。
图1为标准活性值为4000FU的纳豆激酶稀释成多个样本后，经由标准测定法测试的实验数据图。
图2为标准活性值为8000FU的纳豆激酶稀释成多个样本后，经由标准测定法测试的实验数据图。
图3为本发明的测定纳豆激酶标准活性值的方法的流程方块示意图。
图4为标准活性值对应曲线的实验数据图。
图5为一未知活性值的纳豆激酶的样本曲线与标准活性值对应曲线叠合的实验数据图。
图中主要符号说明20标准活性值对应曲线30样本曲线P交点具体实施方式
请参照图3所示，为本发明的测定纳豆激酶标准活性值的方法的流程示意图。
首先，必须先准备一标准活性值对应曲线，针对这一目标，必须先准备多个分别具有标准活性值的纳豆激酶，也就是说，这些多个纳豆激酶均由日本纳豆协会所测定后的其分别的标准活性值，再依据标准测定法实验后获得其相对应的稀释值，形成一标准活性值对应曲线；举例而言，请参照图4所示，可以先准备标准活性值分别为4000FU、8000FU、12000FU、16000FU、20000FU的纳豆激酶样本，但无须以此为限，若是提供更多的纳豆激酶样本更可以提高其正确率，这些纳豆激酶样本的标准活性值均需经由日本纳豆协会所测定的，经过标准测定法实验后可以获得其相对应的稀释值，即可以绘制成一标准活性值对应曲线20。
接下来，针对一未知活性值的纳豆激酶，将其稀释成多个样本，其稀释度间隔值尽量越小越好，这样可以获得较佳的精度，优选地，多个样本的稀释度间隔值不大于100倍，并分别以标准测定法测试每个样本后，可以分别得知其相对的活性值，并绘制成一样本曲线，其中，标准测定法即为前述日本纳豆协会所公布的测定纳豆激酶的标准活性值的方法；举例而言，请参照图5所示，可以将一未知活性值的纳豆激酶，以稀释度间隔值为50倍为例，稀释成9个样本，也就是说，将9个样本中分别以100倍、150倍、…、450倍与500倍的稀释度等进行稀释，然后将每一个样本由标准测定法测试后即可以得到多个活性值，以上述为例，其活性值分别可为5467FU、7200FU、12000FU、15333FU、15600FU、17276FU、20800FU、21600FU与26600FU等，即可以绘制出如图5中的样本曲线30。
再者，将样本曲线30与标准活性值对应曲线20叠合在一起，如图5所示，两条曲线叠合后可以产生至少一交点P，该交点P所对应的活性值即为该未知活性的纳豆激酶的标准活性值，以上述为例，两条曲线的交点P所对应的活性值(约12000FU)即为该未知活性的纳豆激酶的标准活性值。
依据本发明上述的方法，即可在不需要增设任何实验设备与增加其它实验成本的状况下，藉由所预先准备的标准活性值对应曲线与其样本曲线的叠合，测定一未知活性的纳豆激酶的标准活性值，解决了现有技术中在无法同时得知一未知活性的纳豆激酶的稀释度以及其标准活性值时，无法获得其标准活性值的困扰，可见本发明实为具有产业价值的方法。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，上述实施例仅用来说明而非用以限定本发明的保护范围。凡依本发明内容所作的均等变化与修饰，皆应属于本发明的涵盖范围。
权利要求
1.一种测定纳豆激酶标准活性值的方法，该方法包含下列步骤准备一标准活性值对应曲线；取一未知活性值的纳豆激酶稀释成多个样本，并分别以标准测定法测试后，可以分别得知一活性值，获得一样本曲线；将该样本曲线与该标准活性值对应曲线叠合后，产生一交点；以及该交点所对应的活性值即为该纳豆激酶的标准活性值。
2.如权利要求1所述的测定纳豆激酶标准活性值的方法，其中该标准测定法的步骤包含取一纳豆激酶的样本与一空白样本做比较；以及利用公式FU/g＝(Aτ-AB)/0.01×1/60×1/0.1×D获得该纳豆激酶的标准活性值，其中Aτ为该纳豆激酶的样本对于OD275的吸光值，AB为空白样本对于OD275的吸光值，D为该纳豆激酶的样本的稀释倍数，获得每克每分钟使OD275吸光值增加0.01的酶量。
3.如权利要求1所述的测定纳豆激酶标准活性值的方法，其中该标准活性值对应曲线是由多个分别具有标准活性值的纳豆激酶依据标准测定法实验后而获得。
4.如权利要求1所述的测定纳豆激酶标准活性值的方法，其中取该未知活性值的纳豆激酶稀释成多个样本的稀释度间隔值不大于100倍。
全文摘要
本发明涉及一种测定纳豆激酶标准活性值的方法，其步骤包含准备一标准活性值对应曲线；取一未知活性值的纳豆激酶稀释成多个样本，并分别以一标准测定法测试后，可以分别得知一活性值，获得一样本曲线；将样本曲线与标准活性值对应曲线叠合后，产生一交点；该交点所对应的活性值即为纳豆激酶的标准活性值。
文档编号C12Q1/25GK1936015SQ20051010538
公开日2007年3月28日 申请日期2005年9月23日 优先权日2005年9月23日
发明者吕志翼, 郑俊明 申请人:人宇生物科技股份有限公司